Timozinas beta-4 (Tβ4): molekuliniai mechanizmai, klinikiniai ir ikiklinikiniai tyrimai

Mokslinis kontekstas Šiame straipsnyje pateikiami cituojamuose leidiniuose aprašyti rezultatai. Tyrimai su ląstelėmis ir gyvūnais nepatvirtina gydymo veiksmingumo žmonėms. Nurodytos koncentracijos, dozės ir vartojimo schemos taikomos tik tyrimų protokolams ir nėra medicininės rekomendacijos ar instrukcijos savarankiškam vartojimui. Pateiktos nuorodos yra gautos iš šaltinio medžiagos ir nebuvo nepriklausomai patvirtintos.

Timozina beta-4 (Tβ4), taip pat žinoma kaip timbetasin, yra nedidelis baltymas, sudarytas iš 43 aminorūgščių. Jis natūraliai randamas žmonių ir pelių organizmuose. Mokslininkai taip pat sukūrė sintetines ir rekombinantines jo versijas, naudojamas laboratoriniuose tyrimuose bei ankstyvosiose klinikinių tyrimų stadijose. Timozino β4 empirinė formulė yra C₂₁₂H₃₅₀N₅₆O₇₈S, o molekulinė masė – maždaug 4963 Da [1].

Timozinas β4 domina tyrėjų dėmesį dėl savo dalyvavimo audinių atstatyme, ląstelių migracijoje ir uždegiminio signalizavimo reguliavime. Eksperimentiniuose tyrimuose buvo aprašytas jo poveikis žaizdų gijimui, angiogenezei, fibrozei ir audinių pažeidimams. Tačiau šie stebėjimai nepatvirtina klinikinio veiksmingumo visuose tiriamuose organuose.

Peptidas dalyvauja ląstelių migracijos į pažeidimo vietas procesuose ir natūralių atkuriamųjų signalų, tarp jų VEGF per HIF-1α, reguliavime. Tyrimuose taip pat buvo pastebėti pokyčiai, susiję su širdies, plaučių, kepenų ir kaulų audinių apsauga. Timozinas β4 taip pat gali paveikti autofagiją – ląstelių procesą, leidžiantį pašalinti pažeistus ląstelės komponentus.

Aminorūgštys timozino beta-4 struktūroje [1]

Remdamiesi eksperimentinių tyrimų rezultatais, mokslininkai analizavo įvairius galimus klinikinius timozino β4 taikymo būdus – nuo širdies pažeidimų ir kraujotakos sutrikimų iki odos regeneracijos. Viena iš tirtų formulacijų, RGN-259, yra kuriama akių lašų pavidalu, skirta ragenos paviršiaus ligų tyrimams. Taip pat buvo atliktas saugumo tyrimas su sveikais savanoriais. Tai rodo, kad susidomėjimas šiuo peptidu apima tiek jo pagrindines biologines funkcijas, tiek galimus medicininius taikymo būdus.

Timozinas β4: saugumas ir farmakokinetika klinikiniame tyrime

Pirmame klinikiniame tyrime su žmonėmis Wang ir jo bendradarbiai (2021) įvertino rekombinacinį timoziną β4, pažymėtą kaip NL005, sveikiems suaugusiems savanoriams Kinijoje [2].

Tyrimą sudarė dvi dalys. Pirmojoje dalyje dalyviai gavo vienkartinę intraveninę dozę nuo 0,05 iki 25,0 µg/kg. Antrojoje dalyje kasdien 10 dienų buvo skiriamos 0,5, 2,0 arba 5,0 µg/kg intraveninės dozės.

Preparatas buvo gerai toleruojamas abiejose tyrimo dalyse. Nebuvo užfiksuota jokių sunkių nepageidaujamų reiškinijų ar problemų, ribojančių dozės didinimą. Vienos dozės grupėje apie 57% dalyvių pranešė apie lengvus arba vidutinio sunkumo nepageidaujamus reiškinius, palyginti su 70% placebo grupėje. Dalis su pakartotiniu dozuojawimu... lengvi nepageidaujami reiškiniai pasireiškė 67% asmenų, gavusių NL005, ir 83% asmenų, gavusių placebogrupėje.

Dauguma pastebėtų pokyčių buvo laikinieji ir apėmė nedidelius laboratorinių tyrimų rodiklių, EKG užrašų ar vėžio žymenų nuokrypius.

Preparato farmakokinetika buvo palyginti nuspėjama. Po vienkartinio vartojimo maksimali koncentracija kraujyje didėjo proporcingai dozei – nuo 1,99 ng/ml esant mažiausiai dozei iki 230,07 ng/ml esant didžiausiai. Bendra ekspozicija medžiagai taip pat didėjo proporcingai.

Pusinės eliminacijos periodas šiek tiek ilgėjo vartojant didesnes dozes ir siekė maždaug 0,5–2,1 valandos. Dešimt dienų vartojant preparatą, reikšmingos medžiagos akumuliacijos organizme nepastebėta. Klirensas ir pasiskirstymo tūris išliko stabilūs.

Imuninį atsaką į preparatą nustatyta nedaugeliui dalyvių: vienam asmeniui vienos dozės grupėje ir dviem asmenims daugkartinio dozuojimo grupėje. Šios reakcijos buvo trumpalaikės.

Mažo I fazės tyrimo ribose rezultatai rodė gerą toleravimą, žemą pastebėtą imunogenizmą ir santykinai stabilią farmakokinetiką. Vis dėlto jie nepatvirtina ilgalaikio saugumo ar veiksmingumo pacientams, sergantiems širdies ir kraujagyslių sistemų ligomis.

Akių lašai su timozinu β4 sunkaus sauso akių sindromo tyrime

II fazos tyrime buvo vertinama, ar timozino β4 akių lašai gali pagerinti sunkiu sausų akių sindromu sergančių asmenų simptomus ir akių paviršiaus būklę.

Sosne ir bendraautoriai (2015) tyrė RGN-259 lašus, kurių sudėtyje yra 0,1 % timozino β4, pacientams, kuriems pasireiškė akių sausumas, susijęs su graft-versus-host liga (GVHD) [3].

Dalyviai lašus vartojo šešis kartus per dieną 28 dienas, po kurių sekė dar vienas 28 dienų laikotarpis be gydymo.

56-ąją dieną RGN-259 grupėje buvo užfiksuotas akių diskomforto sumažėjimas 35,1% ir akių paviršiaus pažeidimo požymių sumažėjimas 59,1%, palyginti su placebu.

Pagerėjo ir kiti parametrai, įskaitant ašarų plėvelės stabilumą bei ašarų tūrį. Svarbių su saugumu susijusių problemų nepastebėta, o preparatas buvo gerai toleruojamas.

Pradiniai rezultatai pateisino tolimesnius RGN-259 tyrimus, tačiau buvo nepakankami jo įprastiniam klinikiniam taikymui patvirtinti.

Intraveninė timozinas β4: ankstyvieji saugumo duomenys

Ankstyvame intraveniniame tyrime buvo vertinamas timozino β4 toleravimas sveikiem savanoriams, skiriant įvairias dozes.

Ruff ir bendradarbiai (2010) tyrė sintetinį timoziną β4, naudodami keturias intravenines dozes: 42, 140, 420 ir 1260 mg [4]. Po pradinio saugumo vertinimo tos pačios dozės buvo skiriamos kartą per parą 14 dienų.

Preparatas buvo gerai toleruojamas abiejuose etapuose. Praneštas nepageidaujamas poveikis buvo lengvo arba vidutinio sunkumo, sunkių reakcijų nepastebėta.

Sisteminė ekspozicija didėjo proporcingai dozei, o medžiagos buvimo organizme trukmė ilgėjo vartojant didesnes dozes.

Rezultatai palaikė tolesnius timozino β4 tyrimus būsenose, susijusiose su kraujotakos sutrikimais, tokiais kaip insultas ar širdies smūgis. Tačiau jie nebuvo jos veiksmingumo šiomis ligomis patvirtinimas.

Vietinis timozinas β4 lėtinėse veninėse blauzdų opose

II fazos tyrime buvo vertinimas gelis, kurio sudėtyje yra timozino β4, kaip eksperimentinis standartinio lėtinių blauzdos veninių opų gydymo priedas.

Guarnera ir bendradarbiai (2010) atliko tyrimą aštuoniuose Europos centruose, kuriame dalyvavo 73 pacientai, turintys lėtinių opų, susijusių su venų staze [5].

Buvo tiriamos įvairios gelio koncentracijos, įskaitant 0,03%. Preparatas buvo naudojamas kartu su standartine priežiūra, į kurią, be kita ko, įėjo kompresiniai tvarsčiai ir žaizdų valymas.

Palankiausi rezultatai užfiksuoti naudojant 0,03% koncentracijos gelį. Maždaug 25% pacientų opos visiškai užgijo per tris mėnesius, ypač kai pakitimai buvo lengvi arba vidutinio sunkumo.

Preparatas buvo gerai toleruojamas ir sunkių nepageidaujamų reiškinijų nebuvo pranešta.

Stebėjimai atitiko ankstesnius laboratorinius tyrimus, rodančius timozino β4 dalyvavimą odos ląstelių migracijoje, kolageno gamyboje ir naujų kraujagyslių susidaryme.

