Пептид GHK-Cu: молекулярна структура, механизми на действие и приложения в научните изследвания

GHK-Cu е естествено срещащ се комплекс от трипептид с мед, който предизвиква интерес у учените поради участието си в клетъчната комуникация, регулацията на външната мембрана и биологичните процеси, свързани с поддържането и възстановяването на тъканите. От момента на неговото идентифициране през 1973 г. от Лорена Пикарто изследователите анализират молекулярната му структура, способността му да свързва мед, влиянието му върху експресията на гени и взаимодействията с клетъчните пътища, участващи в възпалителни процеси, оксидативен стрес и регенерацията на тъканите.

Този съединител за първи път беше идентифициран при изследвания върху компонентите на човешката серумна плазма и тяхното влияние върху синтезата на протеини в клетките. Пикар установи, че факторът, получен от серумната плазма, може да повлияе върху поведението на старещите чернодробни клетки, като стимулира моделите на протеинов синтез, характерни за по-младите клетки [1]. По-късни изследвания позволиха идентифицирането на трипептида глицело-L-хистидоло-L-лизин (GHK) и анализът на способността му да образува стабилен комплекс с двувалентни медни йони (Cu²⁺).

GHK се състои от три аминокиселина: глицин, хистидин и лизин. След свързването с меден йон (II) образува комплекс, който обикновено се нарича GHK-Cu или меден пептид GHK.

Този пептид е открит в биологичните течности на човека, включително в кръвта, слюнката и урината. Според публикуваните данни неговото ниво в кръвта намалява с възрастта — от около 200 ng/ml при 20-годишни възраст до около 80 ng/ml при 60-годишни [2–9]. Тези наблюдения са допринесли за развитието на изследванията върху връзката между GHK, клетъчните изменения, свързани със стареенето, и регулацията на тъканните процеси.

В експериментални проучвания е показано, че GHK-Cu може да повлиява върху синтеза на колаген, реконструкцията на външната мембрана, ангиогенната сигнализация и активността на антиоксидантните ензими. В култивирани фибробласти и животински модели е анализиран и неговият ефект върху възпалителните медиатори, миграцията на клетките и моделите на експресия на гени, свързани с реконструкцията на тъканите.

Някои анализи свързаха GHK с промени в над 4000 гена, което предполага, че неговата биологична активност може да включва множество взаимосвързани клетъчни пътеки [9].

Промените в експресията на гените обаче не означават автоматично подобрение на функционирането на тъканите или ползи за клиничните резултати. Много от наблюденията идват от клетъчни култури, компютърни анализи или опити върху животни.

GHK-Cu остава следователно важен обект на молекулярни и предклинични изследвания, особено в контекста на координирането на медта, биохимията на външната мембрана, оксидативния стрес и отговора на клетките при увреждане.

Какво представлява GHK-Cu?

GHK-Cu е координационен комплекс, който се образува, когато трипептидът глицило-L-хистидоло-L-лизин свързва меден йон(II). Способността за координация на медия представлява една от молекулярните характеристики, които го отличават от много други кратки пептиди [1, 2].

Медта е незаменим микроелемент, участващ в множество биологични процеси. Тя подпомага активността на ензимите, митохондриалното производство на енергия, антиоксидантната защита и образуването и поддържането на съединителните тъкани.

В същото време икономиката на медта трябва да бъде строго регулирана, тъй като необезопасената или неправилно контролирана мед може да участва в реакции, които водят до образуването на реактивни форми на кислород.

GHK създава молекулярна среда, която позволява свързването на медта и повлиява нейните химични свойства. Благодарение на тази връзка GHK-Cu се превърна в полезен изследователски модел за анализ на участието на малки пептиди в координацията на металите и клетъчната сигнализация.

Ранните изследвания бяха фокусирани върху неговото влияние върху фибробластите, които са клетките, отговорни за производството и поддържането на множество съставки на хрущялната тъкан.

Фибробластите синтезират колаген, компоненти, свързани с еластина, гликозаминогликани и други частици на външната мембрана на клетките. Тези вещества отговарят за механичните свойства, организацията и структурната стабилност на тъканите.

Изследванията, проведени от Борел, Макуар и колеги, показват, че GHK-Cu може да повлиява на метаболизма на маточната мембрана при култивиране на фибробласти дори при концентрации от около 1–10 наномолекули на литър (nM) [10–13].

Наблюдаваните ефекти включваха промени в производството и разграждането на колагена, на сулфатирани гликозаминогликани и на малки протеогликани като декоррина.

Важно е да се отбележи, че поддържането на външната мембрана изисква нещо повече от увеличаване на производството на структурни протеини.

Правилното възстановяване на тъканите се основава на координираното синтезиране, модификацията и разграждането на компонентите на матрицата.

Металлопротеазната ензимна система (MMP) участва в деградацията на външната мембрана, докато тъканните инхибитори на металлопротеазната ензимна система (TIMP) спомагат за регулирането на тяхната активност.

В експериментални проучвания е отбелязано, че GHK-Cu влияе върху активността на MMP и експресията на инхибитори като TIMP-1 и TIMP-2 [11, 12].

Тези наблюдения предполагат връзка между експозицията на GHK-Cu и промените в съставките на матрицата. Те обаче не доказват, че този връзък последователно води до благоприятна регенерация на тъканите при хората.

В допълнителни предклинични проучвания GHK-Cu е анализиран в модели рани, включително в експерименти за свиване на рани, интеграция на трансплантати, възпалителна сигнализация и миграция на клетки [3–5].

Други изследвания касаеха реакциите на фибробластите при увреждания, причинени от радиация. В тях бяха отчетени промени в растежа и жизнеността на клетките, както и експресията на растежни фактори [14].

В експериментите също така се анализираха взаимодействията, включващи имунните клетки и плазмените клетки, които участват в реакцията на тъканите при увреждане [15].

Изследванията при животни показват промени в антиоксидантната активност и параметрите, свързани с раните след експозиция на GHK-Cu или материали, съдържащи родни пептиди [16–21].

Тези резултати увеличиха интереса към GHK-Cu като изследователски инструмент за анализ на стареенето на клетките, регулацията на външната мембрана и реакцията на тъканите при оксидативни и механични увреждания.

Не трябва обаче наблюденията относно затварянето на рани, поведението на фибробластите или молекулярната сигнализация в експериментални модели да се тълкуват като доказателство за терапевтичната ефективност при хора.

Механизъм на действие на GHK-Cu: резултати от изпитванията in vitro и in vivo

Биологичните механизми, свързани с GHK-Cu, включват няколко взаимосвързани пътеки, а не един единствен ясно определен молекулярен целеви обект.

В експерименталните изследвания се анализира неговият ефект върху експресията на гени, сигнализацията на растежни фактори, метаболизма на външната мембрана на клетката, реакцията на оксидативния стрес, възпалителните пътеки и взаимодействията на клетките с околните тъкани.

Тези механизми бяха изследвани чрез клетъчно култивиране, животински модели и компютърни анализи.

Изразяване на гени и реконструкция на белодробната тъкан

Един от важните области на изследванията е връзката между GHK и моделите на експресия на гени, свързани с хроничната обструктивна белодробна болест (ХОББ).

В многоцентрово проучване, включващо учени от Boston University, University of Groningen, University of British Columbia и University of Pennsylvania, бяха анализирани сигнатури на генната експресия, свързани с разрушаването на белодробната тъкан при прогресията на псориазиса [22].

Бил идентифициран набор от 127 гени, свързани с белодробна дисплазия, и беше изследвано дали GHK може да повлияе на неправилните транскрипционни модели.

Учените отбелязаха, че експозицията на GHK е свързана с промени в сигнализацията на трансформиращия растежен фактор β (TGF-β).

TGF-β е важен регулатор на разливането на клетките, производството на външна мембрана, трансформацията на тъканите и фибранцията.

Неговото действие зависи от биологичния контекст. Въпреки че TGF-β участва в правилното поддържане на тъканите, нарушената сигнализация също може да допринесе за патологичното натрупване на компоненти на матрицата и развитието на фиброза.

В лабораторни експерименти с помощта на белодробни фибробласти, взети от пациенти с ХОББ, експозицията към GHK се свързва с подобрение на способността за свиване и реорганизация на колагена.

