GHK-Cu peptīds: molekulārā struktūra, darbības mehānismi un pielietojums zinātniskajos pētījumos

GHK-Cu ir dabiski sastopams vara tripeptīda komplekss, kas izraisa zinātnieku interesi, pateicoties tā dalībai šūnu komunikācijā, ārpusšūnu matriksas regulēšanā un bioloģiskajos procesos, kas saistīti ar audu uzturēšanu un atjaunošanu. Kopš tā atklāšanas 1973. gadā, ko veica Lorens Pikarts (Loren Pickart), pētnieki analizē tā molekulāro struktūru, spēju saistīt varu, ietekmi uz gēnu ekspresiju un mijiedarbību ar šūnu ceļiem, kas piedalās iekaisuma procesos, oksidatīvajā stresā un audu pārveidē.

Šo savienojumu pirmo reizi identificēja pētījumos par cilvēka seruma komponentiem un to ietekmi uz olbaltumvielu sintēzi šūnās. Pikarts novēroja, ka no seruma iegūts faktors var ietekmēt novecojošu aknu šūnu uzvedību, stimulējot jaunākām šūnām raksturīgus olbaltumvielu sintēzes modeļus [1]. Vācot datus turpmākajos pētījumos, tika identificēts tripeptīds glicil-L-histidil-L-lizīns (GHK) un analizēta tā spēja veidot stabilu kompleksu ar divvērtīgā vara joniem (Cu²⁺).

GHK sastāv no trim aminoskābēm: glicīna, histidīna un lizīna. Pēc saistīšanās ar varš(II) jonu tas veido kompleksu, ko parasti sauc par GHK-Cu jeb vara peptīdu GHK.

Šis peptīds ir konstatēts cilvēka bioloģiskajos šķidrumos, tostarp plazmā, siekalās un urīnā. Saskaņā ar publicētajiem datiem tā koncentrācija plazmā samazinās līdz ar vecumu – no aptuveni 200 ng/mL 20 gadu vecumā līdz aptuveni 80 ng/mL 60 gadu vecumā [2–9]. Šie novērojumi ir veicinājuši pētījumu attīstību par sakarībām starp GHK, ar novecošanu saistītām šūnu izmaiņām un audu procesu regulēšanu.

Eksperimentos pētījumos ir pierādīts, ka GHK-Cu var ietekmēt kolagēna sintēzi, ārpusšūnu matricas pārveidi, angriogēno signālu pārraidi un antioksidanto enzīmu aktivitāti. Fibroblastu kultūrās un dzīvnieku modeļos tika analizēta arī tā ietekme uz iekaisuma mediatoriem, šūnu migrāciju un ar audu pārveidi saistītiem gēnu ekspresijas modeļiem.

Dažas analīzes ir saistījušas GHK ar izmaiņām vairāk nekā 4000 gēnos, kas liecina, ka tā bioloģiskā aktivitāte var aptvert daudzus savstarpēji saistītus šūnu ceļus [9].

Tomēr gēnu ekspresijas izmaiņas automātiski nenozīmē audu funkcionēšanas uzlabošanos vai labvēlīgus klīniskos rezultātus. Daudzi novērojumi ir iegūti no šūnu kultūrām, datoranalīzēm vai dzīvnieku izmēģinājumiem.

GHK-Cu joprojām ir nozīmīgs molekulāro un preklīnisko pētījumu priekšmets, jo īpaši vara koordinācijas, ārpusšūnu matriksa bioloģijas, oksidatīvā stresu un šūnu atbildes uz bojājumiem kontekstā.

GHK-Cu ir vara tripeptīds, kas dabiski sastopams cilvēka organismā (piemēram, asinīs un siekalās) un kam piemīt spēcīgas reģenerējošas, pretnovecošanas un brūču dzīšanu veicinošas īpašības, tāpēc tas ir populārs sastāvs kosmētikas līdzekļos.

GHK-Cu ir koordinācijas komplekss, kas veidojas, tripeptīdam glicil-L-histidil-L-lizīnam saistot varš(II) jonu. Vara koordinēšanas spēja ir viena no molekulārajām īpašībām, kas to atšķir no daudziem citiem īsiem peptīdiem [1, 2].

Varš ir nepieciešams mikroelements, kas piedalās neskaitāmos bioloģiskajos procesos. Tas atbalsta enzīmu darbību, mitohondriju enerģijas ražošanu, antioksidantu aizsardzību, kā arī saistaudu veidošanos un uzturēšanu.