Vidutinio sunkumo sausų akių sindromo tyrimas: iš dalies naudingi rezultatai

II fazos klininiame tyrime Sosne ir Ousler (2015 m.) vertino RGN-259 lašus, kurių sudėtyje yra 0,% timozino β4, 72 suaugusiems, turintiems vidutinio sunkumo arba sunkų akių sausumo sindromą [6].

Tyrimas buvo vieno centro, randomizuotas, dvigubai aklas, kontroliuojamas placebu. Jame naudotas kontroliuojamos nepalankios aplinkos (Controlled Adverse Environment, CAE™) modelis, leidžiantis įvertinti akių paviršiaus reakciją į tam tikras sąlygas.

Tyrimas truko 28 dienas, o per 32 dienas buvo suplanuoti šeši kontroliniai vizitai. Dalyviai buvo atsitiktinai priskirti į RGN-259 arba placebo grupę.

Du pagrindiniai vertinamieji baigtiniai punktai – akių diskomforto sumažėjimas ir apatinės ragenos dažymosi apribojimas – neparodė statistiškai reikšmingo pagerėjimo per suplanuotą matavimą 29-ąją dieną.

Kartu buvo pastebėti teisingi kelių antrinių parametrų pokyčiai. 28-ąją dieną diskomfortas, sukeltas CAE™ poveikio, buvo 27% mažesnis nei placebo grupėje. Taip pat nustatytas reikšmingas vidurinės ir viršutinės ragenos dalies pagerėjimas.

Gerėjo ir kai kurie akių paraudimo, ašarų plėvelės stabilumo bei kasdien registruojamų simptomų rodikliai.

Nepageidaujamų reiškinių, susijusių su tiriamuoju preparatu, ar problemų dėl akių saugumo vertinimo nepastebėta.

Nors tyrimas nepasiekė suplanuotų pirminių baigčių, antriniai rezultatai pateisino tolesnius tyrimus, įskaitant didesnių pacientų grupių ir tinkamo matavimo laiko vertinimą.

Timozinas β4 lėtinėse ragenos opose

Dunn ir bendradarbiai (2010) aprašė keturių pacientų, kurių amžius svyravo nuo 47 iki 84 metų, keturių klinikinių atvejų seriją, pasižyminčią ilgai besitęsiančiomis neurotrofinėmis ragenos opomis [7].

Pažeidimo priežastys buvo, be kita ko, juosminė akių pūslelinė ir cukrinis diabetas. Ankstesnis gydymas, apimantis antibiotikus, drėkinamuosius preparatus, steroidinius lašus ir apsauginius lęšius, nedavė laukiamo pagerėjimo.

Pacientai thymozino β4 lašus, kuriuos tiekė „RegeneRx Biopharmaceuticals“, gavo keturis kartus per dieną keturias savaites.

Vienam pacientui ragenos defektas visiškai užgijo per 25 dienas ir išliko uždaras iki 56-osios dienos. Antrajam nustatytas žymus pažeidimo ploto sumažėjimas iki 28-osios dienos. Trečiajam gijimas vyko lėčiau, tačiau progresavo iki 70-osios dienos. Ketvirtajam ragena užgijo iki 42-osios dienos, o gautas rezultatas išliko.

Nė vienas iš pacientų nepranešė apie skulsmą ar nepageidaujamą poveikį. Visiems buvo stebimas komforto pagerėjimas ir paraudimo sumažėjimas.

Nedidelė atvejų serija leido daryti prielaidą apie galimybę toliau tirti timoziną β4 sunkiai gyjančių ragenos pažeidimų atveju, tačiau neleido padaryti vienareikšmių išvadų dėl veiksmingumo.

Žaizdų uždarymas ir gijimo laikas: tyrimų su gyvūnais ir žmonėmis rezultatai

Tyrimai su gyvūnais ir ankstyvieji klinikiniai tyrimai roodė, kad timozinas β4 gali turėti įtakos žaizdų gijimo tempui ir laikui, kurio reikia joms visiškai užgyti.

Pilnasluoksnių odos žaizdų modeliuose sveikoms žiurkėms, cukriniu sergančioms pelėms, steroidus gaunančioms žiurkėms ir vyresnio amžiaus pelėms greitesnis gijimas buvo stebimas grupėse, gaunančiose timoziną β4 [9].

Klininiuose tyrimuose dėl veninių opų ir pragulų pacientai, kurių žaipai užgijo panaudojus timoziną β4, šį rezultatą pasiekė vidutiniškai maždaug mėnesiu anksčiau nei asmenys, gavę placebą.

Tyrimai su gyvūnais daugiausia buvo orientuoti į žaizdų užsitraukimo greitį, tuo tarpu klinikiniuose tyrimuose buvo vertinamas visiškas žaizdų sugijimo laikas.

Siūlomi mechanizmai apima ląstelių migracijos skatinimą, kamieninių ląstelių dalyvavimą audinių atstatyme, uždegimo mažinimą, ląstelių apsaugą nuo pažeidimų ir galimą infekcijų rizikos sumažinimą.

Rezultatai rodo aktyvumą įvairiuose gyjimo etapuose, tačiau norint patvirtinti naudą, nustatyti tinkamas formuluotes ir identifikuoti pacientų grupes, būtina atlikti didesnės apimties tyrimus.

Gelis su timozinu β4 veninėse blauzdų opose

Guarnera ir bendradarbiai (2007) suprojektavo europinį tyrimą dėl timozino β4 esant veninėms opoms, atliekamą dešimtyje Italijos ir Lenkijos ligoninių [10].

Tyrimas buvo atsitiktinių imčių, dvigubai aklas ir placebu kontroliuojamas. Jį sudarė trijų dozių grupės po 24 dalyvius, o tris ketvirtadalius dalyvių turėjo gauti timoziną β4.

Visi pacientai taip pat gavo standartinę žaizdų priežiūrą, įskaitant kompresinę terapiją ir opų valymą.

Per 84 dienas ant žaizdų buvo tepamas timozino β4 gelis arba placebas, o vėliau buvo vykdomas papildomas 14 dienų stebėjimas.

Pagrindiniai vertinami parametrai buvo visiškai užgijusių opų procentinė dalis iki 84-osios dienos ir vidutinis gijimo laikas.

Taip pat buvo stebimas saugumas, timozino β4 koncentracija kraujyje ir kas savaitę atliekamų laboratorinių tyrimų rezultatai.

Tyrimo publikavimo metu jis vis dar tebevyko, o į pirmąją grupę, gausiančią mažiausią dozę, buvo įtrauktas 21 asmuo.

Projekto stipriosios šalys buvo griežtas aklumas, detalus stebėjimas ir tikslūs žaizdų paviršiaus matavimai. Apribojimai apėmė nedidelį suplanuotą dalyvių skaičių – 72 asmenis – ir galutinių rezultatų trūkumą publikavimo metu.

Odos regeneracija: tyrimų apžvalgos rezultatai

Kleinman ir Sosne (2016) pateikė laboratorinių ir klinikinių tyrimų, susijusių su timozino β4 poveikiu odos gijimui, apžvalgą [8].

Peptidas natūraliai aptinkamas žmogaus audiniuose ir trombocituose. Jis buvo tiriamas įvairiomis formomis, įskaitant vietinio poveikio gelius, injekcinius preparatus bei sintetines ir dimerines molekulės atmainas.

Gyvūnų modeliuose timozinas β4 pagreitino žaizdų gijimą ir tokiomis sąlygomis, kurios apsunkina regeneraciją, pavyzdžiui, senėjimo, cukrinio diabeto, steroidų vartojimo ir sutrikusios kraujotakos atveju.

Stebėtas padidėjęs angiogenezė, odos ląstelių migracija ir geriau organizuota kolageno struktūra, taip pat sumažėjęs randrėjimas.

Išemijos modeliuose peptidas padidino odos lopų išgyvenamumą ir pagerino atsistatymą po galūnių išemijos, ypač naudojant kontroliuojamo atpalaidavimo sistemas.

Tyrimuose su gyvūnais dimerinės timozino β4 formos parodė šiek tiek didesnį su gijimu susijulį aktyvumą nei įprasta monomerinė forma.

Klininiuose tyrimuose ankstyvieji saugumo vertinimai neparodė reikšmingų nepageidaujamų reiškininių ar išmatuojamų medžiagos koncentracijų kraujyje po vietinio vartojimo.

Tryys nedideli II fazės tyrimai, atlikti su lėtinėmis žaizdomis, tokiomis kaip pragulos, veninės opos ir epidermolysis bullosa, parodė spartesnį gijimą naudojant gelius, kurių sudėtyje yra 0,02–0,03% timozino β4, ypač nuo ketvirtos iki devintos savaitės [8].

Žemesnės ir aukštesnės koncentracijos nedavė tokių pačių palankių rezultatų, o tai pabrėžia koncentracijos ir biologinio atsako priklausomybės svarbą.

Mechanizmai apėmė uždegimo ir ląstelių pažeidimo mažinimą, žalingų molekulių reguliavimą, odos ląstelių ir kraujagyslių migracijos bei augimo skatinimą, taip pat galimą kamieninių ląstelių ir plaukų folikulų aktyvavimą.

Poveikis buvo siejamas su tam tikrais peptido fragmentais ir signaliniais keliais, į anksčiau minėtus ATP receptorius, PI3K/AKT bei šiluminio šoko baltymus.

Apžvalgoje aptarti eksperimentiniai geliai, kurių koncentracija siekia 0,02–0,03%, naudojami tyrimuose, trunkančiuose apie 8–12 savaičių. Šie parametrai taikomi tyrimų protokolams, o ne nustatytoms klinikinėms rekomendacijoms.