Изследователите също така отбелязаха повишено експресиране на интеграна β1, което предполага възможно участие на клетъчни взаимодействия, зависими от интеграните [22, 23].

Интегрините са протеини, които помагат на клетките да взаимодействат с околната им външна мембрана. Те участват в адхезията и миграцията на клетките, предаването на механични сигнали и организацията на тъканите.

Тези наблюдения предполагат, че GHK може да повлиява на връзките между сигнализацията на TGF-β, експресията на интигрините и регулацията на външната мембрана.

Експериментите обаче не показват, че GHK-Cu обръща хода на ОХС или възстановява дихателната функция при пациентите.

Резултатите се отнасят до моделите на експресия на гени и поведението на клетките при експериментални условия.

Експозиция на гени, свързани с ракови заболявания, и пролиферация на клетките

GHK също така е анализиран в проучвания, свързани с генетичните мрежи, свързани с рака.

Hong и колеги изследваха моделите на експресия на гени, свързани с прогресията на колоректален рак и неговия потенциал за метастазиране [7, 24].

По-късно интерпретации на тези данни свързаха GHK с понижаване на експресията на около 70% избрани гени, свързани с метастазите.

В този контекст бяха обсъждани, наред с другите, гените MAP3K5, LMNA, APP и NFATC2.

Тези гени участват в различни биологични процеси, включително клетъчна сигнализация, организация на ядрото на клетката, регулация на клетките и транскрипционни реакции.

Промените в експресията на гените, свързани с метастазите обаче не трябва да се идентифицират с доказано предотвратяване на метастазите.

Сигналите за експресията на гените могат да помогнат за идентифицирането на пътеки, свързани с хода на заболяването, но тяхното модифициране не представлява самостоятелен клиничен доказателство за противораково действие.

В други лабораторни проучвания се анализира експозицията към GHK при човешки клетъчни линии на раковите заболявания.

В част от експериментите, включващи модели на невробластома и рак на гърдата, са регистрирани промени в апоптозата и пролиферацията на клетки при нискомолекулярни концентрации [25].

Апоптозата е регулирана форма на клетъчна смърт, която участва в развитието на тъканите и поддържането на клетъчната хомеостаза.

Разстройствата на апоптозата са важни в онкологията, тъй като злокачествените клетки могат да развият механизми, които да позволяват избягването на правилни сигнали, водещи до клетъчна смърт.

Въпреки това, наблюдението на апоптоза в култивирани ракови клетки не доказва селективен противораков ефект в организма на човека.

Костните линии се различават от реалните тумори по структура, метаболизъм, микросреда, взаимодействие с имунната система и условия на експозиция.

Ето защо тези резултати остават важни за изследванията върху механизмите на тумори, а не за потвърдените приложения в клиничната онкология.

Активността на фибробластите и реконструкцията на външната мембрана на клетката

Изследванията на фибробластите представляват друга важна част от научната литература относно GHK-Cu.

След експозиция на комплекси от меден трипептиди се наблюдава промяна в производството на колаген, деградация на матрицата и експресия на растежни фактори [9, 26].

Синтезата на колагенът е само един от елементите на регулацията на външната мембрана на клетката.

За да се запази правилната структура на тъканите, матрицата също трябва да подлежи на контролирана деградация и реорганизация.

GHK-Cu е свързано с промени в активността на металлопротеазната ензимна система и в експресията на TIMP-1 и TIMP-2.

Тези резултати предполагат, че свързването може да повлиява както на производството, така и на разграждането на компонентите на матрицата.

Посоката и значението на тези промени зависят от експерименталния модел и околните биологични условия.

В моделите, в които бяха изложени фибробласти, изследователите анализираха дали медицинските трипептиди влияят върху растежа на клетките и експресията на растежните фактори след експозиция на радиация [26].

В анализите на експресията на гените, разгледани в литературата, бяха отчетени и промени в пътищата, свързани с ремонта на ДНК. Те обхващаха 47 гена с повишена експресия и пет гена, чиято експресия намаля с поне 50% [9, 26].

Тези резултати показват промени в транскрипционния отговор на клетките.

Те обаче сами по себе си не доказват пълно възстановяване на ДНК, обръщане на процеса на стареене на клетките или възстановяване на правилното функциониране на тъканите.

Ангиогенна сигнализация и растежни фактори

GHK-Cu също беше проучен в контекста на ангиогенезата, процесът на образуване на нови кръвоносни съдове от вече съществуващи структури на кръвоносната система.

Ангиогенезата участва в развитието на тъканите, в отговора на уврежданията и в поддържането на мрежата от кръвоносни съдове.

В експериментални проучвания се анализираха връзките между материалите, съдържащи GHK, и фактори като VEGF (високомолекулен вегетативен растежен фактор) и bFGF (базовият растежен фактор на фибробластите) [27].

VEGF участва в сигнализацията на съединителните клетки и в развитието на кръвоносните съдове.

Базовият FGF участва в пролиферацията и диференциацията на клетките, както и в клетъчната реакция на тъканите, включително съдовите клетки и съединителната тъкан.

В някои проучвания е наблюдавано повишено изразяване или отделяне на тези фактори след експозиция на материали, свързани с GHK.

Като възможен елемент на тези ефекти бяха обсъдени и сигналите, зависими от интегривността.

Промените в експресията на VEGF или bFGF обаче не показват появата на функционални кръвоносни съдове.

Правилната ангиогенеза включва много етапи, включително миграцията на плазмоцитите, образуването на кръвоносни съдове, тяхната стабилизация и включването в съществуващата кръвоносна система.

Достъпните резултати следователно предоставят механистични доказателства, които са от значение за изследванията на съдовете, но не потвърждават клиничните ползи, свързани с функционирането на кръвоносните съдове.

Структурата и биохимията на GHK-Cu

Молекулярната структура на GHK-Cu беше изследвана с помощта на различни аналитични и спектроскопични техники.

Те включваха рентгенов кристалografски анализ, електронен магнитен резонанс (EPR), спектроскопия на абсорбцията на рентгеново лъчение, протонен магнитен резонанс и методи за химично измерване на енергията [28–30].

Тези методи помогнаха за характеризирането на координиращата среда на медиума в пептидния комплекс.

Координация на медията и молекулярна геометрия

GHK се състои от три аминокиселина, групирани в последователност глицин–хистидин–лизин.

Останалият хистидин е от особено значение, тъй като неговата идиолмолова група може да участва в координацията на металните йони.

Структурните изследвания показват, че мед(II) може да образува координационни връзки с три атома азот, изпълняващи функцията на донори на електрони в пептидната молекула.

Сред тях са азотният атом на аминогрупата глицин, депротонният азотен атом на амидното съединение, свързано с глицин-хистидинната връзка, и азотният атом на imidazolin-веригата на хистидина [28–30].

Четвъртата координационна позиция може да бъде заета от друга донорска група, в зависимост от химичното среда.

Този ред често се описва като геометричен или близък до квадратно-планарния.

Точната геометрия може да зависи от pH, условията на разтваряне, наличието на допълнителни лиганди и вида на изучавания комплекс.

Координацията на медиума влияе върху химичните свойства на GHK-Cu и отличава този комплекс от необвързания пептид GHK.

Структурната зависимост между пептида и медта е важна, тъй като свързването на металите може да променя реактивността на молекулата и взаимодействията ѝ с други биологични съединения.

Рисунок: молекулярная структура комплекса GHK-Cu

Молекулната структура на GHK-Cu показва как пептидът глицин–хистидин–лизин осигурява координационни места, съдържащи азот, които позволяват свързването на мед(II).

В структурни и спектроскопични изследвания е идентифициран азотът на аминогрупата, азотът на амидния контур на пептидното свързване и азотът на imidazolin-веригата на хистидин като важни елементи, участващи в свързването на медта.

Координационната среда помага да се обясни защо GHK се изучава като меден пептид и като модел на взаимодействията между металите и пептидите.

Взаимодействие с албумином и други частици, свързващи медта

При физиологичния pH GHK-Cu може да участва в различни координиращи равновесия с участието на допълнителни лиганди.