Vienlaikus vara metabolismam ir jābūt stingri regulētam, jo nesaistīts vai nepareizi kontrolēts varš var piedalīties reakcijās, kas izraisa reaktīvo skābekļa formu veidošanos.

GHK veido molekulāro vidi, kas nodrošina vara saistīšanu un ietekmē tā ķīmisko īpašības. Pateicoties šai mijiedarbībai, GHK-Cu ir kļuvis par noderīgu pētījumu modeli mazo peptīdu iesaistīšanās metālu koordinācijā un šūnu signālu pārraidē analizēšanai.

Agrīnie pētījumi bija vērsti uz tā ietekmi uz fibroblastiem, kas ir šūnas, kuras atbild par daudzu saistaudu sastāvdaļu ražošanu un uzturēšanu.

Fibroblasti sintetizē kolagēnu, ar elastīnu saistītus komponentus, glikozaminoglikānus un citas ārpusšūnu matriksas molekulas. Šīs vielas nodrošina audu mehāniskās īpašības, organizāciju un strukturālo stabilitāti.

Pētījumi, ko veica Borels, Makvarts un līdzstrādnieki, parādīja, ka GHK-Cu var ietekmēt ārpusšūnu matriksa metabolismu fibroblastu kultūrās pat pie koncentrācijas, kas ir aptuveni 1–10 nanomoli uz litru (nM) [10–13].

Novērotie efekti ietvēra izmaiņas kolagēna ražošanā un noārdīšanā, sulfatēto glikozaminoglikānu un mazo proteoglikānu, piemēram, dekorīna, veidošanā.

Kas svarīgi, ārpusšūnu matrikss uzturēšanai ir nepieciešams kas vairāk nekā tikai strukturālo olbaltumvielu ražošanas palielināšana.

Pareiza audu pārveide balstās uz saskaņotu matricas komponentu sintēzi, modifikāciju un noārdīšanos.

Matricas metaloproteināzes (MMP) piedalās ārpusšūnu matricas noārdīšanā, savukārt metaloproteināžu audu inhibitori (TIMP) palīdz regulēt to aktivitāti.

Eksperimentos pētījumos ir novērots, ka GHK-Cu ietekmē MMP aktivitāti un tādu inhibitoru kā TIMP-1 un TIMP-2 ekspresiju [11, 12].

Šie novērojumi liecina par saistību starp GHK-Cu iedarbību un matricas komponenšu pārmaiņām. Tomēr tie nepierāda, ka šī saistība cilvēkiem konsekventi izraisa labvēlīgu audu pārstrukturēšanu.

Papildu preklīniskajos pētījumos GHK-Cu tika analizēts brūču modeļos, tostarp eksperimentos, kas saistīti ar brūču saraušanos, transplantātu integrāciju, iekaisuma signālapmaiņu un šūnu migrāciju [3–5].

Citos pētījumos tika pētīta fibroblastu reakcija uz starojuma izraisītiem bojājumiem. Tajos tika reģistrētas izmaiņas šūnu augšanā un dzīvotspējā, kā arī augšanas faktoru ekspresijā [14].

Eksperimentos tika analizēta arī mijiedarbība, kas ietver imūnšūnas un endoteliālās šūnas, kuras piedalās audu atbildes reakcijā uz bojājumiem [15].

Pētījumi ar dzīvniekiem ir uzrādījuši izmaiņas antioksidantiskajā aktivitātē un ar brūcēm saistītos parametros pēc pakļaušanas GHK-Cu vai materiālu, kas satur radniecīgus peptīdus, iedarbībai [16–21].

Šie rezultāti palielināja interesi par GHK-Cu kā pētniecības rīku šūnu novecošanās, ārpusšūnu matriksas regulēšanas un audu atbildes reakcijas uz oksidatīviem un mehāniskiem bojājumiem analizēšanai.

Tomēr novērojumus par brūču slēgšanos, fibroblastu uzvedību vai molekulāro signalizāciju eksperimentālos modeļos nevajadzētu interpretēt kā terapeitiskās efektivitātes pierādījumu cilvēkiem.

GHK-Cu darbības mehānisms: in vitro un in vivo pētījumu rezultāti

Bioloģiskie mehānismi, kas saistīti ar GHK-Cu, ietver vairākus savstarpēji saistītus ceļus, nevis vienu nepārprotami noteiktu molekulāro mērķi.

