Legăturile peptidice: definiție, prezență și importanță biologică

Legătura peptidică este o legătură covalentă amida care leagă resturile de aminoacizi din peptide și proteine. Aceste legături formează scheletul molecular continuu al lanțurilor peptidice, păstrând o anumită ordine a aminoacizilor și permițând, în același timp, întregului lanț să adopte diverse structuri tridimensionale.

Legăturile peptidice reprezintă unul dintre elementele fundamentale ale structurii peptide. Înțelegerea chimiei acestora ajută la explicarea modului în care aminoacizii individuali pot forma molecule mai mari, cu o secvență și o structură strict definite.

Deși definiția de bază este relativ simplă, chimia legăturii peptidice prezintă câteva caracteristici importante. Electronii din cadrul grupării amidice sunt dispuși astfel încât legătura carbon-azot seamănă parțial cu o legătură dublă. Acest lucru limitează posibilitatea de rotație liberă în jurul legăturii peptidice, dar nu face ca întregul peptid sau proteina să devină o moleculă rigidă. Alte legături din scheletul molecular păstrează o mai mare libertate de rotație, ceea ce permite lanțurilor peptidice să se îndoaie și să se plieze.

Legăturile peptidice pot fi analizate din mai multe perspective științifice. Chimiștii studiază structura electronică și geometria acestora. Biologii moleculari analizează modul în care sunt formate de către ribozomi și alte sisteme biologice. Biologii structurali examinează modul în care geometria acestor legături influențează arhitectura proteinelor. Biochimiștii, pe de altă parte, studiază modul în care enzimele rup selectiv legăturile peptidice în timpul procesării și degradării proteinelor.

Aceste distincții ajută la înțelegerea modului în care proteinele pot păstra o anumită secvență de aminoacizi, pot adopta structuri complexe, pot fi formate în cadrul unor procese biologice controlate și, ulterior, pot fi transformate sau degradate. Cercetările privind structura electronică, geometria peptidelor, cataliza ribozomală, sinteza proteinelor și hidroliza enzimatică oferă informații complementare despre aceste procese. [1] [2] [3]

Ce este legătura peptidică?

Definiția chimică a legăturii peptidice

Legătura peptidică este legătură amidaică între grupul provenit din grupul carboxil al unui aminoacid și grupul provenit din grupul amino al unui alt aminoacid. În structura tipică a unei proteine, se leagă atomul de carbon al grupului carbonil și atomul de azot al următoarei resturi de aminoacid.

Fragmentul cel mai des prezentat are următoarea formă:

–C(=O)–NH–

Fragmentul C=O este grupă carbonilică, în timp ce legătura C–N este legătura la care ne referim de obicei când vorbim concret despre legătura peptidică. Împreună, aceste atome și împrejurimile lor imediate formează așa-numita grupul peptidic sau grupul amida.

Această distincție este importantă, deoarece structura completă a grupului peptidic conține mai multe legături diferite. Legătura carbon-oxigen nu este cea care leagă între ele două resturi de aminoacizi. Această funcție este îndeplinită de legătura amidică carbon-azot.

Atunci când un aminoacid se leagă de altul, atomul de carbon al grupării carbonilice legat de o singură restă se leagă covalent de atomul de azot legat de următoarea restă. Repetarea acestui model duce la formarea scheletului unui lanț peptidic tipic.

Studiile privind structura electronică analizează, printre altele, interacțiunea perechii libere de electroni a azotului cu sistemul carbonilic învecinat, ceea ce permite explicarea motivului pentru care această legătură diferă de o legătură simplă carbon–azot obișnuită, care se rotește liber. [1]

De ce legătura peptidică este o legătură covalentă?

Legătura peptidică este covalente, deoarece atomii legați împărtășesc electroni.

Nu este vorba nici de o interacțiune ionică între două aminoacizi încărcați, separați unul de celălalt, nici de o legătură de hidrogen care menține în apropiere diferite părți ale lanțului ondulat.

Tocmai legătura covalentă asigură continuitatea chimică a secvenței de aminoacizi. Resturile rămân parte a aceluiași lanț până când o reacție chimică nu modifică modul în care sunt legate între ele.

Această distincție devine deosebit de importantă atunci când se discută despre plierea și déplierea proteinelor. Lanțul peptidic se poate îndoi, își poate schimba conformația, poate pierde o parte din interacțiunile care îi stabilizează structura și poate chiar suferi o desfășurare semnificativă fără a fi necesară ruperea legăturilor peptidice care îi mențin secvența primară.

Totuși, „covalent” nu înseamnă „indestructibil”.

Enzimele și condițiile chimice adecvate pot determina scindarea legăturilor peptidice. Totuși, această scindare este o reacție chimică care modifică modul în care atomii sunt legați între ei, și nu doar o schimbare a formei moleculei.

Studiile structurale ale uneia dintre proteinazele aspartilice arată modul în care enzima poate organiza în mod corespunzător substratul care conține o legătură peptidică și o moleculă de apă, într-un mod esențial pentru hidroliză. [4]

Caracterul parțial al legăturii duble și rezonanța

Legătura peptidică C–N este adesea reprezentată în formule ca o singură linie, însă distribuția reală a electronilor este mai complexă.

O pereche liberă de electroni a atomului de azot poate participa la sistemul electronic al grupării carbonilice învecinate. Delocalizarea electronilor face ca legătura C–N să capete caracterul parțial al legăturii duble.

Acest fenomen este adesea explicat prin intermediul structurilor de rezonanță.

Structurile rezonanțe reprezintă modalități alternative de reprezentare a distribuției electronilor în aceeași moleculă. Acestea nu trebuie interpretate ca forme distincte ale moleculei, care se transformă rapid una în cealaltă.

În mod similar, caracterul parțial al legăturii duble nu înseamnă că legătura peptidică este o simplă legătură simplă pentru un anumit procent din timp și o simplă legătură dublă pentru restul timpului.

Structura electronică reală rezultă din delocalizarea electronilor în cadrul întregii grupe amide.

În studiul său numeric, Fedorov a analizat contribuția rezonanței la determinarea ordinului legăturii peptidice. Valorile numerice detaliate depind de metoda utilizată pentru analiza structurii electronice. Totuși, pentru o înțelegere generală, cea mai importantă concluzie este că interacțiunea dintre sistemul electronic al azotului și cel al grupării carbonil este responsabilă pentru o parte din proprietățile atipice ale legăturii C–N. [1]

De ce este limitată rotația în jurul legăturii peptidice?

Caracterul parțial al legăturii duble are o consecință structurală importantă: rotația în jurul legăturii C–N de tip amidic este mai limitată decât rotația în jurul unei legături tipice simple carbon–azot.