Remiantis apžvalga, timozino β4 saugumas buvo vertiniamas maždaug 200 pacientų I ir II fazės tyrimuose. Nebuvo pranešta apie jokius sunkius nepageidaujamus reiškinius net ir tyrimuose su didelėmis intraveninėmis dozėmis [8].

Kadangi timozinas β4 dalyvauja ląstelių migracijoje ir angiogenezėje – procesuose, kurie taip pat gali būti svarbūs vėžio vystymuisi, onkologinio saugumo klausimui reikia skirti ypatingą dėmesį.

Atliekant odos tyrimus, navikų vystymąsi skatinančio poveikio nepastebėta, o kai kurie rezultatai netgi parodė priešvėžinį aktyvumą tam tikruose modeliuose, pavyzdžiui, daugybinės mielomos atveju.

Tačiau autoriai pabrėžė tolesnių molekulinių mechanizmų tyrimų, parametrų parinkimo pagal žaizdų tipą ir tobulesnių formulacijų, įskaitant dimerus bei aktyvius peptido fragmentus, poreikį.

Timozinas β4 esant pūslelinei epidermolizei (EB)

Timozinas β4 taip pat buvo tiriamas sergant pęcherzowym oddzielaniem się naskórka (Epidermolizė buloza, EB) ir kitų sunkių odos pažeidimų.

EB yra reta genetinė liga, sukelianti didelį odos traurumą ir dažną pūslių susidarymą. Ji susijusi su skausmu, padidėjusia infekcijų rizika, randų susidarymu, negalia, oiaisiais atvejais – ir odos vėžiu. Pirminiame šaltinyje gydymas apibūdinamas kaip iš esmės palaikomasis, pasižymintis ribotu veiksmingumu [11].

Timozinas β4 natūraliai aptinkamas daugumoje audinių ir kūno skysčių, įskaitant žaizdų skystį. Jis dalyvauja reguliuojant uždegimą, ląstelių išgyvenimą, angiogenezę ir ekstraląstelinės matrikso organizavimą.

Skirtingi peptido fragmentai atsakingi už skirtingą biologinį aktyvumą. Vieni dalyvauja mažinant uždegimą ir fibrozę, kiti palaiko ląstelių išgyvenimą, migraciją, kraujagyslių formavimąsi ar širdies raumens atstatymo procesus.

Siūlomi mechanizmai apima NF-κB signalizacijos slopinimą, odos ląstelių apsaugą nuo pažeidimų, maistinių medžiagų tiekimo didinimą per angiogenezę, ląstelių migracijos ir adhezijos pagerėjimą bei tvarkingesnį kolageno nusodinimą.

Taip pat buvo aprašytos antimikrobinės ir antioksidacinės savybės, kurios gali padėti sumažinti infekcijas ir oksidacinę pažeidimą [11].

II fazos tyrime, kurio metu buvo stiriama apie 30 epidermolysis bullosa (EB) sergančių pacientų, buvo vertinamos três vietinio preparato koncentracijos.

Pagrindinio tikslo – visiško žaizdų gijimo iki 56-osios dienos – nebuvo pasiekta. Tačiau 14-ąją dieną žaizdų plotas timozino β4 grupėje buvo mažesnis nei placebo grupėje.

Šaltinė medžiagoje nurodoma, kad JAV FDA nebeteikalauja visiško žaizdų užgijimo kaip vienintelio pagrindinio baigties taško EB tyrimuose, todėl dalinis pagerėjimas taip pat gali būti svarbus tyrimo rezultatas.

Pradiniai žaizdų paviršiaus stebėjimai skatino tolesnius tyrimus, ypač atsižvelgiant į tai, kad šiuolaikinės genų terapijos išlieka sudėtingos ir brangios.

Deriologiniai tyrimai iki šiol rodė palankų toleravimo profilį, taip pat ir vyresnio amžiaus žmonėms, sergantiesiems cukriniu diabetu bei asmenims, sergantiems EB. Tačiau nedidelis dalyvių skaičius riboja galimybę daryti išvadas apie retus ir ilgalaikius šalutinius poveikius.

Kiti eksperimentiniai tyrimų su gyvūnais ir laboratoriniai rezultatai

Gliukozės ir jautrumo insulinui reguliavimas

Tyrimuose su cukrumi sergančiomis pelėmis timozinas β4 paveikė glikemijos kontrolę ir raumenų jautrumą insulinui.

Zhu ir bendradarbiai (2012) 12 savaičių skyrė timoziną β4 sergantiems cukriniu diabetu pelėms [12]. Buvo naudojama KK Cg-Ay/J padermė, o eksperimentinė dozė buvo 100 ng 10 g kūno svorio, švirkščiama injekcijomis.

Palyginti su negydytomis sergančiomis diabetu pelėmis, gyvūnai, gavę peptídą, pasiekė geresnių gliukozės toleravimo testų rezultatų, turėjo mažesnį HbA1c ir trigliceridų kiekį bei didesnę adiponektino – hormono, dalyvaujančio reguliuojant jautrumą insulinui – koncentraciją.

Taip pat gerėjo raumenų ląstelių jautrumas insulinui, kurį lydėjo fosforilinto AKT lygio padidėjimas.

Panašių pokyčių sveikoms pelėms nepastebėta, o tai rodo poveikio priklausomybę nuo sergant cukraligė būdingų metabolinių sąlygų.

Kraujotakos ir nervų funkcijos atstatymas sergant diabetine neuropatija

Wang ir bendradarbiai (2012) tyrė timoziną β4 2 tipo cukriniu diabetu ir diabetine neuropatija sergančioms pelėms [13].

Tirtame modelyje buvo stebimas kraujotakos pagerėjimas ir kraujagyslių tankio padidėjimas sėdmenių nerve – viename pagrindinių apatinės galūnės nervų.

Taip pat gerėjo nervų funkcijos rodikliai.

Pažeistuose nervuose didėjo angiopoetino-1 (Ang1), baltymo, dalyvaujančio kraujagyslių stabilizavime, lygis, o angiopoetino-2 (Ang2), susijusio su kraujagyslių funkcijos sutrikimais, lygis mažėjo.

Pokyčiai buvo stebimi endotelio ląstelėse ir Švano ląstelėse, kurios palaiko normalią nervų veiklą.

Atliekant laboratorinius tyrimus su ląstelėmis, timozinas β4 taip pat skatino su angiogeneze susijusius procesus esant didelei gliukozės koncentracijai.

Mechanizmas buvo siejamas su PI3K/AKT signaliniu keliu, kuris yra svarbus kraujagyslių stabilumui ir funkcijai.

Diabetu sergamų pacientų kraujagyslių ląstelių funkcijos pagerėjimas

Su ir bendraautoriai (2022) analizavo timozino β4 poveikį kraujagyslių endotelio ląstelėms, gautoms iš diabetu sergančių pacientų indukuotų pluripotencinių kamieninių ląstelių, vadinamoms dia-hiPSC-ECs [14].

Šios ląstelės paprastai pasižymi funkciniais sutrikimais.

Po ekspozycijos į 600 ng/ml timozino β4 buvo stebėtas didesnis ląstelių gyvybingumas, greitesnis augimas ir lėtesnis ląstelių senėjimas.

Taip pat mažėjo endotelino-1 (ET-1), susijusio su kraujagyslių susiaurėjimu, ir MMP-1 – fermento, dalyvaujančio audinių irklavime (degradacijoje) – gamyba.

Ne visi sutrikimai buvo ištaisyti. Be kita ko, nebuvo atkurta normali ląstelių energijos apykaita ir kai kurie kiti metaboliniai parametrai.

Kai ląstelės, paveiktos timozino β4, buvo persodintos pelėms, sergančioms diabetu ir galūnių kraujotakos sutrikimais, galūnių kraujotaka žymiai pagerėjo.

Autoriai siejo rezultatus su AKT signalizacijos aktyvacija ir žalingų uždegiminių mediatorių slopinimu.

Odos regeneracija sergant diabetas sergantiems pelėms ir vyresnio amžiaus gyvūnams

Philp ir kt. (2003) tyrė timoziną β4 sergantiems cukriniu diabetu db/db pelytėms ir labai senoms 26 mėnesių amžiaus pelytėms, kurioms buvo padarytos gilios odos žaizdos [15].

Preparatas buvo vartojamas vietiškai PBS tirpale arba hidrogelyje.

Sergančioms cukrumi pelėms timozinas β4 skatino žaizdų traukimąsi ir kolageno, kuris dalyvauja atstatant odą, gamybą.

Iki aštuntos dienos visoms diabetu sergančioms pelėms žaizdos buvo visiškai padengtos oda, todėl didelių keratinocitų migracijos skirtumų nepastebėta.

Vyresnio amžiaus pelėms, kurių gijimo procesai vyksta natūraliai lėčiau, timozinas β4 akivaizdžiai paspartino žaizdų gijimą, pagerino keratinocitų migraciją ir padidino tiek žaizdų susitraukimą, tiek kolageno kiekį.

Formuliškumo tipas – PBS ar hidroželis – rezultatams esminės įtakos neturėjo.

Tyrėjai taip pat įvertino trumpą septynių aminorūgščių timozino β4 fragmentą LKKTETQ.