Eksperimentālajos pētījumos tika analizēta tā ietekme uz gēnu ekspresiju, augšanas faktoru signālpārnesi, ārpusšūnu matriksas metabolismu, atbildes reakciju uz oksidatīvo stresu, iekaisuma ceļiem un šūnu mijiedarbību ar apkārtējiem audiem.

Mehānismus pētīja, izmantojot šūnu kultūras, dzīvnieku modeļus un datortehniskās analīzes.

Gēnu ekspresija un plaušu audu pārveide

Viens no būtiskiem pētījumu virzieniem ir saistība starp GHK un gēnu ekspresijas modeļiem, kas saistīti ar hronisku obstruktīvu plaušu slimību (HOPS).

Daudzcentru pētījumā, kurā piedalījās zinātnieki no Bostonas universitātes, Groningenas universitātes, Britu Kolumbijas universitātes un Pensilvānijas universitātes, tika analizētas gēnu ekspresijas signatūras, kas saistītas ar plaušu audu iznīcināšanu emfizēmas gaitā [22].

Tika identificēta 127 gēnu grupa, kas saistīta ar plaušu emfizēmu, un tika pētīts, vai GHK var ietekmēt neparastos transkripcijas modeļus.

Zinātnieki novēroja, ka pakļaušana GHK iedarbībai bija saistīta ar transformējošā augšanas faktora beta (TGF-β) signālu pārvades izmaiņām.

TGF-β ir svarīgs šūnu diferenciācijas, ārpusšūnu matriksa veidošanās, audu remodelēšanas un fibrozes regulators.

Tā darbība ir atkarīga no bioloģiskā konteksta. Lai gan TGF-β piedalās normālā audu uzturēšanā, traucēta signālu pārnese var veicināt arī patoloģisku matricas komponentu uzkrāšanos un fibrozes attīstību.

Laboratoriskajos eksperimentos, kuros izmantoja no HOPS pacientiem iegūtus plaušu fibroblastus, pakļaušana GHK iedarbībai bija saistīta ar kolagēna saraušanās un reorganizācijas spēju uzlabošanos.

Pētnieki reģistrēja arī palielinātu integrīna β1 ekspresiju, kas liecina par iespējamu no integrīniem atkarīgu šūnu mijiedarbības iesaisti [22, 23].

Integrīni ir olbaltumvielas, kas palīdz šūnām mijiedarboties ar tām apkārtējo ārpusšūnu matrinku. Tās piedalās šūnu adhēzijā un migrācijā, mehānisko signālu pārraidē un audu organizācijā.

Šie novērojumi liecina, ka GHK var ietekmēt saistību starp TGF-β signālceļu, integrīnu ekspresiju un ārpusšūnu matrikss regulāciju.

Tomēr eksperimenti nepierāda, ka GHK-Cu mainītu HOSPR gaitu vai atjaunotu plaušu darbību pacientiem.

Rezultāti attiecas uz gēnu ekspresijas modeļiem un šūnu uzvedību eksperimentos.

Ar audzējiem saistīto gēnu ekspresija un šūnu proliferācija

GHK ir pētīts arī pētījumos par ar audzējiem saistītiem gēnu tīkliem.

Hong un līdzautori pētīja gēnu ekspresijas raksturlielumus, kas saistīti ar kolorektālā vēža progresēšanu un tā metastātisko potenciālu [7, 24].

Vēlāka šo datu interpretācija saistīja GHK ar aptuveni 70% izvēlētas ar metastāzēm saistītas gēnu grupas ekspresijas samazināšanos.

Šajā kontekstā cita starpā tika apspriesti MAP3K5, LMNA, APP un NFATC2 gēni.

Šie gēni piedalās dažādos bioloģiskajos procesos, tostarp intracelulārajā signālpārnadzē, šūnas kodola organizācijā, šūnu regulācijā un transkripcijas atbildes reakcijās.

Tomēr gēnu ekspresijas izmaiņas, kas saistītas ar metastāzēm, nevajadzētu pielīdzināt pierādītai metastāžu novēršanai.

Gēnu ekspresijas signatūras var palīdzēt identificēt ar slimības gaitu saistītus ceļus, taču to modifikācija nav patstāvīgs pretaudzēju darbības klīniskais pierādījums.

Citos laboratoriskajos pētījumos tika analizēta GHK ekspozīcija cilvēku vēža šūnu līnijās.

Eksperimentu daļā, kas ietvēra neiroblastomas un krūts vēža modeļus, nanomolārās koncentrācijās tika novērotas izmaiņas šūnu apoptozē un proliferācijā [25].