Лау и Сакар изучаваха взаимодействията между медта (II), GHK, частици, съдържащи хистидин, и суроватковата алфа-1 антигенна плазма [28–30].

Суроватковият албумин е протеин, който се среща в големи количества в кръвта. Участва в транспортирането и свързването на множество вещества, включително избрани метали като йони.

В литературата е описано високо свързване както на GHK, така и на албумини към медта. В изследваните условия са били измерени стойности около log₁₀ 16,44 за GHK и log₁₀ 16,2 за албумин.

Тези стойности показват, че GHK може да участва в конкурентни взаимодействия, свързани с свързването на медиума.

Въпреки това, разпределението на медта в биологичните течности зависи от нещо повече от силата на свързване между двете изолирани молекули.

На наличността на мед влияят също така концентрациите на отделните вещества, конкуриращите се лигандни вещества, белтъчните взаимодействия и клетъчните транспортни системи.

Способността на GHK да свързва медта представлява основата на изследванията върху преноса на метал и координационните равновесия.

Това обаче не доказва, че GHK-Cu доставя безопасно мед до всички тъкани или че предотвратява всички оксидативни реакции, свързани с медта.

Медни ензими и регулация на редокс процесите

Медта е необходима за действието на много важни ензими.

Лизиевата оксидаза участва в образуването на междинни връзки между протеините колаген и еластин.

Потенциалната дисулфатаза на мед и цинк, често наричана SOD1, подпомага антиоксидантната защита чрез катализиране на превръщането на потенциално токсичните радикали в по-малко реактивни продукти.

Цитохромът c-оксидаза участва в митохондриалния транспорт на електрони и в производството на клетъчна енергия.

Тъй като GHK свързва медта, учените анализираха дали GHK-Cu може да повлияе на наличността на този метал и свързаните с него биохимични процеси.

Присъствието на меден свързващ пептид обаче не означава, че металът се пренася директно във всеки меден зависим ензим.

Клетките имат специализирани транспортни системи, свързващи протеини и системи за регулиране на вътреклетъчното разпределение на медиума.

Тези механизми са важни, тъй като свободната или неправилно регулирана мед може да участва в реакциите на окисляване.

При определени условия редукционно-оксидарните реакции, свързани с медта, могат да допринесат за образуването на реактивни химични форми.

Затова GHK-Cu беше проучен с оглед на неговото потенциално влияние върху реактивността на медията и оксидационните процеси [31, 32].

Тази зависимост е химически сложна. Връзването на медиента може да променя реактивността на металът, но биологичните последици зависят от цялата химична среда.

Свързването на алдехидите и антиоксидантната химия

GHK също така беше проучен по отношение на способността му да реагира с избрани алдехиди, които се образуват при перксидирането на липидите.

Пероксидирането на липидите включва окислителни реакции, които влияят върху липидите на клетъчните мембрани и други структури, съдържащи липиди.

В резултат на тези реакции могат да се образуват реактивни алдехиди, като 4-хидроксиноненал и акролеин.

И двата съединения са обект на изследвания, тъй като могат да взаимодействат с протеини и други клетъчни молекули.

В химични изследвания е показано, че GHK може да образува продукти на реакции с тези алдехиди, което предполага потенциалната способност на тези вещества да се свързват при експериментални условия [31, 32].

Тези резултати предоставят информация за химичната активност на GHK.

Въпреки това, способността за реакция с алдехидите в лабораторната система не доказва, че пептидът предотвратява оксидативните увреждания на тъканите при хората.

Концентрациите на реагентите, наличието на конкуриращи се биологични молекули и скоростта на реакцията са от значение при оценката на потенциалните биологични последствия.

Адицесията на клетките и взаимодействията с външната клетъчна обвивка

GHK-Cu също беше изследван във връзка с прикрепването на клетките и тяхната взаимодействие с вътреклетъчните материали.

Костната адхезия е необходима за правилното организиране на тъканите, тъй като клетките трябва да разпознават заобикалящата ги среда и да реагират с нея.

В изследвания, включващи остеобластни клетки и модели на адхезията на хепатоцитите, се анализира влиянието на материалите, свързани с GHK, върху разпространението на клетките, тяхната адхезия и фенотипа [33, 34].

Тези изследвания са от значение за развитието на биоматериалите, в които пептидите могат да бъдат вграждани в инженерни повърхности или да бъдат свързвани с тях.

Наблюдаваните резултати зависят от вида на пептида, състава на материала, типа клетки и условията на експеримента.

Те предоставят информация за взаимодействията между пептидите и повърхностите, както и между клетките и матрицата, а не директни доказателства за регенерация на тъкани при хора.

Приложенията на GHK-Cu в научните изследвания

GHK-Cu е изследван в много области на молекулярните и предклиничните изследвания.

Те включват биологията на оксидативния стрес, възпалителната сигнализация, фиброзата, увреждането на белите дробове, невроналните реакции, регулацията на кръвоносните съдове, реконституирането на външната мембрана на клетката и анализа на експресията на гените.

Следващите раздели представят най-важните резултати от експеримента и ограниченията им.

Изследвания на антиоксидантния ефект и редокс процесите

Ензимите с антиоксидантни свойства, зависими от медта, представляват важен компонент на клетъчната защита срещу оксидативен стрес.

Един от примерите е SOD1, който за правилното си функциониране се нуждае от мед и цинк.

Проучванията относно недостига на мед показват, че нейното недостатъчно наличие може да повлияе на активността на SOD1 и да повишава стойностите на параметрите, свързани със стресовия оксидативен стрес [35–38].

Тези резултати потвърждават биологическата значимост на правилното регулиране на медната икономика.

Въпреки това, изследванията върху недостига на мед или върху възстановяването на неговото предлагане в хранителния режим не могат автоматично да бъдат считани за доказателства за идентично действие на GHK-Cu.

Разграничението е важно, тъй като биологичното поведение на конкретен комплекс от мед зависи от неговата молекулярна структура, дистрибуция и взаимодействие с пътеките, регулиращи функционирането на този метал.

В експериментални проучвания, включващи биоматериали, съдържащи GHK и комплекси от медни трипептиди, се анализираха антиоксидантните реакции и параметрите, свързани с тъканите.

Част от изследванията се занимаваха с това дали GHK-Cu влияе върху пероксидирането на липидите, свързано с феритиновата киселина.

Феритинът е протеин, участващ в клетъчното складиране на желязото.

Желязото може да участва в окислителни реакции, когато се намира в реактивни форми.

Проучванията показват, че медът, комбиниран с GHK, може да повлияе на феротиновите свързани с пероксидацията на липидите при определени експериментални условия [39, 40].

Тези наблюдения предоставят информация за взаимодействията между комплексите от мед, процесите, свързани с желязото, и химията на окислителните реакции.

Допълнителни химични изследвания анализираха реакциите на GHK с продуктите на пероксидирането на липидите, като например 4-хидроксиноненал и акролеин [41, 42].

Резултатите обосновават по-нататъшни изследвания върху GHK като молекула, способна да участва в химични реакции с алдехиди.

Въпреки това, антиоксидантната активност, показана в химичен тест или клетъчен модел, не доказва клинична защита срещу оксидативни увреждания.

Индикаторна сигнализация и регулация на цитокините

Възпалителният процес включва координирани взаимодействия между имунните клетки, сигналните протеини и тъканните реакции.

В няколко лабораторни проучвания се анализира ефектът на GHK-Cu върху възпалителните пътеки.

В клетъчни проучвания, използващи макрофагните клетки RAW 264.7 и кожните клетки Caco-2 от коремната лигавица, са регистрирани промени в оксидативните и възпалителните параметри след експозиция на GHK-Cu.

Те включваха намаляване на производството на реактивни форми на кислорода, повишаване на стойностите на антиоксидантните параметри, свързани с глутатион, и промени в възпалителните медиатори като TNF-α и IL-6 [43–47].

Изследователите също така анализираха сигнализиращите пътеки, включващи ядрения фактор kappa B (NF-κB) и протеинната активаторна киназа p38 (p38 MAPK).

NF-κB участва в регулацията на гените, свързани с възпалението, имунитета, оцеляването на клетките и стресовата реакция.