Vyresnio amžiaus pelėms šis fragmentas pasižymėjo aktyvumu, artimu visai molekulei. Tai leido daryti prielaidą, kad svarbi su gijimu susijusio poveikio dalis gali kilti būtent iš šio fragmento, kuris veikia ląstelių migraciją ir kolageno persitvarkymą per aktino citoskeleto reguliavimą.

Odos nudegimų gijimas sergant cukriniu diabetu

Kim ir Kwon (2014) tyrė timoziną β4 pelėms, sergančioms diabetu ir patyrusioms sunkius odos nudegimus [16].

Nusakymai buvo sukelti karštu vandeniu 10 mm dydžio plote. Timozinas β4 buvo švirkščiamas šalia žaizdos 5 mg/kg doze du kartus per savaitę dvi savaites.

Palyginti su negydytomis pelėmis, gyvūnai, gavę peptidotą, pasižymėjo greitesniu gijimu, didesniu naujo granuliacinio audinio kiekiu ir stipresniu kraujagyslių vystymusi žaizdos srityje.

Mažėjo ir RAGE baltymo lytis, kurio padidėjęs aktyvumas sergant cukriniu diabetu yra susijęs su lėtiniu uždegimu ir gijimo sutrikimais.

RAGE signalizacijos slopinimas galėjo sumažinti nepalankų uždegiminį atsaką ir skatinti normalios kraujotakos atstatymą pažeistoje odoje.

Žaizdų gijimas esant įvairioms ligų būklėms

Timozino β4 tyrimai apėmė nudegimus, diabetines žaolas, venines blauzdų opas, pragulas ir epidermolysis bullosa.

Turimi įrodymai gauti iš tyrimų su gyvūnais ir palyginti nedidelių ankstyvųjų klinikinių tyrimų, kurie skiriasi savo metodologija ir vertinamaisiais rodikliais.

Gao ir bendradarbiai (2022) atliko tyrimų apžvalgą ir nurodė, kad vietinė 0,02–0,03 % koncentracija parodė geriausius rezultatus efektyvumo ir toleravimo požiūriu nagrinėtuose protokoluose [17].

Timozinas β4 natūraliai randamas kraujo plokštelėse ir žaizdų skystyje. Jis dalyvauja uždegimo reguliavime, angiogenezėje, odos ląstelių migracijoje ir randėjimo mažinime.

Graužikų nudegimų modeliuose po oda skiriama 30 mg/kg dozė du kartus per savaitę reikšmingai pagreitino gijimą, ypač deriniuose su kitais augimo faktoriais, tokiais kaip bFGF.

Atliekant vyresnio amžiaus pelėms cukrinio diabeto sukeltų žaizdų tyrimus, vietiškai vartojami preparatai, kurių sudėtyje yra 0,01–0,03 % timozino β4, pagerino odos atsinaujinimą, kraujagyslių vystymąsi ir sumažino uždegimą.

II fazos tyrime, kuriame dalyvavo 72 asmenys, turintys pragulas, gelis, kurio sudėtyje yra 0,02 % timozino β4, paspartino gijimą tarp ketvirtosios ir devintosios savaitės.

Gydant venines opas, 0,03 % koncentracijos gelis padėjo visiškai užgydyti žaizdas 33,3 % pacientų, palyginti su 17,6 % placebo grupėje.

EB sergantiems pacientams visos tirtos koncentracijos nuo 0,01 % iki 0,10 % parodė gijimo aktyvumo požymius, tačiau dėl riboto dalyvių skaičiaus nepavyko pasiekti statistinio reikšmingumo.

Mechanistiškai timozinas β4 gali dalyvauti visose gijimo fazėse.

Ankstyvoje stadijoje ji padeda stabilizuoti krešulius ir riboti oksidacinę žalą, susijusią su ROS ir NO.

Proliferacinėje fazėje jis gali skatinti angiogenezę per VEGF, PI3K/AKT ir susijusius signalinius kelių kelius.

Vėlesniuose etapuose jis dalyvauja atstatant odos barjerą ir reguliuojant per didelį kolageno bei fibroblastų kaupimąsi.

Skirtingai nei kai kurie augimo faktoriai, timozinas β4 gali difunduoti per audinius ir moduliuoti natūralius atkuriamuosius atsakus be tiesioginio per didelio ląstelių dauginimosi skatinimo.

Apžvalgos autoriai taip pat atkreipė dėmesį į formuluotės svarbą. Sušvirkštus į veną, timozino β4 pusinės eliminacijos laikas yra palyginti trumpas – apie 2,1 valandos.

Pažangios sistemos, tokių kaip kolageno-chitozano kempinės ir etosominiai geliai, gali pratęsti jos vietinio veikimo laiką.

Vietiniai geliai, kurių koncentracija yra 0,02–0,03 %, davė teigiamų rezultatų, tačiau poveikio ir dozės santykis priminė varpo formos kreivę. Tai reiškia, kad didesnė koncentracija nebūtinai lemia stipresnį poveikį.

Tyrimuose su sveikais savanoriais nebuvo užfiksuota jokių rimtų saugumo problemų netgi esant didelėms intraveninėms dozėms, siekiančioms 1260 mg. Vis dėlto autoriai rekomendavo būti atsargiems interpretuojant duomenis apie asmenis, sergančius aktyvia vėžio forma, dėl timozino β4 dalyvavimo ląstelių augimo ir migracijos procesuose.

Aptartos koncentracijos ir kontroliuojamo atpalaidavimo sistemos išlieka tyrimų objektais, o ne patvirtintomis klinikinėmis rekomendacijomis [17].

Nervų regeneracija esant diabetinei neuropatijai

Wang ir bendradarbiai (2019) tyrė timoziną β4 pelėms, sergančioms cukriniu diabetu ir turinčioms periferinių nervų pažeidimą [18].

Po czterejų savaičių buvo stebimas nervinio laidumo ir jautrumo temperatūrai pagerėjimas, smulkiųjų kraujagyslių skaičiaus padidėjimas sėdiškajame nerve bei geresnė apsauginių nervinių barjerų būklė.

Tyrėjai analizavo angiopoetino-1 ir jo receptoriaus Tie2 signalinį kelią.

Kai receptorius Tie2 buvo užblokuotas, timozino β4 poveikis išnyko. Tai rodo lemiamą Ang1/Tie2 signalizacijos vaidmenį stebimiems nervų regeneracijos pokyčiams.

Nervų regeneracija nesumažinus glikemijos

Atskirame 16 savaičių tyrime Wang ir bendradarbiai (2015) parodė, kad timozinas β4 pagerino nervų veiklą nepaisant to, kad kraujo gliukozės koncentracija nesumažėjo [19].

Stebėtas geresnis nervinis laidumas, pagerėjęs jautrumas ir geriau išsaugota aksonų bei mielino struktūra.

Laboratoriniuose eksperimentuose peptidas skatino neuritų, t. y. nervinių ląstelių the ataugų, augimą.

Šis poveikis išnyko užblokavus „Tie2“, o tai vėlgi rodė „Ang1/Tie2“ kelio dalyvavimą.

Apibendrinant galima teigti, kad tyrimai su pelėmis rodo, jog kraujotakos ir nervų struktūros pokyčiai gali vykti nepriklausomai nuo glikemijos kontrolės. Klinikinė šio mechanizmo reikšmė žmonėms lieka nežinoma.

Kaulų gijimas ir struktūrinis stiprumas pelėms

Brady su kolegomis (2014) tyrė timozino β4 poveikį blauzdikaulio gijimui po chirurginės operacijos pelėms [20].

Gyvūnams buvo skiriamas fiziologinis tirpalas arba timozinas β4 (6 mg/kg) sistemine injekcija.

21-ąją dieną timozino β4 grupės kaulams sulaužyti reikėjo 41% didesnės jėgos, o jų standumas buvo 25% didesnis nei kontrolinės grupės.

Vaizdiniai tyrimai parodė 18% daugiau naujai susidariusio mineralizuoto kaulinio audinio ir 26% daugiau stipriai mineralizuoto, brandaus kaulo.

Tuo tarpu kaulinio audinio tūris buvo 23% mažesnis. Joje buvo 47% mažiau seno kaulinio audinio ir 31% daugiau naujo akytojo audinio.

Rezultatai rodo efektyvesnį kaulų persitvarkymą ir geresnes gyjančio audinio mechanines savybes šiame modelyje.

Raičių regeneracija ir mechaninis atsparumas

Xu ir bendradarbiai (2013) tyrė žiurkes su chirurgiškai perpjautu blauzdikauliu šalutiniu raiščiu (MCL), vienu pagrindinių kelio sąnarį stabilizuojančių raiščių [21].

Tiesiogiai į pažeidimo vietą buvo dedama nedidelė kiekis gelio, kurio sudėtyje buvo 1 µg timozino β4.

Po keturių savaičių atsidarantys timozino β4 grupės raiščiai pasižymėjo geriau sutvarkyta kolageno struktūra bei storesnėmis ir stipresnėmis skaidulomis.

Šie pakeitimai lėmė didesnį mechaninį patvarumą bandymų metu.

Rezultatai atitiko timozino β4 dalyvavimą ląstelių migracijoje, angiogenezėje ir kolageno gamyboje – procesuose, kurie yra svarbūs raiščių gijimui.

Uždegimo ir kaulų nykimo mažinimas periodonto ligų modeliuose

Lee ir bendradarbiai (2016) tyrė timozino β4 poveikį ląstelėms, dalyvaujančioms periodonto uždegime ir kaulinio audinio netekime [22].