Apoptoze ir regulēts šūnu nāves veids, kas piedalās audu attīstībā un šūnu homeostāzes uzturēšanā.

Apoptozes traucējumi ir nozīmīgi audzēju bioloģijā, jo ļaundabīgās šūnas var attīstīt mehānismus, kas ļauj tām izvairīties no normāliem šūnu nāves signāliem.

Tomēr apoptozes novērošana audzēja šūnu kultūrās nepierāda selektīvu pretvēža darbību cilvēka organismā.

Šūnu līnijas atšķiras no reāliem audzējiem arhitektūras, metabolisma, mikrovide, mijiedarbības ar imūnsistēmu un ekspozīcijas apstākļu ziņā.

Tāpēc šie rezultāti joprojām ir būtiski karcinoģenēzes mehānismu pētījumiem, nevis apstiprinātiem klīniskās onkoloģijas lietojumiem.

Fibroblastu aktivitāte un ārpusšūnu matricas remodelēšana

Fibroblastu pētījumi ir vēl viens svarīgs zinātniskās literatūras elements attiecībā uz GHK-Cu.

Pēc pakļaušanas vara tripeptīdu kompleksu iedarbībai tika novērotas kolagēna veidošanās, matricas degradācijas un augšanas faktoru ekspresijas izmaiņas [9, 26].

Kolagēna sintēze ir tikai viens no ārpusšūnu matricas regulēšanas elementiem.

Lai saglabātu pareizu audu struktūru, matricei ir jāpakļaujas arī kontrolētai degradācijai un reorganizācijai.

GHK-Cu ir saistīts ar ekstracelulāro matriksa metāaloproteināžu aktivitātes izmaiņām un TIMP-1 un TIMP-2 ekspresiju.

Šie rezultāti liecina, ka savienojums var ietekmēt gan matrikakses komponentu veidošanos, gan noārdīšanos.

Šo izmaiņu virziens un nozīme ir atkarīga no eksperimentālā modeļa un apkārtējiem bioloģiskajiem apstākļiem.

Apstarojumam pakļautajos fibroblastu modeļos pētnieki analizēja, vai vara tripeptīdi ietekmē šūnu augšanu un augšanas faktoru ekspresiju pēc pakļaušanas starojumam [26].

Literatūrā aplūkotajās gēnu ekspresijas analīzēs tika reģistrētas arī izmaiņas ar DNS labošanu saistītos ceļos. Tās ietvēra 47 gēnus ar paaugstinātu ekspresiju un piecus gēnus, kuru ekspresija samazinājās par vismaz 50% [9, 26].

Šie rezultāti norāda uz šūnu transkripcijas atbildes izmaiņām.

Tomēr pašas par sevi tās nepierāda pilnīgu DNS labošanu, šūnu novecošanās novēršanu vai pareizas audu darbības atjaunošanos.

Angioģenētiskā signalizācija un augšanas faktori

GHK-Cu ir pētīts arī angioģenēzes kontekstā, kas ir jaunu asinsvadu veidošanās process no jau esošajām asinsvadu struktūrām.

Angioģenēze piedalās audu attīstībā, atbildes reakcijā uz bojājumiem un asinsvadu tīkla uzturēšanā.

Eksperimentos pētīja sakarības starp GHK saturošiem materiāliem un tādiem faktoriem kā asinsvadu endotēlija augšanas faktors (VEGF) un bāziskais fibroblastu augšanas faktors (bFGF) [27].

VEGF piedalās endotēlija šūnu signālu pārraidē un asinsvadu attīstībā.

Bāziskais FGF piedalās šūnu proliferācijā un diferenciācijā, kā arī audu atbildes reakcijā, kas ietver asinsvadu un saistaudu šūnas.

Dažos pētījumos tika novērota šo faktoru palielināta ekspresija vai sekrēcija pēc pakļaušanas GHK saistītiem materiāliem.

Kā iespējams šo efektu elements tika apspriests arī no integrīniem atkarīgais signālceļš.

Tomēr VEGF vai bFGF ekspresijas izmaiņas nepierāda funkcionālu asinsvadu veidošanos.

Pareiza angioģenēze ietver vairākus posmus, tostarp endotēlija šūnu migrāciju, asinsvadu veidošanos, to stabilizāciju un iekļaušanos esošajā asinsrites sistēmā.

Tā-tad pieejamie rezultāti sniedz mehānistiskus pierādījumus, kas ir svarīgi asinsvadu pētījumiem, taču tie neapstiprina klīniskos Ieguvumus, kas saistīti ar asinsvadu darbību.