Стремият p38 MAPK участва в клетъчните реакции, свързани с възпалителните медиатори и екологичния стрес.

В експериментални проучвания GHK-Cu е свързан с промени в сигнализацията на NF-κB p65 и p38 MAPK.

Тези резултати показват, че съединението може да повлиява на пътеките, участващи в възпалителния отговор в лабораторни условия.

Въпреки това, не всички изследвания, цитирани в по-широката дискусия, оценяват директно GHK-Cu. Част от публикациите представят общи данни за възпалителните пътища или други експериментални връзки.

Поради това самото съществуване на изследвания върху NF-κB или p38 MAPK не доказва, че GHK-Cu причинява определен противовъзпалителен клиничен ефект.

Тези резултати са най-полезни за изучаване на възможните молекулярни взаимодействия и за идентифициране на въпроси, които изискват допълнителни експерименти.

Модели на увреждане на тъканите, белодробни увреждания и невропротекция

Вложките представляват неправилното събиране или организация на компонентите на външната мембрана в тъканите.

Може да се развива в отговор на продължаващия увреждане, възпаление или променена клетъчна сигнализация.

GHK е изследван в експериментални модели на фиброзни възпаления на белите дробове поради описания му ефект върху активността на фибробластите и пътеките, свързани с TGF-β.

В мишки с модел на белодробно фиброза, причинен от беламицин, учените отбелязаха промени в дебелината на тъканите, на налягането от възпалителни клетки и пътищата, свързани с межкомпонентния преход [48].

В проучването се анализираше сигнализацията на TGF-β1/Smad, която участва в клетъчните реакции, свързани с производството на матрикс и фибранното уплътняване.

Тези наблюдения предполагат, че GHK може да повлиява върху избраните пътеки, свързани с фиброзата при експерименти върху животни.

Въпреки това, резултатите, получени при химично индуциран модел на болестта при мишки, не доказват ефективността на лечението на белодробното фиброзно увреждане при хора.

Биологичните механизми, хода на заболяването и клиничните обстоятелства могат да се различават значително.

В невробиологичните изследвания, свързани с GHK, също така се анализира оксидативният стрес, възпалителната сигнализация и възможните взаимодействия със сигнализиращите пътища на гените.

Някои изследвания свързват тези механизми с deacetylaza histonową 2 (HDAC2), ензим, участващ в регулацията на хроматина и експресията на гените.

Въпреки това цитираната литература относно когнитивните промени при остаряващите мишки и механизмите, свързани с HDAC, включва и изследвания, които не потвърждават директно действието, специфично за GHK-Cu [49].

Ето защо твърденията за подобряване на познавателните функции, намаляване на възпалението или директно регулиране на HDAC2 от GHK-Cu се нуждаят от ясно отделяне от резултатите от изследванията върху други експериментални интервенции.

Наличните доказателства обосновават интерес към механистичните изследвания, но не потвърждават установеното невропротективно действие при хора.

Проучвания в областта на ангиогенезата и биологията на кръвоносните съдове

Ангиогенезата е необходим процес при развитието и възстановяването на тъканите.

Това включва образуването на нови кръвоносни съдове и изисква координирани взаимодействия между плацентарните клетки, растежните фактори, компонентите на външната мембрана и околните тъкани.

GHK-Cu е изследван в експериментални системи, свързани със съдовата сигнализация и регенерацията на тъканите.

В някои проучвания са регистрирани промени в факторите, свързани с ангиогенезата, включително VEGF и bFGF [50, 51].

Тези белтъци участват в активността на плазмоцитите, в развитието на кръвоносните съдове и в клетъчната реакция при увреждане.

Учените също така анализираха връзките между връзките, свързани с GHK, и структурните белтъци като колаген и еластин.

Колагенът отговаря за здравината на тъканите, докато еластинът подпомага способността им да се разтягат и да се връщат към първоначалния си вид.

И двата белтъка са от значение за структурата на кръвоносните съдове и организацията на външната мембрана на клетката.

Промените в експресията на растежните фактори или синтеза на майчините протеини обаче не трябва да означават подобряване на кръвообращението.

Функционалната регенерация на кръвоносните съдове включва допълнителни процеси, включително образуването на кръвоносни съдове, тяхното зреене, интеграция и физиологично регулиране.

В някои по-общи разработки относно регенерацията на кръвоносните съдове се споменава и за антитромботичното действие и разширяването на кръвоносните съдове.

Тези процеси са отделни физиологични процеси и не трябва да се предполага, че произтичат пряко от експозицията на GHK-Cu без подходящи доказателства относно този конкретен съединение.

Тези резултати остават съществени и за експерименталните изследвания върху ангиогенезата и биологията на кръвоносните съдове.

Доказателства от невронални и невротрофични модели

Развитието и възстановяването на невроните включват участието на растежни фактори, взаимодействията с външната мембрана на клетката, миграцията на клетките и удължаването на невроните.

Повишаването на неуртите е един от параметрите на експеримента, използван за изследване на диференциацията и развитието на невроните.

В ранни проучвания с използване на невроенервни тъкани беше анализиран ефектът на пептиди и кондиционирани хранителни вещества върху диференциацията на невроните [52, 53].

Тези изследвания допринесоха за по-широкото внимание към кратките пептиди като потенциални регулатори на клетъчното поведение.

Материалите, свързани с GHK, бяха анализирани и в експериментални системи за регенерация на нервите.

В едно от изследванията е въведен пептид, който подпомага адхезията на клетките към колагеновите проводници, използвани за свързване на прекъснати участъци на нервите [54].

Учените отчетоха промени в факторите за растеж и медиаторите на възпалението, включително невротрофина NGF и невротрофините NT-3 и NT-4.

Допълнителните наблюдения включваха параметрите на аксоните и реакциите на клетките на Шван.

Schwanna клетките са важен компонент на вегетативната нервна система. Те подпомагат аксоните и участват в реакцията при увреждане на вегетативните нерви.

Въпреки това, резултатите, получени с използване на колагенови проводници, съдържащи пептиди, не трябва автоматично да се приписват свободнотото движение на GHK-Cu.

На наблюдаваните резултати могат да повлияят биоматериалът, местната среда, начинът на представяне на пептида и използвания експериментален модел.

По същия начин увеличаването на експресията на факторите за растеж или броя на аксоните в експерименталната система не доказва функционална неврологична регенерация при хора.

Тези изследвания са най-добре интерпретирани като анализи на биоматериали, съдържащи пептиди и невротрофна сигнализация.

Регулирането на гените и реконструкцията на майчината клетка

Изследванията на генната експресия се превърнаха в важен елемент в научната дискусия относно GHK и GHK-Cu.

Ранните експерименти бяха фокусирани върху клетъчните реакции, свързани с раните, включително поведението на фибробластите, производството на колаген и организацията на външната мембрана [55, 56].

По-късни изследвания на Макурт и колеги анализират влиянието на GHK-Cu върху синтеза на колаген и частици, свързани с матрицата [57–59].

В експерименти, използващи култивирани фибробласти, са регистрирани промени в производството на колаген при ниски концентрации.

В други проучвания са анализирани наситените с сулфати гликозаминогликани и малките протеогликани.

Тези частици участват в организацията на външната мембрана, поддържането на хидратацията, формирането на механични свойства и взаимодействията между клетките и околните тъкани.

GHK-Cu е свързано и с промени в експресията на металлопротеазната ензимна система на майката, включително MMP-2 [59].

Това е важно, защото поддържането на вътреклетъчна мембрана изисква както контролирана деградация, така и синтез.

Само увеличаването на производството на колаген не доказва подобрение в организацията на тъканите.

По същия начин, повишената активност на MMP може да доведе до различни последици в зависимост от вида на тъканта и биологичния контекст.

Изследванията предполагат, че GHK-Cu може да повлиява на метаболизма на майката чрез няколко взаимодействащи пътя.

Тези наблюдения обаче не показват възстановяване без поява на белези и предсказуема регенерация на тъканите при хората.

В допълнителни експерименти са отчетени промени при такива молекули като декорбина, синахарант на дермататин и синахарант на хондроитин [60].

Декордина е малък протеогликан, свързан с организирането на колагена и регулацията на външната мембрана на клетката.