Žmogaus periodonto raiščio ląstelėse (PDLCs), paveiktose vandenilio peroksido sukelto oksidacinio streso, natūralus timozino β4 lygis sumažėjo.

Prisidėjus peptidui, sumažėjo uždegiminių mediatoriu, tokių kaip azoto oksidas (NO), prostaglandinas E₂ (PGE₂), TNF-α ir interleukino šeimos citokinos, lygis.

Taip pat gerėjo RANKL/OPG santykis, svarbus kaulų rezorbcijos reguliavimui.

Pelės kaulų čiulpų ląstelėse, skatinamose diferencijuotis į osteoklastus, timozinas β4 slopino šių ląstelių susidarymą ir su kaulų irimu susijusių genų aktyvumą.

Mechanizmas apėmė MAPK ir NF-κB signalizacijos susilpnėjimą.

Reikšmės turėjo ir Wnt5a takelis. Jo blokavimas stiprino timozino β4 poveikį, o Wnt5a peptido pridėjimas silpnino stebėtus efektus.

Rezultatai rodo sudėtingus ryšius tarp uždegimą ir kaulų metabolizmą reguliuojančių signalinių takų.

Vaisiaus ir organų vystymasis nėštumo metu pelėms

Faa ir bendradarbiai (2021) tyrė timoziną β4 nėščioms pelėms [23].

Gyvūnams buvo skiriama po 6 mg/kg peptido injekcijomis 14-ąją ir 17-ąją vaismingumo dieną.

Patelų, gavusių timozino β4, palikuonys buvo didesnio kūno ilgio ir geriau išsivysčiusių organų nei kontroliniai gyvūnai.

Pokyčiai, be kita ko, palietė plaučius, širdį, inkstus, smegenis, įskaitant smegenų žievę, bei nugaros tetivą.

Rezultatai rodo galimą timozino β4 dalyvavimą angiogenezėje, ląstelių migracijoje ir diferenciacijoje pelės embriono vystymosi metu.

Vis dėlto jie nepatvirtina naudos arba saugumo vartojant nėščiosioms ar neišnešiotiems naujagimiams.

Mirtingumas ir uždegimas sunkios sepsio modeliuose

Badamchian su kolegomis (2003) tyrė timoziną β4 graužikų sepsio modelyje, kurį sukėlė lipopolisacharidas (LPS) – stiprus imuninį atsaką aktyvuojantis faktorius [24].

Po ekspozycijos LPS gyvūnams mažėjo timozino β4 lygis.

Panašūs pokyčiai buvo stebėti humanitariniams savanoriams ir pacientams, kuriems pasireiškė septinis šokas, o tai leido daryti prielaidą, kad stipraus uždegimo metu thymozino β4 atsargos mažėja.

Pelės, gavusios 100 µg timozino β4 po 0, 2 ir 4 valandų nuo LPS suleidimo, pasižymėjo mažesniu mirštamumu ir mažesniu uždegiminių mediatoriais, tokiais kaip IL-1β ir 6-keto-PGF1α, lygiu.

Rezultatai parodė pernelyg didelio imuninio atsako slopinimą ir galimą apsaugą nuo sunkių uždegimo pasekmių šiame modelyje.

Plaučių fibrozė ir kvėpavimo funkcija

Yu ir kt. (2025) tyrė įkvepiamą rekombinacinį žmogaus timoziną β4 (rhTβ4) pelėms sukeltului plaučių pažeidimui bleomicinu modelyje [25].

Peptidas buvo skiriamas ankstyvuoju, viduriniu arba vėlyvuoju pažeidimo vystymosi etapu.

Visais tiriamais laikotarpiais buvo stebėta mažesnė plaučių fibrozė, mažesnis kolageno kiekis ir geresni kvėpavimo funkcijos rodikliai.

Laboratoriniuose eksperimentuose timozinas β4 ribojo skaidulinio audinio susidaryme dalyvaujančių fibroblastų proliferaciją ir migraciją.

Ji taip pat mažino nepalankius plaučių epitelio ląstelių pokyčius ir reguliavo TGF-β1 – vieno pagrindinių fibrozės mediatoriai – aktyvumą.

Rezultatai rodo aktyvumą įvairiais eksperimentinio plaučių pažeidimo etapais.

Širdies ir plaučių apsauga plautinės hipertenzijos modeliuose

Wei ir bendradarbiai (2014) tyrė timoziną β4 gyvūnams, sergantiems monokrotalino sukelta plautine hipertenzija [26].

Pelėms, gavusioms peptidą, stebėtas mažesnis spaudimas plaučių apytakoje ir mažesnė dešiniojo skilvelio hipertrofija.

Molekulinės analizės parodė Notch3–Col3A1–CTGF kelio, dalyvaujančio kraujagyslių ir audinių remodeliavime, pokyčius.

Rezultatai rodo galimybę slopinti nepalankius kraujagyslių ir struktūrinius pokyčius eksperimentinės plaučių hipertenzijos atveju.

Daugelio organų audinių atstatymas: tyrimų su gyvūnais apžvalga

Philp ir Kleinman (2010) apžvelgė timozino β4 tyrimus įvairiuose organuose [27].

Ragienos pažeidimo modeliuose vietinis 5 µg 5 µl dozės taikymas du kartus per parą pagreitino ragienos nudegimų gijimą, nesukeldamas nepageidaujamos angiogenezės.

Atliekant odos tyrimus su sergančiais cukriniu diabetu ir pagyvenusiais gyvūnais, peptidas skatino ląstelių migraciją, kolageno gamybą ir naujų kraujagyslių vystymąsi.

Taip pat buvo stebėtas poveikis plaukų augimui aktyvuojant plaukų folikulus.

Atliekant širdies tyrimus, timozinas β4 buvo vertinamas tiek su mažais gyvūnais, pavyzdžiui, pelėmis, gaunančiomis 400 ng, tiek su didesniais gyvūnais, tokiais kaip 15 mg gaunančios kiaulės.

Šiuose modeliuose buvo aprašytas audinių pažeidimo sumažėjimas, padidėjęs širdies ląstelių išgyvenamumas ir mažesnis randarodatis po traumos.

LPS sukeltų sepsio modeliuose pastebėtas silpnesnis uždegiminis atsakas ir didesnis išgyvenamumas.

Atliekant smegenų ir centrinės nervų sistemos tyrimus, timozinas β4 ribojo neuronų pažeidimus ir skatino oligodendrocitų – ląstelių, gaminančių nervų skaidulas supančią mieliną, – vystymąsi.

Siūlomi mechanizmai apėmė uždegiminių mediatorių slopinimą, matrikso metaloproteinazių (MMP) reguliavimą, NF-κB ir Akt signalizacijos moduliavimą bei kamieninių ląstelių aktyvavimą.

Apžvalgoje taip pat buvo aprašyti žiurkių ir beždžionių toleravimo rezultatai, gauti esant tiriamoms dozėms. Tačiau toksikologiniai duomenys, gauti iš gyvūnų, neleidžia vieni patys nustatyti plataus saugumo margino žmonėms.

Plaučių apsauga nuo reperfuzinio pažeidimo po aortos užspaudimo

Yaman ir bendradarbiai (2019) tyrė timoziną β4 žiurkių aortos išemijos ir reperfuzijos modelyje [28].

Gyvūnams buvo skiriama 10 mg/kg peptido likus valandai iki aortos užspaudimo arba likus 15 minučių iki kraujotakos atstatymo.

Abi laiko schemos davė panašius rezultatus.

Timozinas β4 mažino oksidacinį stresą, mažino uždegiminių citokinų lygį, gerino antioksidacinius parametrus plaučiuose bei kraujyje ir ribojo audinių pažeidimus.

Rezultatai rodo galimą apsaugą nuo ūminio plaučių pažeidimo, susijusio su kraujotakos nutraukimu ir atstatymu, pavyzdžiui, eksperimentiniuose chirurginių procedūrų ir traumų modeliuose.

Stemplio striktūrų susidarymo ribojimas po chirurginės operacijos

Wang ir kt. (2019) tyrė vietinio poveikio gelį su timozinu β4 aštuonioms kiaulėms, kurioms buvo atlikta apskrita endoskopinė pogleivinė dissekcija (ESD) [29].

Ši procedūra susijusi su stemplės susiaurėjimų atsiradimo rizika.

Keturioms kiaulėms buvo užteptas vietinio poveikio gelis su timozinu β4, o keturios sudarė kontrolinę grupę.

Visiems gyvūnams pasireiškė susiaurėjimai, tačiau timozino β4 grupėje jie buvo mažiau išreikšti.

Gyvūnams, gavusiems peptidą, prireikė mažiau stemplės balioninio plėtimo procedūrų (p = 0,002), o gijimas vyko greičiau (p = 0,012).

Autoriai siejo poveikį su rando audinio susidarymo apribojimu, geresne ląstelių migracija ir sumažėjusiu per dideliu kolageno kaupimu.

Nepageidaujamų reiškinių nepranešta.

Kraujagyslių struktūros palaikymas ir aortos aneurizmų vystymasis

Munshaw ir bendradarbiai (2021) tyrė peles, kurioms trūko timozino β4 [30].

Šių gyvūnų kraujagyslių sienelės buvo silpnesnės ir jiems dažniau vystydavosi aortos aneurizmos, ypač po angiotenzino II poveikio.