Acest lucru nu înseamnă însă că proteinele nu se pot îndoi sau plia.

Scheletul peptidic conține, de asemenea, alte legături în jurul cărora este posibilă rotația. Lanțul proteic este alcătuit, așadar, din grupe peptidice repetitive, relativ rigide, legate între ele prin alte legături ale scheletului, care se caracterizează printr-o mai mare flexibilitate conformațională.

Combinația dintre aceste restricții și posibilitățile de rotație contribuie la o diversitate imensă a structurilor tridimensionale pe care le pot adopta peptidele și proteinele.

Planitatea aproximativă nu înseamnă o structură perfect plană

Delocalizarea electronilor favorizează geometria aproximativ plană a grupului peptidic și limitează rotația în jurul legăturii amida C–N.

Cu toate acestea, structurile moleculare reale pot devia ușor de la planul matematic ideal.

Improta și colaboratorii săi au combinat calculele din mecanica cuantică cu analiza structurilor cristaline ale peptidelor și proteinelor. Rezultatele au evidențiat abateri mici, sistematice, dependente de geometria locală a scheletului. [2]

Prin urmare, este corect să afirmăm că grupările peptidice sunt aproximativ plane, însă afirmația că fiecare legătură peptidică din orice peptidă sau proteină este perfect plană ar fi o simplificare excesivă.

Acesta este un bun exemplu al diferenței dintre un model educațional util și comportamentul mai detaliat al structurilor moleculare reale.

Unde se găsesc legăturile peptidice?

În structura peptidelor și a proteinelor

Legăturile peptidice se formează între resturile de aminoacizi învecinate în lanțurile peptidice și proteice tipice.

Împreună cu atomii din jur, ele formează un model repetitiv scheletul moleculei. Lanțurile laterale ale aminoacizilor se extind dincolo de acest schelet și conferă fiecărei resturi proprietăți chimice suplimentare.

O proteină poate fi formată dintr-un singur lanț peptidic sau din mai multe lanțuri unite într-un complex molecular mai mare. Fiecare dintre acestea are propriile legături scheletice.

Diferite lanțuri se pot lega între ele prin interacțiuni ne-covalente sau prin legături covalente suplimentare. Astfel de legături nu trebuie considerate în mod automat ca fiind legături peptidice.

Sinteza chimică a inhibitorului de tripsină pancreatică bovină (BPTI) ilustrează bine diferența dintre formarea scheletului peptidic și apariția punților disulfidice suplimentare. Cercetătorii au obținut mai întâi un material liniar, pe care l-au supus apoi oxidării și caracterizării. Studiul separă astfel structura lanțului de organizarea structurală ulterioară. [5]

Legăturile peptidice determină continuitatea secvenței primare

Ordinea reziduurilor de aminoacizi dintr-un peptid sau dintr-o proteină este denumită structura primară.

Legăturile peptidice asigură continuitatea covalentă fundamentală care menține această secvență.

De exemplu, secvența:

Ala–Gly–Ser

conține aceleași trei tipuri de aminoacizi ca și:

Ser–Gly–Ala

Totuși, acestea nu sunt aceleași secvențe peptidice.

Poziția fiecărui rest în raport cu legăturile peptidice este diferită.

Prin urmare, simpla listă a aminoacizilor prezenți în probă nu este suficientă pentru identificarea peptidului. Este necesar să se cunoască și ordinea acestora, precum și modul în care sunt legați între ei.

În peptidele liniare și ciclice

Un lanț peptidic deschis tipic are două capete, denumite Capătul N i C-sfârșit.

Capătul N corespunde unui capăt al scheletului peptidic, iar capătul C — celuilalt. Secvențele peptidice se notează, în mod obișnuit, de la capătul N spre capătul C.

Peptid ciclic de tip „head-to-tail”, adică închis prin îmbinarea capetelor lanțului, conține o legătură suplimentară a scheletului care formează un inel.

Totuși, nu toate peptidele ciclice se închid în același mod. Inelul se poate forma și cu participarea lanțului lateral, iar unele molecule conțin mai mult de un tip de legătură transversală.

Termenul ciclic deci descrie o caracteristică a arhitecturii moleculei, și nu un singur mod universal de a o asambla.

Kalata B1 este un exemplu concret de peptidă al cărei schelet ciclic a fost confirmat, printre altele, prin studii de scindare enzimatică, analiza secvenței și structura moleculară. Molecula conține, de asemenea, punți disulfurice. Aceste legături suplimentare sulf-sulf diferă din punct de vedere chimic de legăturile amidice care leagă resturile din scheletul peptidic. [6]

Legăturile peptidice și legăturile izopeptidice

În structura tipică a unei proteine, legăturile peptidice unesc grupările amino principale și grupările derivate din grupările carboxilice.

Legătura amida, la formarea căreia participă grupa funcțională a lanțului lateral al unui aminoacid, este adesea denumită legătură izopeptidică.

Prin urmare, cea mai importantă regulă este aceea de a stabili care atomi au fost efectiv uniți între ei.

Simpla prezență a unei legături amidice nu înseamnă în mod automat că aceasta se află într-un schelet peptidic tipic. În același timp, nu orice legătură transversală dintr-un peptid sau dintr-o proteină este o legătură amidică — punțile disulfidice și alte modificări covalente au o chimie diferită.

Pentru începători, punctul de plecare cel mai util îl reprezintă legăturile peptidice obișnuite prezente în scheletul molecular. Legăturile mai specializate pot fi apoi considerate ca variante diferite ale organizării moleculare.

Câte legături peptidice există în lanț?

Un singur lanț deschis, fără ramificații, care conține Fiecare rest de aminoacid are n − 1 legături peptidice în schelet.

Aceasta înseamnă că:

• dipeptidul are 2 resturi și o legătură peptidică;
• tripeptidul are 3 resturi și 2 legături peptidice;
• tetrapeptida are 4 resturi și 3 legături peptidice;
• pentapeptida are 5 resturi și 4 legături peptidice;
• un lanț deschis care conține 10 resturi are 9 legături peptidice.

Această relație decurge direct din modul de legare a moleculei: fiecare grup funcțional adăugat prelungește lanțul existent printr-o legătură scheletică suplimentară.

Corespondentul său lanț ciclic de tip „head-to-tail” conține n legături peptidice în schelet, deoarece legătura suplimentară închide inelul.

Aceste ipoteze sunt însă importante. Ramificațiile, legăturile atipice ale lanțurilor laterale, prezența mai multor lanțuri, legăturile izopeptidice sau elementele structurale ale scheletului, altele decât cele amidice, necesită o analiză mai detaliată.