Дерматонов сулфат и хондроитин сулфат са гликозаминогликани, които влияят върху структурата и свойствата на ставните тъкани.

Промените в тяхната експресия или синтеза предоставят информация за метаболизма на майката.

Те обаче не доказват самостоятелно подобрението на здравината на тъканите, тяхното външно изражение или клиничните резултати на зарастването.

Изразяване на имунитета и изследване на кожните клетки

Кератиноцитите са преобладаващият тип кожни клетки.

Те участват в образуването на кожна бариера, клетъчното делене и реакцията срещу уврежданията на тъканите.

Учени от Националния университет в Сеул изследваха влиянието на медния пептид GHK върху експресията на интерфероните и наличието на клетки, които показват положителна експресия на p63 в кератиноцитите [61].

Интегрините участват в прикрепването на клетките и в комуникацията с външната клетъчна мембрана.

Белтъкът p63 е свързан с развитието на епитела и поддържането на определени популации на епителни клетки.

В проучването е наблюдавано повишено експресиране на интегрините и по-голям процент положителни клетки по отношение на p63 след експозиция на медния пептид GHK.

Тези наблюдения предполагат възможен ефект върху клетъчните характеристики, свързани с поддържането на епидермиса.

Въпреки това, промените в тези маркери сами по себе си не показват повишена регенерация на кожата при хората.

Резултатите остават ограничени до използваните клетъчни модели и анализираните параметри.

Мащабно профилиране на гените

Компютърните методи увеличиха възможностите за анализ на влиянието на различни връзки върху мрежите на генната експресия.

Картата за свързаност, често наричана cMap, е изследователски ресурс, използван за сравняване на моделите на генната експресия, свързани със състоянията на организма и експозицията към химични вещества.

Свързаните с компютърни подходи, включително MANTRA, бяха използвани за изследване на връзката между връзките и транскрипционните отговори [62, 63].

GHK беше обсъждан в този контекст поради връзките му с широкообхватни промени в моделите на експресия на гените.

В един от анализите бяха отчетени 268 гена с повишена експресия и 167 гена с намалена експресия.

В други разработки GHK е свързана с промени, обхващащи по-голям брой гени и пътеки [9, 62–64].

Тези резултати показват, че реакциите, свързани с GHK, могат да включват множество биологични системи, а не само един конкретен молекулен обект.

Въпреки това, данните за експресията на гени изискват внимателна интерпретация.

Промяната в количеството информационен РНК (АРНС) не трябва да води до съответстваща му промяна в концентрацията на протеин или биологичната функция.

Формите на експресия на гените зависят също от типа на клетките, условията на експозиция, измервателните методи и аналитичните граници.

Затова числата на гените, свързани с дадения съединение, не трябва да се считат за пряк показател за неговата терапевтична сила.

Компютърните прогнози са полезни при формулирането на хипотези, но изискват потвърждение чрез експериментално изследване.

Генетични мрежи, свързани с невропротекцията

Анализите на експресията на гени, обсъждани в литературата за GHK, идентифицираха промени, включващи гени, свързани с функционирането на невроните, оцеляването на клетките и регулацията на развитието.

Примерите включват SIGMAR1, EPM2A, NAIP, FGFR2 и SLIT2 [65].

Тези гени участват в различни биологични процеси.

SIGMAR1 кодира рецептора sigma-1, белтък, участващ в клетъчната сигнализация и процеси, свързани със стреса.

EPM2A е свързан с лафорина, белтък, отговорен за метаболизма на гликогена.

NAIP участва в пътеките, свързани с оцеляването на клетките и имунната реакция.

FGFR2 кодира рецептор, участващ в сигнализацията на растежния фактор на фибробластите.

SLIT2 участва в процесите на развитие, свързани с насочването и миграцията на клетките.

Участието на тези гени в невробиологията на нервната система предизвика интерес към тяхната възможна връзка с транскрипционните реакции, предизвиквани от GHK.

Въпреки това, наличието на гена в колекцията от данни, свързана с GHK, не доказва, че GHK контролира директно този ген във всяка биологична среда.

Той също така не доказва, че GHK предотвратява деменцията или води до подобряване на неврологичните функции.

Цитираните изследвания относно част от тези гени предоставят по-широк биологичен контекст, а не директни доказателства за действието на GHK-Cu.

Затова тези резултати трябва да се разбират като наблюдения, които служат за формулиране на хипотези относно регулацията на гените и невробиологията.

Резултатите от епигенетичните изследвания и пътеките, свързани с HDAC

Епигенетичното регулиране включва промени в активността на гените, които не изискват модификация на основната ДНК последователност.

Един от важните механизми е модификацията на хистоните.

Хистоните са белтъци, около които е организирано ДНК. Химичните им модификации могат да повлияят на достъпността на определени области на ДНК за транскрипционния механизъм.

Хистоновите деацетилази (HDAC) премахват ацетилните групи от хистоните и други белтъчни субстрати.

Их активност може да повлияе на структурата на хроматина и експресията на гените.

GHK беше обсъждан в контекста на пътеките, свързани с HDAC поради по-обширните наблюдения относно регулацията на гените и транскрипционните промени, свързани с възрастта [66, 67].

Въпреки това, цитираните изследвания върху HDAC и епигенетичното стареене предоставят преди всичко общи сведения за тези биологични процеси.

Те сами по себе си не доказват, че GHK-Cu е клинично потвърден инхибитор на HDAC.

По същия начин промените в структурата на гените не трябва автоматично да се описват като обратен епигенетичен процес на стареене.

Независимото твърдение за инхибиране на HDAC изисква експерименти, които да показват влиянието върху активността на тези ензими при определени условия.

Твърденията за обръщането на процеса на стареене изискват допълнителни доказателства, които да свържат молекулярните измервания с важни биологични резултати.

Отнасяемостта между GHK, регулацията на хроматина и експресията на гени, свързани със стареенето, остава следователно област за по-нататъшни механистични изследвания.

Качеството и изпитването на материалите GHK-Cu, предназначени за научни изследвания

Аналитичните характеристики на GHK-Cu са важни, тъй като резултатите от изследванията зависят от идентичността, състава и качеството на анализирания материал.

Препаратът, обозначен като GHK-Cu, трябва да бъде оценен чрез методи, позволяващи характеризирането на пептидния компонент и предоставянето на доказателства относно неговата форма, свързана с медта.

Проучването на качеството може да включва хроматография, масова спектроскопия, анализ на съдържанието на метали и допълнителни техники, избрани в зависимост от конкретната цел на анализа.

Нито един стандартен тест не потвърждава всички важни качествени параметри.

Хроматография с течност в комбинация със спектрометрия на масата

Хроматографията с течност в комбинация със спектрометрия на масите (LC-MS) съчетава хроматографския процес с детекция, базирана на измерването на масата на йонните частици.

Хроматографската част позволява отделянето на съединенията, които присъстват в пробата.

Масомерът предоставя информация за йони въз основа на съотношението между масата и заряда им.

LC-MS може да подпомогне идентифицирането на пептида чрез откриване на молекулярни йони, които съответстват на очакванията за свързване.

В зависимост от използваната методология, допълнителната информация за фрагментацията може да помогне за характеризирането на пептидната последователност.

Въпреки това, наблюдението на молекулярната маса, съответстваща на GHK, не потвърждава самостоятелно всички аспекти на структурата на молекулата.

По същия начин откриването на сигнали, отговарящи на наличието на медиен свързан вид, не е задължително да доказва пълната координационна геометрия или да изключва всички алтернативни комплекси.

Характеристиката на свързването на медита може да изисква допълнителни изследвания с помощта на подходящи спектроскопични методи или анализ на съдържанието на метал.

LC-MS е следователно ценно аналитично средство, но достоверността на получените заключения зависи от метода, референтните модели, подготовката на пробата и допълнителните доказателства.

Високопроизводителна течна хроматография и чистота

Високопроизводителната течна хроматография (HPLC) се използва широко за отделяне на съставните части на пептидните препарати.

Може да помага при идентифицирането на замърсявания, свързани със синтеза, деградацията или други производствени процеси.

Резултатът от хроматографската чистота обикновено се основава на относителните сигнали, регистрирани при определени аналитични условия.