GHK-Cu struktūra un biokīmija

GHK-Cu molekulārā struktūra ir pētīta, izmantojot dažādas analītiskās un spektroskopiskās metodes.

Tās ietvēra rentgenstruktūras analīzi, elektronu paramagnētisko rezonansi (EPR), rentgena absorbcijas spektroskopiju, protonu magnētisko rezonansi un ķīmiskās titrēšanas metodes [28–30].

Šīs metodes palīdzēja raksturot varas koordinācijas vidi peptīdu kompleksā.

Vara koordinācija un molekulārā ģeometrija

GHK sastāv dinu aminoskābēm, kas izkārtotas secībā glicīns–histidīns–lizīns.

Histidīna atlikums ir īpaši svarīgs, jo tā imidazolgrupa var piedalīties metālu jonu koordinācijā.

Strukturālie pētījumi liecina, ka varš(II) var veidot koordinācijas saites ar trim slāpekļa atomiem, kas pilda elektronu donoru funkciju peptīda molekulā.

Pie tiem pieder glicīna aminogrupas slāpekļa atoms, deprotonēts amīda slāpekļa atoms, kas saistīts ar glicīna un histidīna saiti, un histidīna imidazola gredzena slāpekļa atoms [28–30].

Ceturto koordinācijas pozīciju var ieņemt cita donora grupa, atkarībā no ķīmiskās vides.

Šo izkārtojumu bieži raksturo kā kvadrātiski planāru vai kvadrātiskai planārai ģeometrijai tuvu ģeometriju.

Precīza ģeometrija var atkarībā no pH, šķīdinātāja apstākļiem, papildu ligandu klātbūtnes un pētāmās kompleksa formas.

Vara koordinācija ietekmē GHK-Cu ķīmiskās īpašības un atšķir šo kompleksu no nesaistītā GHK peptīda.

Strukturālā saistība starp peptīdu un varu ir svarīga, jo metāla saistīšanās var mainīt molekulas reaktivitāti un tās mijiedarbību ar citiem bioloģiskiem savienojumiem.

Zīmējums: GHK-Cu kompleksa molekulārā struktūra

GHK-Cu molekulārā struktūra parāda, kā glicīna-histidīna-lizīna peptīds nodrošina slāpekli saturošas koordinācijas vietas, kas ļauj saistīt varu(II).

Struktūras un spektroskopiskajos pētījumos aminoGrupas slāpeklis, peptīdsaites amīda slāpeklis un histidīna imidazola gredzena slāpeklis tika identificēti kā svarīgi elementi, kas piedalās vara saistīšanā.

Koordinācijas vide palīdz izskaidrot, kāpēc GHK tiek pētīts kā varu saistošs peptīds un metālu un peptīdu mijiedarbības modelis.

Mijiedarbība ar albumīnu un citām ar varu saistītām molekulām

Fizioloģiskajā pH līmenī GHK-Cu var piedalīties dažādos koordinācijas līdzsvaros, kuros iesaistīti papildu legandi.

Lau un Sarkar pētīja varša(II), GHK, histidīnu saturošu molekulu un seruma albumīna mijiedarbību [28–30].

Seruma albumīns ir olbaltumviela, kas lielā daudzumā ir sastopama plazmā. Tas piedalās daudzu vielu, tostarp noteiktu metālu jonu, transportēšanā un saistīšanā.

Literatūrā ir aprakstīta gan GHK, gan albumīna augsta radniecība pret vara saistīšanu. Pētītajos apstākļos tika uzrādītas vērtības aptuveni log₁₀ 16,44 priekš GHK un log₁₀ 16,2 priekš albumīna.

Šīs vērtības liecina, ka GHK var piedalīties konkurējošās mijiedarbībās, kas saistītas ar vara saistīšanu.

Tomēr vara izplatība bioloģiskajos šķidrumos ir atkarīga no kaut kā vairāk nekā tikai divu izolētu molekulu saistīšanās spēka.

Uz varša pieejamību ietekmē arī atsevišķu vielu koncentrācija, konkurējošie legandi, olbaltumvielu mijiedarbība un šūnu transporta sistēmas.

GHK spēja saistīt varu tāpēc veido pamatu pētījumiem par metāla pārnesi un koordinācijas līdzsvaru.

Tomēr tas nepierāda, ka GHK-Cu droši nogādā varu uz visiem audiem vai ka tas novērš visas ar varu saistītās oksidatīvās reakcijas.