Prin urmare, numărul de resturi nu este întotdeauna suficient pentru a determina toate legăturile covalente prezente într-un peptid sau o proteină complexă.

Cum leagă legăturile peptidice aminoacizii?

De la aminoacizii liberi la resturile de aminoacizi

Un aminoacid liber și restul corespunzător din peptidă sunt legați între ele, dar nu descriu exact aceeași stare chimică.

Atunci când un aminoacid este încorporat într-un peptid, grupările sale funcționale participă la legăturile care formează lanțul.

De exemplu, combinarea glicinei și a alaninei într-o singură secvență duce la formarea glicilalanină. Inversarea ordinii duce la apariția alanilglicine.

Tipurile de aminoacizi sunt aceleași, dar poziția lor și mediul chimic în care se află diferă.

Acest lucru arată de ce secvența unui peptid conține mai multe informații decât o simplă listă a componentelor sale.

Formarea legăturilor poate fi studiată în mod direct. Stachelhaus și colaboratorii săi au analizat componentele sistemului de sinteză a peptidelor non-ribozomal și au demonstrat că modificarea restului situat în locul catalitic propus împiedica reacția de condensare studiată. Experimentul leagă astfel formarea unui anumit produs peptidic de acțiunea unui mecanism molecular specific. [7]

Ecuația de condensare reprezintă un model al bilanțului reacțiilor

În chimia elementară, formarea unui peptid este adesea reprezentată prin ecuația:

aminoacid + aminoacid → dipeptid + apă

Ecuația arată diferența de compoziție dintre moleculele libere inițiale și produsul rezultat din reacție.

Este util pentru înțelegerea relației chimice dintre substraturi și produs.

Totuși, acesta nu trebuie interpretat ca un mecanism complet de sinteză a proteinelor în interiorul unei celule vii.

Aminoacizii liberi nu se așează pur și simplu unul lângă altul în apă, nu eliberează spontan molecule de apă și nu formează de la sine o secvență specifică de proteină.

Sinteza biologică necesită substraturi activate, un mecanism molecular bine organizat, informații care să determine secvența, precum și procese pregătitoare care necesită energie.

Prin urmare, este important să se facă distincția între ecuația chimică globală a mecanismul de reacție.

Ecuația descrie compoziția inițială și cea finală. Mecanismul explică etapele moleculare efective și produsele intermediare care conduc la reacție.

Experimentele privind ribozomii analizează tocmai aceste detalii mecaniciste, și nu se limitează doar la reproducerea ecuației cunoscute de condensare. [3]

Cum formează ribozomul legăturile peptidice?

În timpul translației, ARN-ul de transfer, adică ARNt, transportă aminoacizii și lanțul peptidic în curs de formare în interiorul ribozomului.

Grupul amino al aminoacidului nou livrat reacționează cu capătul activ al lanțului existent legat de ARNt, ceea ce duce la transferul peptidului în curs de formare către restul legat de noul ARNt.

Lanțul peptidic este de obicei prelungit dinspre Capătul C.

Activarea aminoacizilor și legarea acestora de ARNt sunt procese care necesită energie. Prin urmare, descrierea fiecărei legături peptidice ribozomale ca fiind formată direct între două aminoacizi liberi sau ca o simplă „eliminare a apei” de către ribozom ar fi o simplificare excesivă.

Weinger și colaboratorii săi au modificat un grup chimic din substratul ARNt și au observat o reducere semnificativă a formării legăturilor peptidice, fără o scădere corespunzătoare a legării substratului. Acest rezultat a furnizat dovezi privind cataliza asistată de substrat, în care proprietățile chimice ale substraturilor în sine contribuie la desfășurarea reacției. [3]

Experimentul indică, așadar, rolul mecanicist al chimiei ARNt, și nu doar funcția sa de purtător pasiv.

Formarea legăturilor peptidice are o direcție specifică

Sinteza proteinelor este un proces unidirecțional.

Deoarece lanțul în curs de sinteză este prelungit dinspre capătul C, secvența se dezvoltă într-o anumită orientare.

Acest lucru ține de convenția general acceptată de notare a secvențelor de peptide și proteine, începând cu De la capătul N la capătul C.

Direcția nu este însă doar o convenție de notare. Inversarea secvenței duce de obicei la formarea unei alte molecule, deoarece fiecare grupare ocupă atunci o poziție diferită față de celelalte elemente ale lanțului.

Alte metode de a crea legături de acest tip

Legăturile peptidice se pot forma și în afara ribozomului.

Specializate sisteme enzimatice nerybosomale sintetizează anumite peptide, în timp ce sinteza de laborator a peptidelor utilizează componente activate și reacții de cuplare controlate.

Aceste căi diferă în ceea ce privește organizarea, substraturile, condițiile de reacție și mecanismele catalitice.

Nu trebuie să le considerăm procese identice doar pentru că produsele finale conțin legături amidice.

Cercetările privind formarea legăturilor neribozomale și sinteza chimică a BPTI reprezintă exemple ale acestor metode alternative de producție. [7] [5]

Nici metoda de sinteză în sine nu determină dacă o anumită moleculă este un peptid sau o proteină. Sinteza chimică poate conduce la obținerea unui material corespunzător unui peptid sau unei proteine naturale, cu condiția stabilirii corecte a secvenței sale și a altor caracteristici structurale relevante.

Legăturile peptidice și alte legături din proteine

Legăturile scheletice și interacțiunile responsabile de pliere

Legăturile peptidice mențin secvența de aminoacizi unită.

Alte interacțiuni ajută, pe de altă parte, la determinarea modului în care această secvență se dispune în spațiul tridimensional sau a modului în care interacționează între ele cele diferite lanțuri peptidice.

Legăturile de hidrogen se formează între donatori și acceptori de hidrogen corespunzători. În cadrul scheletului peptidic, atomii de oxigen ai grupărilor carbonil pot îndeplini rolul de acceptori, iar numeroase grupări amidice N–H pot fi donatori.

Azotul amidic nu este de obicei considerat un acceptor de legături de hidrogen, deoarece perechea sa liberă de electroni face parte din sistemul electronic al grupării amidice.

De asemenea, grupările peptidice care conțin prolină necesită o atenție specială, deoarece azotul din schelet nu are atunci atomul de hidrogen tipic N–H.

Un grup care conține o legătură peptidică poate, așadar, să participe la formarea legăturilor de hidrogen, dar legătura peptidică și legătura de hidrogen sunt tipuri diferite de legături.