Въпреки това, хроматографската чистота не е същата като химичната идентичност, съдържанието на пептид, стехиометрията на медния комплекс или общото качество на материала.

Например, декларираната чистота от 98% не означава непременно, че 98% от общата маса на пробата представлява правилно образувания комплекс GHK-Cu.

Това, което се тълкува, зависи от използваната аналитична методология и начина на изчисляване на резултата.

Хроматограмата също не потвърждава стерилността, съдържанието на ендотоксини или липсата на всички възможни замърсявания.

Източният материал описва декларираната спецификация на чистотата, която е най-малко 98% за определените изследователски препарати.

Такава спецификация трябва да се счита за декларация на доставчика, освен ако не е подкрепена с налична аналитична документация за конкретната партида.

Фильтрация, стерилност и контрол на замърсяването с твърди частици

Източният материал описва филтрирането чрез мембрани с размер на порите 0,22 микрона като елемент от процеса на подготовка на материала.

Мембранната филтрация може да се използва за ограничаване на определени микробиологични замърсители, ако използваната методология и условията са подходящи.

Въпреки това, пропускането на разтвора през филтър с размер на порциите 0,22 микрона не потвърждава самостоятелно стерилността на крайния продукт.

Осигуряването на стерилност зависи от целия процес, включително от оборудването, средата, целостта на филтъра, начина на работа с материала и валидираните процедури за контрол.

Филтрирането не трябва да премахва също ендотоксините, разтворените замърсители и всички видове замърсявания чрез твърди частици.

Ето защо твърденията относно стерилността или пригодността за определено научно приложение изискват подходящи тестове и документация, а не само основанието на размера на порите на филтъра.

Добро лабораторна практика и документация

Лабораторната добра практика (GLP) е система за качество, свързана с организацията, провеждането, мониторинга, документирането и отчитането на определени неклинични изследвания.

Потвърждението, че процедурите са в съответствие с принципите на GLP, не задължително означава формално съответствие с изискванията на GLP или притежаването на съответен сертификат.

Значението на такова заявление зависи от конкретните процедури, документацията и прилаганата система за качество.

На изследователските материали може да бъде приложен и сертификат за анализ (Certificate of Analysis, COA).

COA обикновено съдържа избрани резултати от анализите за конкретна партия.

Важна информация може да включва изследвания за идентичност, измервания на чистотата, обозначение на съдържанието на веществата, използвани аналитични методи, идентификатори на партидите и други параметри на спецификацията.

Въпреки това, информативната стойност на COA зависи от методите и данните, които служат за основа за неговото представяне.

Самият сертификат не доказва, че материалът е подходящ за приложение при хора, за козметична или терапевтична употреба.

По същия начин аналитичната чистота не потвърждава биологичната ефективност или клиничната безопасност.

В научните изследвания най-полезният качествен документационен материал трябва да бъде подробен, идентифицируем и достатъчно пълен, за да се даде възможност за правилна интерпретация на аналитичните резултати.

Повече информация за различаването на производителите, доставчиците, декларациите за качество и документацията на партидите можете да откриете в статията Производители и доставчици на пептиди.

Резюме

GHK-Cu е естествено срещащ се комплекс от трипептид с мед, изучаван вече повече от пет десетилетия.

Молекулната му структура, свойствата на свързването с медта и взаимодействията с клетъчните системи го превърнаха в важен обект за изследвания в областта на биохимията на пептидите, биохимията на външната мембрана, оксидативния стрес и регулацията на гените.

Комплексът се състои от гликоло-L-хистидоло-L-лизин и мед(II). Структурните изследвания позволиха идентифицирането на координационни места, съдържащи азот, които участват в свързването на медиума и влияят върху химичните свойства на молекулата.

Тези характеристики служат като основа за анализ на взаимодействията на кратките пептиди с металите и на влиянието на координационната химия върху биологичните процеси.

В експериментални проучвания са регистрирани промени в синтеза на колаген, производството на гликозаминогликани, експресията на матриксовите метаболитни протеолитични ензими, сигнализацията на ендотелни протеини, възпалителните медиатори и параметрите, свързани с антиоксидантната защита.

Допълнителните изследвания включваха реакции на GHK в култури на фибробласти, модели на рани, експерименти върху увреждане на белите дробове, неврони и биоматериали, съдържащи пептиди.

Компютърните анализи свързаха също GHK с широкообхватни промени в мрежата на генната експресия.

Значението на научната стойност на тези наблюдения обаче зависи от експерименталната среда.

Промените в експресията на гените не трябва да водят до промени в активността на протеините.

Повишеното производство на колаген не винаги означава подобрение на структурата на тъканите.

Промените в маркерите на възпалението не представляват самостоятелен клиничен доказателство за противовъзпалително действие.

По същия начин резултатите от изследвания, включващи клетъчни линии на раковите заболявания, модели на възпаление на белите дробове и клетъчни култури на невроните, не показват ефективност срещу съответните им заболявания при хора.

В литературата съществуват и значителни разлики между GHK и GHK-Cu, както и между експериментите, които пряко се отнасят до дадения съединение, и изследванията, които предоставят само общ биологичен контекст.

Тези разлики трябва да бъдат запазени при интерпретирането на механизмите на действие и предложените приложения.

Друг важен аспект е аналитичната точност. Техники като LC-MS и HPLC могат да предоставят ценна информация за идентичността и чистотата, но не могат сами по себе си да потвърдят всички структурни, микробиологични и биологични свойства на препарата.

Като цяло, GHK-Cu остава полезен инструмент за молекулярни изследвания на координирането на медта, клетъчната сигнализация, метаболизма на външната мембрана и отговорът на оксидативния стрес.

Техните известни химични свойства и обширната предклинична литература представляват основа за по-нататъшни научни изследвания. Въпреки това твърденията относно клиничната ефективност и безопасността изискват отделни, съответно контролирани проучвания при хора.

Забележка

Този статия има само образователен и научно-информационен характер. Представя изследвания относно молекулярната структура на GHK-Cu, координирането на медта, биологичните механизми, аналитичната характеристика и експерименталните приложения.

Не представлява медицински съвет, не препоръчва употребата на GHK-Cu при хора или животни, не определя схеми за лечение и не подкрепя никаква диагностична, терапевтична или козметична употреба.

Резултатите, получени от клетъчни култури, експерименти върху животни, компютърни анализи и биохимични изследвания, не трябва да се тълкуват като доказателство за клинична ефективност или безопасност при хора.

Информацията относно аналитичната чистота, материалите от научно-изследователски клас, сертификатите за анализ или лабораторните изследвания не доказва, че даден препарат е подходящ за употреба при хора или за какъвто и да е друг вид приложение, регулиран от законодателството.

Всички медицински решения трябва да бъдат вземани от подходящо квалифицирани здравни работници въз основа на подходящи клинични доказателства и приложимите законови разпоредби.