Nesant timozino β4, kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelės (VSMC) dažniau keitė savo fenotipą į susijusį su nepalankiu persitvarkymu ir fibroze.

Šis reiškinys buvo siejamas su per didele PDGFRβ receptoriaus recirkuliacija, kurios aktyvumą normaliomis sąlygomis reguliuoja timozinas β4.

Imatynibo, vaisto, kuris slopina PDGFRβ, vartojimas sumažino kraujagyslių pažeidimus pelėms, kurioms trūko timozino β4.

Rezultatai rodo, că natūrali timozina β4 dalyvauja palaikant normalų kraujagyslių persitvarkymą per augimo signalų reguliavimą.

Žarnyno barjeras ir uždegimas lėtinės granulomatozinės ligos modeliuose

Renga ir bendradarbiai (2019) tyrė timoziną β4 lėtinės granulomatozinės ligos (LGL), genetického imuninės sistemos sutrikimo, modeliuose [31].

Eksperimentai apėmė žmogaus ir pelių imunines ląsteles bei peles su CGD.

Timozinas β4 atkūrė apsauginio HIF-1α baltymo aktyvumą ir skatino nekanoninę autofagiją per DAPK1.

Šie pakeitimai pagerino žarnyno barjerąją funkciją, sumažino uždegimą ir granulomų susidarymą bei padidino gyvūnų išgyvenamumą.

Rezultatai rodo timozino β4 dalyvavimą reguliuojant uždegiminį atsaką ir pažeistų ląstelinių komponentų šalinimo procesus žarnyne.

Aterosklerozė ir kraujagyslių stabilumas

Munshaw ir bendradarbiai (2023) tyrė timoziną β4 ApoE⁻/⁻ pelėms, turinčioms polinkį į aterosklerozės vystymąsi [32].

Buvo lyginami gyvūnai su normalia timozino β4 raiška ir pelės, neturinčios šio baltymo.

Be timozino β4 pelėms vystėsi didesnės aterosklerozinės plokštelės, buvo stebimi stipresni kraujagyslių sienelės vidurinio sluoksnio pažeidimai, o lygiųjų raumenų ląstelės prarado normalias savybes.

Sveikose kraujagyslėse timozinas β4 buvo aptinkamas ląstelėse, dalyvaujančiose palaikant jų tonusą ir funkciją, o jo liekamasis kiekis sumažėjo pakitusios patologijos ląstelėse.

Tymozino β4 trūkumas lėmė per didelį PDGFRβ aktyvumą dėl sutrikusio receptoriaus reguliavimo, kas sustiprino nepalankų kraujagyslių remodeliavimą.

Rezultatai rodo apsauginį endogeninės timozino β4 vaidmenį palaikant arterijų stabilumą.

Kraujagyslių stabilizacija ir išgyvenamumas sepsio modeliuose

Bongiovanni ir bendradarbiai (2015) taikė genų terapijos metodą, kad padidintų timozino β4 raišką pelėse likus dviem savaitėms iki sepsis sukėlimo naudojant LPS [33].

Gyvūnai, kuriems pasireiškė padidėjusi timozino β4 raiška, pasižymėjo švelnesniais ligos simptomais, geresnėmis arterinio kraujospūdžio vertėmis ir mažesniu kraujagyslių pralaidumu.

Taip pat buvo stebimas didesnis išgyvenamumas ir geresnis pericitų, t. y. smulkius kraujagysles širdyje ir raumenyse supančių atraminių ląstelių, funkcionavimas.

Rezultatai rodo, kad timozinas β4 dalyvauja palaikant kraujagyslių barjero vientisumą ir ribojant per didelį skysčių nutekėjimą iš kraujagyslių sunkaus uždegimo metu.

Plaučių fibrozė ir ląstelių pažeidimas uždegiminiuose modeliuose

Tian ir bendradarbiai (2022) pritaikė genų terapiją timozinui β4 pristatyti pelėms LPS sukeltului plaučių pažeidimo modeliui [34].

Gyvūnams su padidėjusia timozino β4 raiška buvo stebimi mažesni oksidaciniai pažeidimai, mažesnis kolageno nusėdimas ir silpnesnis uždegiminis atsakas.

Atliekant laboratorinius tyrimus su žmogaus plaučių ląstelėmis, timozinas β4 palaikė pažeistų mitochondrijų atstatymą, apribojo inflamasomų aktyvaciją ir sulėtino su fibroze susijusius ląstelių pokyčius.

Ji taip pat slopino fibroblastų proliferaciją ir rando audinio susidarymą.

Rezultatai rodo timozino β4 dalyvavimą reguliuojant kelis takus, vedančius laipsniško plaučių pažeidimo link.

Žaizdų gijimas aktyvinant audinių remodeliavimo fermentus

Philip ir bendraautoriai (2006) tyrė timoziną β4 pelių odos žaizdų modeliuose bei žmogaus odos ir imuninės sistemos ląstelių kultūrose [35].

Panaudojus peptidą padidėjo metaloproteinazių MMP-1, MMP-2 ir MMP-9 – fermentų, dalyvaujančių ardant pažeistus audinių komponentus ir ruošiant vietą naujoms ląstelėms – gamyba.

Poveikis buvo stebimas keratinocituose, fibroblastuose, endotelio ląstelėse ir aktyvuotuose monocituose.

Šiam atsakymui sukelti pakako nedidelio timozino β4 fragmento, apimančio 17–23 amino rūgštis.

Tai rodo, kad peptidas dalyvauja gyjime ne tik skatindamas ląstelių migraciją ir augimą, bet ir reguliuodamas pažeistų komponentų pašalinimą bei tarpląstelinės matrikso remodeliavimą.

Rezultatai rodo ryšį tarp ląstelės citoskeleto reguliacijos ir pažeistos odos valymo bei atstatymo procesų.

Tyrimuose aprašomos dozės ir formuluotės nėra klinikinės rekomendacijos

Ankstyvuosiuose klinikiniuose tyrimuose buvo vertinamos įvairios timozino β4 formulės ir dozių diapazonai.

Aprašyti protokolai neturėtų būti suprantami kaip rekomendacijos savarankiškam vartojimui. Turimi duomenys neleidžia nustatyti standartinės gydomosios dozės.

Pirmuosiuose rekombinacinio timozino β4, NL005, intraveniniuose tyrimuose buvo vertinamos vienkartinės nuo 0,05 iki 25 µg/kg dozės ir kasdienės nuo 0,5 iki 5 µg/kg infuzijos dešimt dienų.

Koncentracija kraujyje didėjo proporcingai dozei, o pusinės eliminacijos periodas buvo maždaug dvi valandos. Reikšmingo medžiagos kaupimosi organizme nepastebėta.

Ankstesniame sintetino timozino β4 tyrime buvo naudojamos kur kas didesnės intraveninės dozės – nuo 42 iki 1260 mg per parą dvi savaites – nepranešant apie jokį sunkų šalutinį poveikį.

Oftalmologiniuose tyrimuose buvo vertinamas 0,1% timozino β4 tirpalas, atitiekantis maždaug 1 mg/ml, taikant įvairius dozavimo grafikus, nustatytus atskiruose protokoluose.

Kai kurie parametrai pagerėjo, tačiau bent vienas tyrimas nepasiekė iš anksto nustatytų pirminių baigčių.

Atliekant tris II fazės tyrimus su lėtinėmis odos žaizdomis, geriausi rezultatai buvo gauti naudojant 0,02–0,03 % koncentracijos gelius, kai jie buvo tepami kartą per dieną.

Tiek žemesnė 0,01%, tiek aukštesnė 0,1% koncentracija parodė mažiau palankius rezultatus.

Tyrimo su kiaulėmis metu vietinis 0,1% gelio naudojimas stemplės srityje sumažino randėjimą po chirurginio gleivinės pašalinimo, o tai rodo galimybę atlikti tolimesnius tyrimus su vietinio pristatymo sistemomis.

Minėtuose nedideliuose ankstyvuosiuose tyrimuose toleravimas apskritai buvo palankus, tačiau turimų duomenų nepakanka ilgalaikiam poveikiui ar retam nepageidaujamam poveikiui įvertinti.

Atliekant rekombinacinio preparato tyrimą, lengvi ir praeinantys laboratorinių tyrimų arba EKG rodiklių pokyčiai nustatyti šiek tiek daugiau nei pusei dalyvių, o jų dažnis buvo panašus kaip ir vartojant placebo.

Sunkių nepageidaujamų reiškinių ar dozės didinimą ribojančių reakcijų nepastebėta. Aptikti imuniniai atsakai buvo lengvi ir praeinantys.

Atliekant didelių sintetino timozino β4 intraveninių dozių tyrimus, buvo pranešta tik apie lengvą galvos svaigimą arba diskomfortą injekcijos vietoje, be jokių organų pažeidimo požymių.

Akių lašai ir odos geliai taip pat buvo gerai toleruojami. Su preparatu susijusio akių dirginimo nepastebėta, o lengvas odos niežulys arba paraudimas po gelio naudojimo pasireiškė dažniu, panašiu į placebą.

Tirtose sveikų savanorių grupėse pakartotinis vartojimas nesukėlė reikšmingos kumuliacijos, o stebėtos imuninės reakcijos buvo ribotos.

Vis dėlto šių rezultatų negalima apibendrinti kitoms populiacijoms, ilgesniems vartojimo laikotarpiams ar asmenims, sergantiems sunkiomis ligomis.