Una dintre ele leagă covalent resturile de aminoacizi. Cealaltă participă la interacțiunile din interiorul moleculei sau între molecule.

Studiile asupra peptidului scurt și pliat CLN025 au analizat structura stabilizată, printre altele, de legături de hidrogen și alte interacțiuni intramoleculare. Acest lucru arată că plierea poate avea loc fără formarea unei noi secvențe scheletice. [8]

Punțile disulfurice leagă lanțurile laterale care conțin sulf

Punțile disulfurice sunt legături covalente sulf-sulf, care se formează cel mai adesea între lanțurile laterale ale cisteinei.

Acestea pot lega segmente îndepărtate ale aceluiași lanț peptidic sau lanțuri diferite.

Nu sunt legături peptidice și nu se regăsesc în toate proteinele.

Formarea sau ruperea unei legături disulfurice poate modifica în mod semnificativ organizarea spațială a moleculei, fără a fi necesară tăierea scheletului său peptidic.

În cadrul studiului privind sinteza BPTI, s-au preparat secvența naturală și analogi proiectați pentru a modifica capacitatea de formare a punților disulfurice. Materialul cu secvența naturală a fost comparat cu BPTI natural prin metode analitice și funcționale. Rezumatul publicației nu a confirmat toate implicațiile structurale referitoare la analogi, prin urmare diferențele propuse nu trebuie prezentate ca rezultate pe deplin stabilite. [5]

Interacțiuni ionice și hidrofobe

Grupurile încărcate se pot atrage sau respinge, influențând organizarea spațială a moleculei.

Regiunile nepolare interacționează, pe de altă parte, cu mediul acvatic într-un mod care poate favoriza ascunderea lor în interiorul structurii, asocierii sau agregării. Acest fenomen este adesea discutat în contextul efectului hidrofob.

Aceste interacțiuni pot avea o importanță enormă pentru plierea proteinelor, însă interacțiunea hidrofobă nu reprezintă o legătură covalentă nouă între aminoacizi.

Prin urmare, este incorect să se denumească toate forțele care stabilizează proteina drept legături peptidice.

Diferitele tipuri de interacțiuni pot reacționa, de asemenea, în mod diferit la temperatură, solvent, aciditate, condiții ionice și alte schimbări ale mediului. Identificarea tipului de legătură sau de interacțiune care suferă modificări permite o înțelegere mai precisă a rezultatului experimentului.

Denaturarea nu este același lucru cu hidroliza

Denaturarea modifică organizarea structurală tipică a proteinei.

Poate perturba plierea sau asocierea moleculelor, lăsând în același timp majoritatea sau toate legăturile peptidice intacte.

Hidroliza modifică însă legăturile chimice prin ruperea unei legături sensibile în cadrul unei reacții în care intervine apa.

În anumite condiții, ambele procese pot avea loc în aceeași probă, dar nu sunt sinonime.

Prin urmare, desfacerea proteinei nu înseamnă automat transformarea acesteia în peptide mai scurte sau în aminoacizi liberi.

Această diferențiere este evidentă și în studiile structurale. În experimentele privind colagenul dezvoltat termic, au fost identificate diverse configurații cis și trans ale legăturilor peptidice asociate cu prolina. Modificarea configurației scheletului este un fenomen diferit de scindarea chimică a acestuia. [9]

Formarea, proprietățile și hidroliza legăturilor peptidice

Stabilitatea depinde de tipul reacției analizate

Legăturile peptidice sunt suficient de stabile pentru a menține lanțurile biologice, iar, în același timp, organismele le pot forma și descompune în mod selectiv.

Nu există nicio contradicție în acest sens.

Viteza de reacție depinde, printre altele, de bariere de activare și prezența catalizatorilor, însă faptul că o anumită reacție este avantajoasă din punct de vedere termodinamic constituie o chestiune separată.

Procesul poate fi posibil din punct de vedere chimic, dar fără o cataliză adecvată se desfășoară extrem de lent.

Pe de altă parte, enzima poate accelera semnificativ o anumită reacție, oferind o cale de reacție mai favorabilă.

Enzima nu transformă legătura peptidică într-un tip complet diferit de legătură. Ea modifică calea pe care se desfășoară reacția chimică.

De asemenea, ar fi incorect să se atribuie o singură durată de viață universală tuturor legăturilor peptidice, peptidelor sau proteinelor aflate în apă.

Secvența, structura locală, accesibilitatea legăturii, grupările chimice învecinate, temperatura, pH-ul, compoziția soluției și prezența catalizatorilor pot influența comportamentul observat.

Ce schimbă hidroliza?

Hidroliza utilizează apa în reacția de scindare chimică a legăturii amidice, ducând la formarea unor noi grupări terminale derivate din grupările carboxilice și aminice.

Forma lor ionică exactă depinde de condițiile soluției înconjurătoare.

Ruptura unei singure legături din scheletul molecular nu duce în mod automat la formarea de aminoacizi liberi.

Dacă se rupe o legătură peptidică internă dintr-un lanț deschis mai lung, produsele directe vor fi, de obicei, două fragmente peptidice mai scurte.

Sunt necesare reacții suplimentare de scindare pentru a scurta treptat aceste fragmente și pentru a elibera, în final, aminoacizi individuali.

Studiile structurale asupra penicilopepsinei au analizat modul în care proteinaza aspartilică poate organiza moleculele de apă și grupările substratului în procesul de hidroliză. Modelul de reacție propus s-a bazat pe observații cristalografice și pe modelare. Acesta oferă informații despre un singur mecanism enzimatic, dar nu demonstrează că fiecare protează utilizează același mod de cataliză. [4]

Hidroliza poate fi selectivă

Proteazele și peptidazele diferă în ceea ce privește legăturile pe care le recunosc și mediile moleculare în care acționează.

Unele enzime rup legăturile din interiorul lanțului, în timp ce altele elimină resturile de la capetele acestuia.

Secvența, structura locală, accesibilitatea și grupările chimice înconjurătoare pot influența faptul dacă un loc potențial susceptibil va fi efectiv scindat.

Davidson și Hutton au studiat o enzimă asociată cu granulele secretatoare de insulină. Preparatul purificat elimina resturile bazice din substraturile provenite din proinsulină și, în cadrul testului efectuat, nu provoca descompunerea ulterioară a insulinei mature. [10]

Acest lucru arată că tratarea biologică selectivă, și nu ruperea aleatorie a tuturor legăturilor peptidice.

Scindarea selectivă are o importanță biologică semnificativă, deoarece moleculele precursoare mai mari pot fi transformate în anumite locuri, conducând la formarea unor produse mature specifice, în loc de o degradare aleatorie.