Препратки

1. Pickart L. A Tripeptide от човешки серум, който подобрява растежа на неопластичните хепатоцити и оцеляването на нормалните хепатоцити. Сан Франциско, Калифорния, САЩ: Калифорнийски университет; 1973 г.
2. Pickart L., Freedman J. H., Loker W. J., et al. Разширяващият растежа плазмен трипептид може да функционира чрез улесняване на усвояването на мед в клетките. Nature. 1980;288(5792):715–717. doi: 10.1038/288715a0.
3. Пикар Л. Използване на GHL-Cu като средство за заздравяване на рани и противовъзпалително средство. 1988 г., http://www.freepatentsonline.com/4760051.html.
4. Downey D., Larrabee W. F., Jr., Voci V., Pickart L. Акумулация на зарастването на рани чрез използване на глицил-хистидил-лизинов меден (II) хирургически форум. 1985;25:573–575.
5. Pickart L. Iamin: човешки растежен фактор с множество свойства за заздравяване на рани. В: Sorenson J., редактор. Биология на медните комплекси. Клифтън, Ню Джърси, САЩ: Humana Press; 1987. стр. 273–285.
6. Meiners S., Eickelberg O. Персонализирано откриване на нови лекарства: трипептидът GHK заема централно място при хроничната обструктивна белодробна болест. Genome Medicine. 2012;4(8, статия 70) doi: 10.1186/gm371.
7. Hong Y., Downey T., Eu K. W., Koh P. K., Cheah P. Y. ‘Метастазни склонни’ сигнатура при пациенти с спорадичен колоректален рак, които са успешни в корекция на несъответствията в ранен стадий, и нейните последици за възможни терапевтични мерки. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
8. Грухлик А., Юрзак М., Чодорек Е. В., Дзиржевчиц З. Ефектът на Gly-Gly-His, Gly-His-Lys и техните медни комплекси върху секрецията на IL-6, зависима от TNF-α, при нормални човешки дермални фибробласти. Acta Poloniae Pharmaceutica. 2012;69(6):1303–1306.
9. Pickart L., Vasquez-Soltero J. M., Margolina A. GHK и ДНК: възстановяване на човешкия геном до здравословно състояние. BioMed Research International. 2014;2014:10. doi: 10.1155/2014/151479.151479
10. Wegrowski Y., Maquart F. X., Borel J. P. Стимулация на синтеза на сулфатиран гликозаминогликан чрез трипептид-меден комплекс Glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+. Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
11. Симон А., Еморанд Х., Хорнебек В., Макварф Ф.-Х. Трипептидният-меденният комплекс глицил-Л-хистидин-Л-лизин-Cu2+ стимулира експресията на матриксовите металлопротеинази-2 при култивирани фибробласти. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
12. Ерлих Х. Стимулирането на заздравяването на кожата при имунокомпрометирани плъхове. Процедури на симпозиума за колаген и възстановяване на кожата; септември 1991 г.; Ренс, Франция.
13. Симон А., Вегровски Й., Бонтемс Й., Макарф Ф.-Х. Експозиция на гликозаминогликани и малки протеогликани в рани: модулация от трипептид-медния комплекс глицил-L-хистидил-L-лизин-Cu2+. Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
14. МакКормак М. К., Новак К. К., Кох Р. Дж. Ефектът на меден трипептид и третиноин върху производството на растежни фактори при серумен свободен фибробластен модел. Архив на пластичната хирургия на лицето. 2001;3(1):28–32.
15. Buffoni F., Pino R., Dal Pozzo A. Влиянието на трипептидните комплекси с мед върху процеса на зарастване на рани по кожата и върху култивирани фибробласти. Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie. 1995;330(3):345–360.
16. Gul N. Y., Topal A., Cangul I. T., Yanik K. Ефектите на локалния комплекс от трипептиди с мед и хелий-неонов лазер върху зарастването на рани при зайци. Veterinary Dermatology. 2008;19(1):7–14. doi: 10.1111/j.1365-3164.2007.00647.x.
17. Cangul I. T., Gul N. Y., Topal A., Yilmaz R. Оценка на ефектите на локалния комплекс от трипептид-мед и цинков оксид върху зарастването на открити рани при зайци. Veterinary Dermatology. 2006;17(6):417–423. doi: 10.1111/j.1365-3164.2006.00551.x.
18. Пикар Л. Метод на използване на съединения, съдържащи мед(II), за ускоряване на зарастването на рани. 1992 г., http://www.freepatentsonline.com/5164367.html.
19. Арул В., Карта Р., Джаякумар Р. Лечебен подход за лечение на диабетни рани с помощта на колагенови матрици с включена биотинирана GHK. Life Sciences. 2007;80(4):275–284. doi: 10.1016/j.lfs.2006.09.018.
20. Canapp S. O., Jr., Farese J. P., Schultz G. S., и др. Ефектът на локален трипептидов-меден комплекс върху зарастването на исхемични открити рани. Veterinary Surgery. 2003;32(6):515–523. doi: 10.1111/j.1532-950X.2003.00515.x.
21. Swaim S. F., Vaughn D. M., Kincaid S. A., и др. Ефектът на локално инжектираните лекарства върху зарастването на рани при кучета. American Journal of Veterinary Research. 1996;57(3):394–399.
22. Campbell J. D., McDonough J. E., Zeskind J. E., и др. Сигнал за генна експресия на разрушаването на белите дробове, свързано с емфизема, и неговото обръщане чрез трипептида GHK. Genome Medicine. 2012;4, статия 67, doi: 10.1186/gm367.
23. Boo S., Dagnino L. Интегрините като модулатори на сигнализацията на трансформиращия растежен фактор бета при дермални фибробласти по време на регенерация на кожата след нараняване. Advances in Wound Care. 2013;2(5):238–246. doi: 10.1089/wound.2012.0394.
24. Любик К., Радке М., Ютилина М. Секуринин, антагонист на рецептора GABAA, повишава елиминирането на фаза II C. burnetii от макрофагите: сравнение с агонисти на TLR. Journal of Leukocyte Biology. 2007;82(5):1062–1069. doi: 10.1189/jlb.0407255.
25. Matalka L. E., Ford A., Unlap M. T. Трипептидът GHK индуцира програмирана клетъчна смърт при невробластни клетки SH-SY5Y. Journal of Biotechnology & Biomaterials. 2012;2, статия 144 doi: 10.4172/2155-952X.1000144.
26. Pollard J. D., Quan S., Kang T., Koch R. J. Ефектите на меден трипептид върху растежа и експресията на растежни фактори при нормални и облъчени фибробласти. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
27. Хосе С., Хюбанкс М. Л., Биндър Б. Й. К., Инагвел Г. С., Лич Дж. К. Ускорена секреция на трофични фактори от мезенхимни стволови/страмови клетки с алгинови хидрогелове модифицирани с глицин, хистидин и лизин (GHK). Acta Biomaterialia. 2014;10(5):1955–1964. doi: 10.1016/j.actbio.2014.01.020.
28. Lau S. J., Sarkar B. Взаимодействието на мед(II) и глицил-L-хистидил-L-лизин, трипептид с растеж-модулиращи свойства от плазмата. Biochemical Journal. 1981;199(3):649–656. doi: 10.1042/bj1990649.
29. Перкинс К. М., Роуз Н. Дж., Уайнщайн Б., Стенкамп Р. Е., Дженсън Л. Х., Пикарт Л. Структурата на медния комплекс на растежния фактор глицил-L-хистидил-L-лизин с резолюция от 1,1 Å. Inorganica Chimica Acta. 1984;82(1):93–99. doi: 10.1016/s0020-1693(00)82544-x.
30. Freedman J. H., Pickart L., Weinstein B., Mims W. B., Peisach J. Структурата на глицил-L-хистидил-L-лизин-кобалт(II) комплекс в разтвор. Биохимия. 1982;21(19):4540–4544. doi: 10.1021/bi00262a004.
31. Pickart L., Lovejoy S. Биологична активност на човешкия плазмен растежен фактор, свързващ медта, glycyl-l-histidyl-l-lysine. Methods in Enzymology. 1987;147:314–328. doi: 10.1016/0076-6879(87)47121-8.
32. Beretta G., Arlandini E., Artali R., Anton J. M. G., Maffei Facino R. Акролеин-секретираща способност на ендогенния трипептид глицил-хистидин-лизин (GHK): характеризиране на конюгираните продукти чрез ESI-MSn и теоретични изчисления. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
33. Godet D., Marie P. J. Ефекти на трипептидния комплекс глицил-L-хистидин-L-лизин-мед върху разпространението, прикрепването и фенотипа на остеобластните клетки. Cellular and Molecular Biology (Noisy-le-Grand, Франция) 1995;41(8):1081–1091.
34. Кавасе М., Миура Н., Курикава Н. и др. Immobilizácia трипепразинового фактора роста на поли(винилалкохол)-кватерцинированном стилбазоле (PVA-SbQ) и его использование в качестве лиганда для прикрепления к клеткам печени. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 1999;22(9):999–1001. doi: 10.1248/bpb.22.999.