Kadangi klinikiniai tyrimai vis dar yra ankstyvoje stadijoje, daugelis saugumo klausimų reikalauja atsargumo.

Šaltinio medžiagoje nurodyta kontraindikacija, susijusi su padidėjusiu jautrumu peptidui arba preparato sudedamosioms dalims.

Nors iki šiol nepatvirtinta padidėjusi vėžio rizika, taip pat ir tyrimuose, kuriuose dalyvavo EB pacientai, timozino β4 gebėjimas reguliuoti ląstelių migraciją ir angiogenezę reikalauja ypatingo atsargumo asmenims, sergantiems aktyvia vėžio forma, geriausia – atliekant kontroliuojamus tyrimus.

Timozino β4 saugumas nėštumo ir žindymo laikotarpiu nenustatytas. Taip pat trūksta tinkamų farmakokinetinių ir saugumo duomenų apie asmenis, sergančius sunkiomis kepenų ar inkstų ligomis.

Šaltinių tyrimai nenustato tinkamos dozavimo schemos šioms populiacijoms.

Išvados

Anankiniai klinikiniai ir laboratoriniai tyrimai rodo, kad timozinas β4 dalyvauja daugelyje su audinių atstatymu susijusių procesų ir iki šiol vertintomis tyrimų sąlygomis paprastai yra gerai toleruojamas.

Po intravenozinio vartojimo sintetinis timozinas β4 ir rekombinombinis preparatas NL005 buvo gerai toleruojami sveikų savanorių, taip pat ir vartojant pakartotinai.

Farmakokinetika buvo palyginti nuspėjama. Medžiaga pasižymėjo trumpu pusinės eliminacijos periodu kraujyje, nesukėlė reikšmingos kumuliacijos ir išprovokavo tik nedidelius, praeinamuosius imuninius atsakus.

Atliekant okulistinius tyrimus, timozino β4 lašai rodė daug žadančių rezultatų gydant akių paviršiaus ligas.

II fazos tyrimuose ir atvejų serijose buvo pastebėtas simptomų sumažinimas, akių paviršiaus pažeidimų, vertinamų dažymo metodais, sumažėjimas ir ašarų plėvelės parametrų pagerėjimas.

Tačiau viename tyrime, kuriame buvo naudojamas CAE™ modelis, nepavyko pasiekti dviejų pagrindinių baigčių, nepaisant palankių kelių antrinių parametrų pokyčių.

Dermatologiniuose tyrimuose gels, kurių sudėtyje yra apie 0,02–0,03 % timozino β4, II fazės tyrimuose buvo siejamas su greitesniu pragulų ir veninių opų gijimu.

Šie rezultatai sutapo su ankstesniais laboratoriniais eksperimentais, rodančiais timozino β4 dalyvavimą keratinocitų migracijoje, angiogenezėje, kolageno skaidulų organizacijoje ir rando susidarymo ribojime.

Bendra turimi tyrimai rodo, kad timozinas β4 yra svarbus gijimo ir uždegiminių procesų reguliatorius.

Tačiau būtina atlikti tolesnius ilgalaikio saugumo tyrimus, ypač asmenims, kuriems kyla didesnė vėžio rizika.

Mokslininkai taip pat turėtų ieškoti biomarkeritų, leidžiančių identifikuoti pacientus, kurie galėtų gauti daugiausiai naudos, ir geriau nustatyti ryšį tarp dozės, formulavimo ir biologinio atsako.

Jei būsimi tyrimais pavyks patvirtinti dabartinius rezultatus, timozinas β4 gali tapti tolesnio akių paviršiaus ligų ir sunkiai gyjančių žaizdų gydymo kūrimo objektu.

Galimi sisteminiai taikymo būdai, įskaitant ūminius širdies ir kraujagyslių bei nervų sistemų pažeidimus, vis dėlto išlieka tiriamomis hipotezėmis, o ne patvirtinta nauda klinikinėje praktikoje.

Atsakomybės apribojimas: Straipsnis skirtas tik edukaciniais tikslais. Jis nėra medicininė konsultacija ar rekomendacija dėl timozino β4 vartojimo, dozavimo ar administravimo. Ląstelių ir gyvūnų tyrimų rezultatai nėra tolygūs saugumo ar veiksmingumo žmonėms patvirtinimui. 