Condițiile contează: două exemple experimentale

Kenley și Warne au studiat interleukina 11 umană recombinată în condiții de stres create în mod intenționat, care includeau o temperatură ridicată și diferite valori ale pH-ului.

Într-un mediu acid, au identificat o scindare la o anumită poziție între Asp și Pro. Rezultatele indică o degradare dependentă de secvență și de condiții, dar nu ar trebui interpretate ca o regulă universală care să descrie comportamentul tuturor proteinelor în condiții biologice tipice. [11]

Într-un alt studiu s-a observat fragmentarea peptidului intestinal vasoactiv radioiodat într-o soluție diluată cu pH neutru. Fragmentele înrudite, mai scurte, nu au prezentat o degradare măsurabilă în aceleași condiții experimentale, iar adaosurile la soluție au influențat rezultatul. [12]

Ambele studii arată de ce stabilitatea legăturilor peptidice trebuie analizată în raport cu unei anumite molecule, secvențe, mediu și condiții experimentale, în loc să presupunem că un anumit pH sau o anumită temperatură vor determina același comportament la fiecare peptid.

De ce sunt legăturile peptidice importante din punct de vedere biologic?

Legăturile peptidice păstrează ordinea resturilor de aminoacizi care definesc lanțul peptidic sau proteic.

Geometria acestora limitează posibilele dispuneri spațiale ale lanțului, în timp ce grupările carbonilice și cele azotate, prezente în scheletul peptidic, participă la interacțiunile moleculare.

Formarea controlată a legăturilor peptidice permite sinteza peptidelor și a proteinelor.

Desfacerea controlată a acestor legături contribuie, în schimb, la transformarea precursorilor, la digestie, la metabolismul proteinelor, la căile de reglare și la degradarea finală a moleculelor.

Același tip fundamental de legătură chimică este, așadar, prezent la mai multe niveluri ale organizării biologice.

Apariția sa determină continuitatea secvenței.

Structura sa electronică influențează geometria scheletului.

Grupările chimice prezente în acesta participă la interacțiunile moleculare.

Descompunerea sa selectivă permite sistemelor biologice să prelucreze și să elimine proteinele și peptidele.

Aceste funcții combină chimia moleculară cu biologia. Dovezile provin, printre altele, din calculele structurii electronice, măsurătorile structurale, studiile enzimatice, sinteza chimică și experimentele care utilizează sisteme biologice complete. Fiecare dintre aceste metode evidențiază un element diferit al mecanismului și nu ar trebui utilizată pentru a trage concluzii care depășesc procesul efectiv studiat. [2] [3] [10]

Întrebări frecvente

1. Legătura peptidică este covalentă?

Da. Legătura peptidică este o legătură covalentă de tip amidic între grupările derivate din aminoacizi. Atomul de carbon și atomul de azot împărtășesc electroni, ceea ce asigură continuitatea chimică a lanțului peptidic. Studiile privind structura electronică analizează modul în care această partajare a electronilor este influențată de gruparea carbonilică vecină și cum aceasta contribuie la proprietățile caracteristice ale legăturii amidice. Totuși, termenul „covalent” nu înseamnă că legătura nu poate fi ruptă. În condiții chimice adecvate sau cu ajutorul enzimelor, aceasta poate suferi hidroliză. Cel mai important este să se facă distincția că legătura peptidică unește chimic resturile într-o singură moleculă, și nu doar determină o atracție între molecule separate sau fragmente ale aceleiași molecule. [1]

2. De ce legătura peptidică are caracterul unei legături duble parțiale?

Caracterul parțial al legăturii duble rezultă din interacțiunea perechii libere de electroni a azotului cu sistemul electronic al grupării carbonilice învecinate. Astfel, densitatea electronică se delocalizează în cadrul grupării amidice. Studiile computationale au analizat contribuția acestui fenomen la ordinea legăturii peptidice. Structurile de rezonanță utilizate pentru explicarea sa reprezintă moduri alternative de reprezentare a aceleiași structuri electronice, și nu molecule distincte care se transformă una în cealaltă. De asemenea, valorile numerice care descriu ordinul legăturii pot depinde de metoda analitică utilizată. Cea mai importantă consecință structurală este limitarea rotației în jurul legăturii C–N în comparație cu o legătură simplă tipică, care se rotește liber. [1]

3. Care sunt atomii care formează legătura peptidică?

Într-un schelet peptidic tipic, legătura peptidică unește atomul de carbon al grupării carbonilice a unei resturi cu atomul de azot al unei alte resturi. Atomul de oxigen rămâne parte a grupării carbonilice și nu constituie o legătură directă între cele două resturi de aminoacizi. Analizele electronice și structurale examinează aceste atome ca parte a grupării amidice asociate, distingând în același timp legăturile lor individuale. Prin urmare, atunci când se identifică o legătură peptidică tipică într-o formulă structurală, un punct de plecare util este găsirea unei legături C–N situată imediat lângă gruparea carbonilică. [2]

4. Unde se află legătura peptidică în proteina albă?

Legăturile peptidice se găsesc în scheletul fiecărui lanț proteic și leagă resturile de aminoacizi învecinate. Acestea se deosebesc de legăturile transversale dintre lanțurile laterale și de interacțiunile dintre lanțurile separate. Sinteza chimică a BPTI ilustrează această distincție prin separarea construirii scheletului de formarea ulterioară a punților disulfidice. Structura tridimensională completă a proteinei poate conține mai multe tipuri de interacțiuni covalente și necovalente, de aceea identificarea legăturilor peptidice necesită urmărirea scheletului de aminoacizi, și nu numărarea tuturor liniilor sau conexiunilor reprezentate pe modelul moleculei. [5]

5. Fiecare legătură amida este o legătură peptidică?

Nu. Legăturile amidice se regăsesc în numeroase compuși organici, în timp ce termenul „legătură peptidică” se referă la anumite legături provenite de la aminoacizi în peptide și proteine. Legătura peptidică tipică din scheletul molecular este unul dintre tipurile de legături amidice. Prin urmare, legătura amidică care implică lanțul lateral al unui aminoacid nu trebuie clasificată automat ca o legătură obișnuită a scheletului. Studiile privind geometria peptidelor se concentrează pe un grup amidic definit al scheletului și nu tratează toate amidele posibile ca fiind identice din punct de vedere chimic și structural. Denumirea corespunzătoare depinde de grupările implicate și de poziția acestora în moleculă. [2]

6. Câte legături peptidice se găsesc într-un tripeptid?

Un tripeptid tipic, deschis și fără ramificații, conține două legături peptidice, deoarece cele trei resturi necesită două legături pentru a forma un singur lanț deschis continuu. Acest lucru rezultă din relația generală n − 1 pentru un lanț deschis tipic care conține n resturi. Este un calcul care decurge din structura moleculei, nu un rezultat experimental sau o informație despre funcția sa biologică. Răspunsul va fi diferit dacă o legătură suplimentară a scheletului molecular va închide molecula într-un inel. Legăturile lanțurilor laterale și alte legături covalente trebuie, însă, numărate separat. Prin urmare, înainte de a aplica regula generală, trebuie să se determine arhitectura moleculei analizate.