35. Lutsenko S, Bhattacharjee A, Hubbard AL. Машини за обработка на мед в мозъка. Metallomics. 2010;2(9):596–608. doi: 10.1039/c0mt00006j.
36. Hawk SN, Lanoue L, Keen CL, Kwik-Uribe CL, Rucker RB, Uriu-Adams JY. Детените на плъхове с дефицит на мед се характеризират с ниска активност на супероксид дисулфатаза и повишени аниони на супероксид. Biology of Reproduction. 2003;68(3):896–903. doi: 10.1095/biolreprod.102.009167.
37. Bayer TA, Schäfer S, Simons A, и др. Диетичният Cu стабилизира активността на мозъчната супероксид-дисумутаза 1 и намалява производството на амилоид Аβ при трансгенни мишки с протеин APP23. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2003;100(24):14187–14192. doi: 10.1073/pnas.2332818100.
38. Arul V, Gopinath D, Gomathi K, Jayakumar R. GHK пептид, включен в колагеновия матрикс: нов биоматериал за заздравяване на рани в дермата при плъхове. Journal of Biomedical Materials Research. 2005;73(2):383–391. doi: 10.1002/jbm.b.30246.
39. Miller DM, DeSilva D, Pickart L, Aust SD. Ефектите на глицил-хистидил-лизил, хелатиран Cu(II), върху липидната пероксидация, зависима от феритина. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1990;264:79–84. doi: 10.1007/978-1-4684-5730-8_11.
40. Alberghina M, Lupo G, La Spina G, et al. Цитопротектиращият ефект на медните комплекси срещу увреждането на стомашната лигавица при плъхове, причинено от етанол. Journal of Inorganic Biochemistry. 1992;45(4):245–259. doi: 10.1016/0162-0134(92)84013-d.
41. Beretta G, Artali R, Regazzoni L, Panigati M, Facino RM. Glycyl-histidyl-lysine (GHK) е инхибитор на α,β-4-hydroxy-trans-2-nonenal: сравнение с карнозин. Инфори по механизма на реакцията чрез масовата спектрометрия на електропробивна ионизация, 1H NMR и компютърни техники. Chemical Research in Toxicology. 2007;20(9):1309–1314. doi: 10.1021/tx700185s.
42. Beretta G, Arlandini E, Artali R, Anton JM, Maffei Facino R. Акролеин-секретираща способност на ендогенния трипептид глицил-хистидил-лизин (GHK): характеризиране на конюгираните продукти чрез ESI-MSn и теоретични изчисления. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
43. Park JR, Lee H, Kim SI, и др. Трипептидният комплекс GHK-Cu намалява острото белодробно увреждане, причинено от липополизахаридните протеини, при мишки. Oncotarget, 2016, 7(36): 58405.
44. Gao M, Chen L, Yu H, et al. Diosgenin понижава активността на NF-κB p65/p50 и p38MAPK пътеки и намалява острата белодробна травма, предизвикана от липополизахарид при мишки. International immunopharmacology, 2013, 15(2): 240–245.
45. Liu T, Zhang L, Joo D, et al. NF-κB сигнализацията при възпалението. Трансдукция на сигналите и целенасочена терапия, 2017, 2(1): 1–9.
46. Каминска Б. MAPK сигнализиращите пътеки като молекулярни цели за противовъзпалителна терапия – от молекулярните механизми до терапевтичните ползи. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Proteins and Proteomics, 2005, 1754(1–2): 253–262.
47. Yong HY, Koh MS, Moon A. Инхибиторите на MAPK p38 за лечение на възпалителни заболявания и рак. Обобщена оценка на изпитвания лекарства, 2009, 18(12): 1893–1905.
48. Zhou XM, Wang GL, Wang XB, et al. Пептидът GHK инхибира възникващата при bleomycin белодробна фиброза при мишки чрез потискане на епително-мезенхимни трансформация, медиирана от TGFβ1/Smad. Frontiers in Pharmacology, 2017, 8: 904.
49. Mukherjee K, Lee A, Zhu L, и др. Намалената от лишаване от сън когнитивна увреда при остарели мишки се облекчава от рапамицин. Aging Pathobiology and Therapeutics, 2019, 1(1): 05–09.
50. Kalaria RN. Васкуларна основа на мозъчната дегенерация: нарушени контролни механизми и рискови фактори за деменция. Nutrition Reviews. 2010;68(допълнение 2):S74–S87. doi: 10.1111/j.1753-4887.2010.00352.x.
51. Pollard JD, Quan S, Kang T, Koch RJ. Ефектите на меден трипептид върху растежа и експресията на растежни фактори при нормални и облъчени фибробласти. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
52. Sensenbrenner M, Jaros GG, Moonen G, Meyer BJ. Ефектът на условните медии върху диференциацията на нервните клетки. Experientia. 1980;36(6):660–662. doi: 10.1007/BF01970123.
53. Lindner G, Grosse G, Halle W, Henklein P. Ефектът на синтетичен трипептид върху нервната тъкан, култивирана in vitro. Zeitschrift für Mikroskopisch-Anatomische Forschung. 1979;93(5):820–828. (Ger).
54. Ahmed MR, Basha SH, Gopinath D, Muthusamy R, Jayakumar R. Първоначално повишаване на продукцията на растежни фактори и възпалителни медиатори по време на регенерация на нервите при наличие на колагенови тръби, инжектирани с адхезивни пептиди. Journal of the Peripheral Nervous System. 2005;10(1):17–30. doi: 10.1111/j.1085-9489.2005.10105.x.
55. Pickart L. Използване на GHL-Cu като средство за заздравяване на рани и противовъзпалително средство. Патент на Съединените щати № 4,760,051, юли 1988 г.
56. Downey D, Larrabee WF, Voci V, Pickart L. Ускоряване на зарастването на рани чрез използване на глицилхистидил-лизилов Cu(II) Surgical Forum. 1985;36:573–575.
57. Maquart FX, Pickart L, Laurent M, Gillery P, Monboisse JC, Borel JP. Стимулация на синтеза на колаген в култури на фибробласти чрез трипептид-медния комплекс glycl-L-хистидин-L-лизин-Cu2+. FEBS Letters. 1988;238(2):343–346. doi: 10.1016/0014-5793(88)80509-x.
58. Wegrowski Y, Maquart FX, Borel JP. Стимулация на синтеза на сулфатиран гликозаминогликан чрез трипептид-меден комплекс glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+. Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
59. Siméon A, Emonard H, Hornebeck W, Maquart FX. Трипептидният-меденният комплекс глицил-L-хистидил-L-лизин-Cu2+ стимулира експресията на матриксната металлопротеазна-2 при култивирани фибробласти. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
60. Симон А, Вегровски Й, Бонтемпс Й, Маквар Ф. Експозиция на гликозаминогликани и малки протеогликани в рани: модулация от трипептид-медния комплекс glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+. Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
61. Kang YA, Choi HR, Na JI, и др. Кобаламин-GHK повишава експресията на интеркитина и позитивността на p63 при кератиноцитите. Archives of Dermatological Research. 2009;301(4):301–306. doi: 10.1007/s00403-009-0942-x.
62. Lamb J. The Connectivity Map: нов инструмент за биомедицински изследвания. Nature Reviews Cancer. 2007;7(1):54–60. doi: 10.1038/nrc2044.
63. Iorio F, Bosotti R, Scacheri E, и др. Откриване на механизъм на действие на лекарството и препозициониране на лекарството въз основа на транскрипционни реакции. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2010;107(33):14621–14626. doi: 10.1073/pnas.1000138107.
64. Hong Y, Downey T, Eu KW, Koh PK, Cheah PY. ‘Предопределена за метастази’ характеристика при пациенти с спорадичен колоректален рак с висока степен на репарация на несъответствия в ранен стадий и нейните последици за възможни терапевтични мерки. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
65. Huang P, Kishida S, Cao D, et al. Факторът на невронната диференциация neuroD1 понижава експресията на невроотблъскващия фактор Slit2 и стимулира клетъчната подвижност и образуването на тумори при невробластома. Cancer Research. 2011;71(8):2938–2948. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-10-3524.
66. Fischer A, Sananbenesi F, Mungenast A, Tsai LH. Целевиране на правилните HDAC(и) за лечение на когнитивни нарушения. Trends in Pharmacological Sciences. 2010;31(12):605–617. doi: 10.1016/j.tips.2010.09.003.
67. Koch CM, Wagner W. Епигенетично-стареенето: метод за определяне на възрастта в различни тъкани. Aging. 2011;3(10):1018–1027. doi: 10.18632/aging.100395.