Nuorodos

1. https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Thymosin-beta4#section=NCI-Thesaurus-Tree
2. Wang, X., Liu, L., Qi, L., Lei, C., Li, P., Wang, Y., Liu, C., Bai, H., Han, C., Sun, Y., ir Liu, J. (2021). Pirmasis tyrimas su žmonėmis, atsitiktinių imčių, dvigubai aklas, vienos ir kelių dozių I fazės rekombinacinio žmogaus timozino β4 tyrimas su sveikais kinų savanoriais. Klinikiniai ir transliaciniai mokslai, 14(5), 1949–1962. https://doi.org/10.1111/cts.13050
3. Sosne, G., Dunn, S. P., ir Kim, C. (2015). Timozinas β4 žymiai pagerina sunkaus sausų akių sindromo požymius ir simptomus II fazės atsitiktinių imčių tyrime. Ragena, 34(5), 491–496. https://doi.org/10.1097/ICO.0000000000000379
4. Ruff, D., Crockford, D., Girardi, G. ir Zhang, Y. (2010). Atsitiktinių imčių, placebu kontroliuojamas, vienkartinių ir daugybinių dozių tyrimas, kurio metu tiriamas intraveninis timozinas beta4 sveikiem savanoriams. Niujorko mokslų akademijos metraštis, 1194, 223–229. https://doi.org/10.1111/j.1749-6632.2010.05474.x
5. Guarnera, G., DeRosa, A., & Camerini, R. (2010). Timo gydymo poveikis veninėms opoms. Niujorko mokslų akademijos metraštis, 1194, 207–212. https://doi.org/10.1111/j.1749-6632.2010.05490.x
6. Sosne, G. ir Ousler, G. W. (2015). Timozino beta 4 akių tirpalas sausoms akims: atsitiktinių imčių, placebo kontroliuojamas II fazės klinikinis tyrimas, atliktas naudojant kontroliuojamos nepalankios aplinkos (CAE™) modelį. Klinikinė oftalmologija, 9, 877-884. https://doi.org/10.2147/OPTH.S80954 https://www.tandfonline.com/doi/full/10.2147/OPTH.S80954
7. Dunn, S. P., Heidemann, D. G., Chow, C. Y. C., Crockford, D., Turjman, N., Angel, J., Allan, C. B. ir Sosne, G. (2010). Lėtinių negyjančių neurotrofinių ragenos epitelio defektų gydymas timozinu beta 4. Oftalmologijos archyvai, 128(5), 636–638. https://doi.org/10.1001/archophthalmol.2010.71 https://pismin.com/10.1001/archophthalmol.2010.53
8. Kleinman, H. K. ir Sosne, G. (2016). Timozinas β4 skatina odos gijimą. Knygoje *Vitamins and Hormones* (t. 102, p. 251–275). Elsevier. https://doi.org/10.1016/bs.vh.2016.04.005 https://pismin.com/10.1016/bs.vh.2016.04.005
9. Treadwell, T., Kleinman, H. K., Crockford, D., Hardy, M. A., Guarnera, G. T. ir Goldstein, A. L. (2012). Regeneracinis peptidas timozinas β4 pagreitina odos gijimo greitį ikiklinikiniuose gyvūnų modeliuose ir pacientams. Niujorko mokslų akademijos metraščiai, 1270, 37–44. https://doi.org/10.1111/j.1749-6632.2012.06717.x https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23050815/
10. Guarnera, G., De Rosa, A., & Camerini, R. (2007). Timoziuinas β 4 ir veninės opos: klinikinės pastabos apie Europos perspektyvinį, atsitiktinių imčių tyrimą dėl saugumo, toleravimo ir gijimo skatinimo. Annals of the New York Academy of Sciences, 1112, [puslapiai laukiami]. https://doi.org/10.1196/annals.1415.003 https://nyaspubs.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1196/annals.1415.003
11. Yang, W. S., Kang, S., Sung, J. ir Kleinman, H. K. (2019). Timozinas β4: galimybė gydyti epidermolysis bullosa ir kitus sunkius odos pažeidimus. Europos dermatologijos žurnalas, 29(5), 459-467. https://doi.org/10.1684/ejd.2019.3642 https://stm.cairn.info/revue-european-journal-of-dermatology-2019-5-page-459?lang=en
12. Zhu, J., Su, L.-P., Ye, L., Lee, K.-O., & Ma, J.-H. (2012). Timozinas beta 4 pagerina hiperglikemiją ir sumažina KK Cg-Ay/J pelių atsparumą insulinui. Diabeto tyrimai ir klinikinė praktika, 96(1), 53-59. https://doi.org/10.1016/j.diabres.2011.12.009 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22217673/
13. Wang, L., Chopp, M., Szalad, A., Liu, Z., Lu, M., Zhang, L., Zhang, J., Zhang, R. L., Morris, D., & Zhang, Z. G. (2012). Timozinas β4 skatina periferinės neuropatijos atsigavimą II tipo cukriniu diabetu sergantiems pelėms. Neurobiologinė liga, 48(3), 546–555. https://doi.org/10.1016/j.nbd.2012.08.002 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22922221/
14. Su, L., Kong, X., Loo, S., Gao, Y., Liu, B., Su, X., Dalan, R., Ma, J., ir Ye, L. (2022). Thymosin beta‑4 improves endothelial function and reparative potency of diabetic endothelial cells differentiated from patient induced pluripotent stem cells. Stem Cell Research & Therapy, 13(1), 13. https://doi.org/10.1186/s13287-021-02687-x https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35012642/
15. Philp, D., Badamchian, M., Scheremeta, B., Nguyen, M., Goldstein, A. L. ir Kleinman, H. K. (2003). Timosinas beta 4 ir sintetinis peptidas, turintis jo aktiną jungiantį domeną, skatina odos žaizdų gijimą db/db diabetinėms pelėms ir seniems pelėms. Žaizdų gijimas ir regeneracija, 11(1), 19–24. https://doi.org/10.1046/j.1524-475x.2003.11105.x https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12581423/
16. Kim, S. ir Kwon, J. (2014). Timosinas beta 4 pagerina odos nudegimo žaizdų gijimą, sumažindamas pažangių glikacijos galutinių produktų receptoriaus ekspresiją db/db pelėms. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)–General Subjects, 1840(12), 3452-3459. https://doi.org/10.1016/j.bbagen.2014.09.013 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25230158/
17. Gao, Y. X., Wang, L. F., Ba, S. J., Cao, J. L., Li, F., Li, B., & Zhou, B. (2022). Zhonghua shao shang yu chuang mian xiu fu za zhi, 38(4), 378–384. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn501120-20210221-00059 https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC11704510/
18. Wang, L., Chopp, M., Szalad, A., Lu, X., Lu, M., Zhang, T., & Zhang, Z. G. (2019). Angiopoietino-1/Tie2 signalavimo kelias prisideda prie timozino β4 terapinio poveikio sergant diabetine periferine neuropatija. Neuromokslo tyrimai, 147, 1-8. https://doi.org/10.1016/j.neures.2018.10.005 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30326249/
19. Wang, L., Chopp, M., Jia, L., Lu, X., Szalad, A., Zhang, Y., Zhang, R. ir Zhang, Z. G. (2015). Ilgalaikinio gydymo timozinu β4 terapinė nauda nepriklauso nuo gliukozės kiekio kraujyje pelėms, sergančioms diabetine periferine neuropatija. Diabeteso tyrimų žurnalas, 2015, 173656. https://doi.org/10.1155/2015/173656 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25945352/
20. Brady, R. D., Grills, B. L., Schuijers, J. A., Ward, A. R., Tonkin, B. A., Walsh, N. C., & McDonald, S. J. (2014). Timozino β4 administravimas skatina kaulų lūžių gijimą pelėms. Ortopedinių tyrimų žurnalas, 32(10), 1277–1282. https://doi.org/10.1002/jor.22686 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25042765/
21. Xu, B., Yang, M., Li, Z., Zhang, Y., Jiang, Z., Guan, S. ir Jiang, D. (2013). Timozinas β4 skatina žiurkės vidurinio šalutinio raiščio pažeidimo gijimą. Reguliaciniai peptidai, 184, 1–5. https://doi.org/10.1016/j.regpep.2013.03.026 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23523891/
22. Lee, S. I., Yi, J. K., Bae, W. J., Lee, S., Cha, H. J., & Kim, E. C. (2016). Timozinas beta-4 slopina osteoklastinį diferenciaciją ir uždegiminius atsakas žmogaus periodonto raiščio ląstelėse. PLoS ONE, 11(1), e0146708. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0146708 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26789270/
23. Faa, G., Piras, M., Mancuso, L., Coni, P., Pichiri, G., Orrù, G., Fanni, D., Gerosa, C., Cao, G., Taibi, R., Pavone, P. ir Castagnola, M. (2021). Thymosin beta-4 prenatal administration improves fetal development and halts side effects due to preterm delivery. Europos medicinos ir farmakologijos mokslų apžvalga, 25(1), 431–437. https://doi.org/10.26355/eurrev_202101_24411 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33506933/
24. Badamchian, M., Fagarasan, M. O., Danner, R. L., Suffredini, A. F., Damavandy, H., ir Goldstein, A. L. (2003). Timozinas beta(4) sumažina mirštamumą ir slopina uždegiminius mediatorius endotoksinų sukelto septinio šoko atveju. International Immunopharmacology, 3(8), 1225–1233. https://doi.org/10.1016/S1567-5769(03)00024-9 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12860178/
25. Yu, R., Li, S., Chen, L., Hu, E., Chai, D., Liu, Z., Zhang, Q., Mao, Y., Zhai, Y., Li, K., Liu, Y., Li, X., Zhou, H., Yang, C. ir Xu, J. (2025). Inhaliuojamas egogeninis timozinas beta 4 slopina bleomicino sukeltą plaučių fibrozę pelėms per TGF-β1 signalizacijos kelią. Farmacijos ir farmakologijos žurnalas, 77(4), 582–592. https://doi.org/10.1093/jpp/rgae143 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/39579076/
26. Wei, C., Kim, I. K., Li, L., Wu, L. ir Gupta, S. (2014). Timosinas beta 4 apsaugo peles nuo monokrotalino sukeltos plautinės hipertenzijos ir dešiniojo skilvelio hipertrofijos. PLoS ONE, 9(11), e110598. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110598 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25412097/
27. Philp, D. ir Kleinman, H. K. (2010). Tyrimai su gyvūnais naudojant timoziną β4 – daugiafunkcį audinių atstatymo ir regeneracijos peptidą. Niujorko mokslų akademijos metraštis, 1194(1), 81–86. https://doi.org/10.1111/j.1749-6632.2010.05479.x https://pismin.com/10.1111/j.1749-6632.2010.05479.x
28. Yaman, O. M., Guner, I., Guntas, G., Sonmez, O. F., Tanriverdi, G., Cakiris, A., Aksu, U., Akyol, S., Guzel, E., Uzun, H., Yelmen, N., & Sahin, G. (2019). Timozino β4 apsauginis poveikis nuo pilvo aortos išemijos-reperfuzijos sukeltului ūmiam plaučių pažeidimui žiurkėms. Medicina (Kaunas), 55(5), 187. https://doi.org/10.3390/medicina55050187 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31121838/
29. Wang, H., Shuai, Q., Tang, J., Long, D., Xu, C., Liu, F., & Li, Z.-S. (2019). Vietinė timozino β4 gelio injekcija apsaugo nuo stemplės susiaurėjimo po cirkuliacinės endoskopinės submukozinės disekcijos kiaulių modelyje. Virškinimo ligos, 37(2), 87–92. https://doi.org/10.1159/000492216 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30428463/
30. Munshaw, S., Bruche, S., Redpath, A. N., Jones, A., Patel, J., Dubé, K. N., Lee, R., Hester, S. S., Davies, R., Neal, G., Handa, A., Sattler, M., Fischer, R., Channon, K. M., & Smart, N. (2021). Timozinas β4 apsaugo nuo aortos aneurizmos per endocitinį augimo faktorių signalizacijos reguliavimą. Klinikinių tyrimų žurnalas, 131(10), e127884. https://doi.org/10.1172/JCI127884 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33784254/
31. Renga, G., Oikonomou, V., Moretti, S., Stincardini, C., Bellet, M. M., Pariano, M., Bartoli, A., Brancorsini, S., Mosci, P., Finocchi, A., Rossi, P., Costantini, C., Garaci, E., Goldstein, A. L., & Romani, L. (2019). Timozinas β4 skatina autofagiją ir atsistatymą per HIF-1α stabilizavimą lėtine granulomatozine liga sergantiems pacientams. Life Science Alliance, 2(6), e201900432. https://doi.org/10.26508/lsa.201900432 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31719116/
32. Munshaw, S., Redpath, A. N., Pike, B. T. ir Smart, N. (2023). Timozinas β4 išsaugo kraujagyslių lygiųjų lihmenų fenotipą esant aterosklerozei, reguliuodamas su mažo tankio lipoproteinais susijusį 1 baltymą (LRP1). Tarptautinė imunofarmakologija, 115, 109702. https://doi.org/10.1016/j.intimp.2023.109702 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37724952/
33. Bongiovanni, D., Ziegler, T., D’Almeida, S., Zhang, T., Ng, J. K. M., Dietzel, S., Hinkel, R., ir Kupatt, C. (2015). Timozinas β4 silpnina mikrocirkuliacinį ir hemodinaminį destabilizavimą sepsio metu. Ekspertų nuomonė apie biologinę terapiją, 15(Suppl 1), S203–S210. https://doi.org/10.1517/14712598.2015.1006193 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25604254/
34. Tian, Z., Yao, N., Wang, F. ir Ruan, L. (2022). Timoazinas β4 slopina LPS sukeltą pelių plaučių fibrozę, sumažindamas oksidacinį pažeidimą ir palengvindamas uždegimą. Uždegimas, 45(1), 59–73. https://doi.org/10.1007/s10753-021-01528-6 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34414534/
35. Philp, D., Scheremeta, B., Sibliss, K., Zhou, M., Fine, E. L., Nguyen, M., Wahl, L., Hoffman, M. P. ir Kleinman, H. K. (2006). Timozinas beta4 skatina matrikso metaloproteinazių raišką žaizdų gijimo metu. „Journal of Cellular Physiology“, 208(1), 195–200. https://doi.org/10.1002/jcp.20650 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16607611/