7. Peptidele ciclice au o legătură peptidică suplimentară?

Un peptid ciclic de tip „head-to-tail” are cu o legătură scheletică mai mult decât lanțul deschis corespunzător, deoarece legătura amidică suplimentară unește cele două capete și închide inelul. Alte peptide ciclice pot forma însă un inel cu participarea lanțurilor laterale, de aceea această regulă nu se aplică automat fiecărei molecule desemnate ca fiind ciclică. Cercetările asupra calatei B1 au confirmat un caz concret de schelet ciclic care conține, în plus, punți disulfurice. Închiderea scheletului într-un inel și formarea legăturilor între lanțurile laterale trebuie, așadar, descrise separat atunci când se numără legăturile și se prezintă arhitectura moleculară. [6]

8. Legăturile peptidice sunt întotdeauna perfect plane?

Nu. Grupările peptidice sunt aproximativ plane, dar sunt posibile abateri măsurabile față de geometria ideală. Un studiu care combină calculele cuantice cu analiza datelor structurale ale peptidelor și proteinelor a evidențiat mici deformări legate de dispunerea locală a scheletului. Aceste observații completează modelul simplificat din manual, dar nu îl fac inutil. Planaritatea rămâne o preferință structurală importantă care decurge din structura electronică a grupării amide, însă o analiză structurală precisă ar trebui să țină seama de diferențele locale caracteristice unei anumite molecule. [2]

9. Poate proteina să se îndoaie, având în vedere că rotația în jurul legăturii peptidice este limitată?

Da. Scheletul proteinei conține alte legături în jurul cărora pot avea loc modificări ale unghiurilor de torsiune. Rotația limitată în jurul legăturii amide C–N nu imobilizează, așadar, întregul lanț. Analizele structurale disting unghiurile de rotație în jurul legăturilor adiacente ale scheletului de unghiul asociat legăturii peptidice propriu-zise. Restricțiile sterice, interacțiunile chimice locale și tipul resturilor învecinate influențează suplimentar care aranjamente sunt accesibile din punct de vedere energetic și fizic. Prin urmare, proteinele nu sunt nici bare rigide, nici lanțuri compuse din elemente care se rotesc complet liber. Structura lor rezultă din combinarea unor grade de libertate limitate și relativ flexibile ale scheletului. [2]

10. Ce sunt legăturile peptidice cis și trans?

Termenii „cis” și „trans” descriu diferite orientări spațiale ale grupărilor situate de o parte și de alta a legăturii peptidice. În scheletele proteice tipice predomină configurația trans. Legăturile peptidice asociate cu prolina necesită o atenție specială, deoarece configurația cis apare în cazul acestora mai frecvent decât în cazul multor alte combinații de resturi. În studiile RMN efectuate pe colagenul dezvoltat termic au fost detectate ambele configurații. Totuși, aceste rezultate se referă la o proteină specifică în condiții experimentale precise și nu ar trebui generalizate ca valori procentuale universale valabile pentru toate peptidele și proteinele. Termenii „cis” și „trans” descriu geometria legăturii peptidice, nu diferite tipuri de legături chimice. [9]

11. În timpul formării unei legături peptidice, se eliberează întotdeauna apă în mod direct?

Nu. Ecuația cunoscută care descrie eliberarea apei prezintă relația globală de condensare dintre grupările funcționale libere, dar nu descrie fiecare mecanism real de formare a legăturilor peptidice. Sinteza ribozomală utilizează substraturi activate legate de ARNt, iar studiile experimentale indică implicarea chimiei substratului în cataliză. Decursul direct al reacției este, așadar, mai complex decât simpla eliminare a apei din două aminoacizi liberi în soluție. Distincția dintre bilanțul sumativ al reacției și mecanismul biologic real împiedică transformarea unei ecuații educaționale utile într-o descriere incorectă a sintezei proteinelor. [3]

12. Amestecarea aminoacizilor cu apa duce la formarea proteinelor?

Nu. Un amestec de aminoacizi liberi nu formează automat o anumită secvență proteică. Formarea controlată a peptidelor necesită o chimie adecvată, iar în celule este nevoie și de un mecanism de sinteză organizat, capabil să controleze ordinea aminoacizilor și să formeze legături. Experimentele privind asamblarea neribozomală a peptidelor au demonstrat că perturbarea unui anumit element catalitic poate împiedica formarea produsului peptidic studiat. Rezultatele se referă la un sistem biosintetic specific, dar ilustrează un principiu mai larg: simpla prezență a componentelor moleculare constitutive nu este suficientă. Formarea unei secvențe definite necesită crearea controlată a legăturilor moleculare. [7]

13. Legătura peptidică este același lucru cu legătura de hidrogen?

Nu. Legătura peptidică este o legătură covalentă din scheletul moleculei, în timp ce legătura de hidrogen este o interacțiune între un donator și un acceptor de hidrogen corespunzători. Grupările chimice prezente în scheletul peptidic pot participa la formarea legăturilor de hidrogen fără a genera legături peptidice suplimentare. Studiile asupra decapeptidului pliat CLN025 au analizat legăturile de hidrogen și alte interacțiuni care contribuie la stabilizarea structurii sale. Această distincție separă legăturile care definesc secvența covalentă de bază a lanțului de interacțiunile care ajută lanțul deja format să se organizeze în spațiul tridimensional. [8]

14. Legătura disulfurică este un tip de legătură peptidică?

Nu. Puntea disulfurică este o legătură covalentă sulf-sulf, care se formează de obicei între lanțurile laterale ale cisteinei. Legătura peptidică, pe de altă parte, este o legătură amidică care unește grupările derivate din aminoacizi în scheletul peptidic. Studiile privind sinteza BPTI au tratat formarea scheletului și formarea punților disulfurice ca procese distincte. Ambele tipuri de legături pot avea o importanță semnificativă pentru structura moleculei, dar leagă atomi diferiți și participă la reacții chimice diferite. Prin urmare, ruperea unei punți disulfurice nu trebuie neapărat să secționeze scheletul peptidic, în timp ce scindarea legăturii peptidice modifică direct continuitatea secvenței lanțului. [5]

15. Denaturarea proteinei duce la ruperea legăturilor peptidice?

Nu este necesar. Denaturarea înseamnă perturbarea structurii tipice ondulate sau în lanț a proteinei și, prin definiție, nu necesită ruperea legăturilor peptidice. În funcție de condițiile aplicate, degradarea chimică poate avea loc simultan cu denaturarea, dar cele două procese nu trebuie confundate în mod automat. În studiile privind colagenul denaturat termic, s-au analizat în continuare diverse configurații ale legăturilor sale peptidice. Lanțul desfăcut și lanțul supus hidrolizei reprezintă, așadar, stări moleculare diferite: prima se referă în primul rând la organizarea tridimensională, în timp ce a doua se referă la modificarea legăturilor covalente. [9]

16. Hidroliza duce imediat la formarea de aminoacizi liberi?

Nu întotdeauna. Hidroliza unei singure legături peptidice interne dintr-un lanț deschis mai lung duce, de obicei, la formarea a două fragmente peptidice mai scurte. Sunt necesare reacții suplimentare de scindare pentru a reduce treptat lungimea acestor fragmente și, în final, pentru a elibera aminoacizi individuali. În studiile experimentale au fost identificate fragmente specifice rezultate în urma scindării legăturilor peptidice, printre altele în cadrul studiilor privind degradarea interleukinei 11 și a peptidului intestinal vasoactiv. Tipul produselor depinde de locurile în care a avut loc scindarea și de gradul de avansare al hidrolizei. Prin urmare, termenul „hidrolizat” nu înseamnă automat că peptida sau proteina a fost transformată complet în aminoacizi liberi. [11] [12]

17. Toate legăturile peptidice se descompun cu aceeași viteză?

Nu. Viteza de scindare observată depinde de secvența peptidică, de structura moleculară locală, de accesibilitatea legăturii, de grupările chimice învecinate, de compoziția soluției, de temperatură, de pH și de prezența catalizatorilor, cum ar fi enzimele proteolitice. Studiile privind interleukina 11 și peptidul intestinal vasoactiv au evidențiat o degradare selectivă, dependentă de condiții, și nu un comportament uniform al tuturor legăturilor. Aceste experimente nu stabilesc o durată de viață universală pentru alte peptide. Concluzia științifică este că stabilitatea legăturii peptidice trebuie evaluată în raport cu o moleculă, un mediu și o reacție specifice, și nu trebuie prevăzută exclusiv pe baza denumirii legăturii. [11] [12]

18. În ce constă diferența dintre legătura peptidică și legătura izopeptidică?

O legătură peptidică tipică din scheletul proteic leagă, de obicei, gruparea principală derivată din gruparea carboxilică a unei unități cu gruparea aminică principală a unei alte unități. Legătura izopeptidică este, de asemenea, o legătură amida, dar la formarea ei participă cel puțin o grupare funcțională situată în afara structurii tipice a scheletului, de exemplu o grupare corespunzătoare din lanțul lateral al unui aminoacid. Ambele tipuri de legături se bazează, așadar, pe o chimie amidică similară, dar ocupă locuri diferite în arhitectura moleculară. Distincția este importantă, deoarece simpla detectare a unei legături amidice nu este suficientă pentru a concluziona că aceasta aparține unui schelet peptidic obișnuit.

19. De ce sunt legăturile peptidice importante pentru structura proteinelor?

Legăturile peptidice mențin o secvență covalentă ordonată a resturilor de aminoacizi și, în același timp, impun restricții geometrice scheletului moleculei. Caracterul lor parțial de legătură dublă limitează rotația în jurul legăturii amida C–N și favorizează o geometrie aproximativ plană a grupării peptidice. În același timp, grupările carbonilice și N–H din schelet pot participa la modele de legături de hidrogen importante pentru structurile de ordin superior. Prin urmare, legăturile peptidice nu doar leagă aminoacizii — proprietățile lor electronice și geometrice contribuie la determinarea posibilităților structurale ale întregului lanț. [1] [2]

20. Enzimele pot rupe legăturile peptidice?

Da. Proteazele și peptidazele pot cataliza hidroliza legăturilor peptidice, dar nu trebuie neapărat să rupă toate legăturile fără discernământ. Fiecare enzimă recunoaște anumite secvențe, medii structurale sau poziții în lanțurile peptidice. Studiile structurale asupra penicilopepsinei au analizat modul în care proteinaza aspartilică organizează substratul și apa în timpul hidrolizei, în timp ce Davidson și Hutton au demonstrat procesarea selectivă a substraturilor asociate cu proinsulina. Aceste exemple ilustrează modul în care sistemele biologice pot scinda în mod controlat anumite legături peptidice în timpul procesării și degradării moleculelor. [4] [10]

Limitări în interpretarea studiilor privind legăturile peptidice

Atunci când se face trecerea de la noțiunile de bază ale chimiei legăturilor peptidice la concluzii privind peptidele și proteinele reale, trebuie să se țină cont de câteva limitări.

În primul rând, grupul peptidic idealizat prezentat în manuale este modelul unei structuri tipice. Structurile moleculare reale pot prezenta abateri măsurabile față de planitatea și geometria ideale. [2]

În al doilea rând, stabilitatea legăturii peptidice depinde de context. Rezultatele experimentelor efectuate la temperaturi ridicate, la un pH atipic, la o concentrație foarte mică sau în prezența anumitor catalizatori nu trebuie utilizate în mod automat pentru a prezice comportamentul moleculei în condiții complet diferite. [11] [12]

În al treilea rând, diferite enzime utilizează mecanisme catalitice diferite. Dovezile care descriu hidroliza realizată de o singură proteinază aspartilică nu înseamnă că toate proteazele scindă legăturile peptidice exact în același mod. [4]

În al patrulea rând, legăturile peptidice pot fi formate prin diverse mecanisme. Traducerea ribozomală, biosinteza neribozomală și sinteza chimică de laborator pot duce la formarea legăturilor amidice, deși utilizează substraturi și mecanisme moleculare diferite. [3] [7]

În al cincilea rând, modificările structurii proteinei nu trebuie interpretate automat ca o rupere a legăturilor peptidice. Denaturarea, modificările conformaționale, tranzițiile cis–trans, perturbarea legăturilor de hidrogen, reducerea punților disulfidice și hidroliza legăturilor peptidice descriu diverse fenomene moleculare.

Aceste distincții sunt importante, deoarece termenul legătură peptidică descrie un tip specific de legătură covalentă. Pentru a înțelege ce se întâmplă de fapt cu peptida sau proteina, trebuie să se stabilească care legătură chimică sau interacțiune moleculară a suferit o modificare.

Rezumat

Legăturile peptidice sunt legături covalente de tip amidic care unesc resturile de aminoacizi în lanțuri peptidice și proteice. Deși sunt adesea reprezentate pur și simplu ca legături C–N într-un fragment repetitiv al scheletului –C(=O)–NH–, chimia lor este mai complexă decât cea a unei legături simple, care se rotește liber.

Delocalizarea electronilor în cadrul grupării amide conferă legăturii C–N un caracter parțial de legătură dublă, limitând rotația acesteia și favorizând o geometrie aproximativ plană a grupării peptidice. În același timp, posibilitatea de rotație în jurul legăturilor scheletice învecinate permite lanțurilor peptidice să adopte structuri tridimensionale foarte variate. [1] [2]

Legăturile peptidice se regăsesc în scheletul peptidelor și proteinelor tipice, dar trebuie diferențiate de legăturile de hidrogen, puntea disulfurică, interacțiunile ionice, efectul hidrofob și legăturile specializate ale lanțurilor laterale, cum ar fi legăturile izopeptidice.

Acestea pot apărea ca urmare a unor procese diverse. Ribozomii formează legături peptidice în timpul traducerii, utilizând substraturi activate legate de ARNt, sistemele neribozomale utilizează un aparat enzimatic specializat, în timp ce sinteza de laborator se bazează pe reacții controlate de cuplare chimică. [3] [7]

La fel de importantă este și scindarea acestora. Hidroлиза poate diviza lanțul peptidic în fragmente mai scurte, iar proteazele și peptidazele permit organismelor să realizeze acest proces în mod selectiv. Studiile privind proteinazele, procesarea proinsulinei, degradarea interleukinei 11 și a peptidului intestinal vasoactiv arată că scindarea depinde de contextul molecular și de condițiile experimentale. [4] [10] [11] [12]

Așadar, regula cea mai importantă este simplă:

Legăturile peptidice asigură continuitatea covalentă a lanțurilor de aminoacizi, iar structura lor electronică, formarea controlată și scindarea selectivă leagă chimia fundamentală de biologia peptidelor și a proteinelor.

Mențiune

Articolul are un caracter exclusiv educativ și științifico-informativ. Acesta explică chimia legăturilor peptidice, structura lor moleculară, formarea, hidroliza, precum și exemple extrase din studii publicate. Acesta nu constituie un sfat medical, o indicație privind tratamentul, o instrucțiune de laborator, o recomandare de produs sau un sfat privind utilizarea vreunui peptid sau a vreunei proteine. Rezultatele studiilor teoretice, structurale, biochimice, ale studiilor pe animale și ale altor experimente trebuie interpretate în limitele condițiilor și restricțiilor specifice fiecărui studiu.

Referințe

1. Fedorov, D. G. (2024). Legătura peptidică: rezonanța crește ordinea legăturii și complică fragmentarea. ChemPhysChem, 25(14), articolul e202400170. https://doi.org/10.1002/cphc.202400170
2. Improta, R., Vitagliano, L. și Esposito, L. (2011). Deformațiile legăturilor peptidice datorate planității: noi perspective obținute din calcule de mecanică cuantică și din structurile cristaline ale peptidelor și proteinelor. PLOS ONE, 6(9), articolul e24533. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0024533
3. Weinger, J. S., Parnell, K. M., Dorner, S., Green, R. și Strobel, S. A. (2004). Cataliza asistată de substrat a formării legăturii peptidice de către ribozom. Nature Structural & Molecular Biology, 11(11), 1101–1106. https://doi.org/10.1038/nsmb841
4. James, M. N., & Sielecki, A. R. (1985). Analiza stereochimică a hidrolizei legăturii peptidice catalizată de penicilopepsina, o proteinază aspartică. Biochimie, 24(14), 3701–3713. https://doi.org/10.1021/bi00335a045
5. Ferrer, M., Woodward, C. și Barany, G. (1992). Sinteza în fază solidă a inhibitorului de tripsină pancreatică bovină (BPTI) și a două analogi. O abordare chimică pentru evaluarea rolului punților disulfidice în plierea și stabilitatea proteinelor. Revista internațională de cercetare în domeniul peptidelor și proteinelor, 40(3–4), 194–207. Înregistrare PubMed
6. Saether, O., Craik, D. J., Campbell, I. D., Sletten, K., Juul, J. și Norman, D. G. (1995). Determinarea structurii primare și tridimensionale a polipeptidei uterotonice Kalata B1. Biochimie, 34(13), 4147–4158. https://doi.org/10.1021/bi00013a002
7. Stachelhaus, T., Mootz, H. D., Bergendahl, V. și Marahiel, M. A. (1998). Formarea legăturilor peptidice în biosinteza peptidică nonribozomală. Rolul catalitic al domeniului de condensare. Journal of Biological Chemistry, 273(35), 22773–22781. https://doi.org/10.1074/jbc.273.35.22773
8. Hatfield, M. P. D., Murphy, R. F. și Lovas, S. (2010). Proprietățile spectroscopice VCD ale miniproteinei CLN025, care formează o structură de tip „beta-hairpin”, în diversi solvenți. Biopolimeri, 93(5), 442–450. https://doi.org/10.1002/bip.21356
9. Sarkar, S. K., Young, P. E., Sullivan, C. E. și Torchia, D. A. (1984). Detectarea legăturilor peptidice cis și trans X-Pro în proteine prin RMN 13C: aplicare la colagen. Actele Academiei Naționale de Științe a Statelor Unite ale Americii, 81(15), 4800–4803. https://doi.org/10.1073/pnas.81.15.4800
10. Davidson, H. W. și Hutton, J. C. (1987). Carboxipeptidaza H din granulele secretorii de insulină. Purificarea și demonstrarea implicării acesteia în procesarea proinsulinei. Biochemical Journal, 245(2), 575–582. https://doi.org/10.1042/bj2450575
11. Kenley, R. A., & Warne, N. W. (1994). Hidroliza legăturii peptidice a interleukinei 11 umane recombinante, catalizată de acid. Cercetări farmaceutice, 11(1), 72–76. https://doi.org/10.1023/a:1018945727640
12. Mody, R., Tramontano, A. și Paul, S. (1994). Hidroliza spontană a peptidei intestinale vasoactive în soluție apoasă neutră. Revista internațională de cercetare în domeniul peptidelor și proteinelor, 44(5), 441–447. https://doi.org/10.1111/j.1399-3011.1994.tb00180.x