Ar varu atkarīgie enzīmi un redoksandarbības procesu regulācija

Varš ir nepieciešams daudzu svarīgu enzīmu darbībai.

Liziloksidāze piedalās šķērssaišu veidošanā starp kolagēna un elastīna molekulām.

Varša-vara superoksīda dismutāze, ko parasti sauc par SOD1, veicina antioksidanto aizsardzību, katalizējot superoksīda radikāļu pārvēršanu mazāk reaģējošos produktos.

Citohroma c oksidāze piedalās mitohondriālajā elektronu transportā un šūnu enerģijas ražošanā.

Tā kā GHK saista varu, zinātnieki analizēja, vai GHK-Cu var ietekmēt šī metāla pieejamību un ar to saistītos biochemiķiskos procesus.

Tomēr vara saistošā peptīda klātbūtne nenozīmē, ka metāls tiek tieši nodots katram no vara atkarīgajam enzīmam.

Šūnām irspecializēti transportieri, saistošie olbaltumvielas un sistēmas, kas regulē intracelulāro vara sadalījumu.

Šiem mehānismiem ir nozīme, jo brīvs vai nepareizi regulēts varš var piedalīties oksidēšanās reakcijās.

Noteiktos apstākļos varas redoksreakcijas var veicināt reaktīvo ķīmisko formu veidošanos.

Tāpēc GHK-Cu tika pētīts attiecībā uz tā iespējamo ietekmi uz vara reaktivitāti un oksidatīvajiem procesiem [31, 32].

Šī saistība ir ķīmiski sarežģīta. Vara saistīšanās var mainīt metāla reaktivitāti, bet bioloģiskās sekas ir atkarīgas no visas ķīmiskās vides.

Aldehīdu saistīšana un antioksidantu ķīmija

GHK tika pētīts arī attiecībā uz spēju reaģēt ar izvēlētiem aldehīdiem, kas rodas lipīdu peroksidācijas laikā.

Lipīdu peroksidācija ietver oksidēšanas reakcijas, kas ietekmē šūnu membrānu lipīdus un citas lipīdus saturošas struktūras.

Šo reakciju rezultātā var veidoties reaktīvi aldehīdi, piemēram, 4-hidroksinonenāls un akroleīns.

Abi savienojumi tiek pētīti, jo tie var mijiedarboties ar olbaltumvielām un citām šūnu molekulām.

Ķīmiskajos pētījumos ir pierādīts, ka GHK var veidot reakcijas produktus ar šiem aldehīdiem, kas liecina par to potenciālo saistīšanas spēju eksperimentālos apstākļos [31, 32].

Šie rezultāti sniedz informāciju o GHK ķīmisko reaktivitāti.

Tomēr spēja reaģēt ar aldehīdiem laboratorijas apstākļos nepierāda, ka peptīds novērš audu oksidatīvo bojājumu cilvēkiem.

Reaģentu koncentrācijas, konkurējošu bioloģisko molekulu klātbūtne un reakcijas ātrums ir svarīgi, novērtējot iespējamās bioloģiskās sekas.

Šūnu adhezija un mijiedarbība ar ārpusšūnu matriksu

GHK-Cu pētīja arī šūnu adhesijas un to mijiedarbības ar ārpusšūnas materiāliem kontekstā.

Šūnu adhēzija ir būtiska pareizai audu organizācijai, jo šūnām ir jāatpazīst apkārtējā vide un jāmijiedarbojas ar to.

Pētījumos, kuros tika iekļautas osteoblastu šūnas un hepatocītu adhēzijas modeļi, tika analizēta ar GHK saistīto materiālu ietekme uz šūnu izplatīšanos, to adhēziju un fenotipu [33, 34].

Šiem pētījumiem ir nozīme biomateriālu attīstībā, kuros peptide var iestrādāt inženiertehniskajās virsmās vai piesaistīt tām.

Novērotie efekti ir atkarīgi de peptīda veida, materiāla sastāva, šūnu tipa un eksperimentālajiem apstākļiem.

Tie sniedz informāciju par mijiedarbību starp peptīdiem un virsmām, kā arī starp šūnām un matriksi, nevis tiešus pierādījumus par audu reģenerāciju cilvēkiem.

GHK-Cu lietojums zinātniskajos pētījumos

GHK-Cu ir pētīts daudzās molekulāro un preklīnisko pētījumu jomās.

Tās ietver oksidatīvā stresa bioloģiju, iekaisuma signālu pārnesi, fibrozi, plaušu bojājumus, neironu atbildes reakcijas, asinsvadu regulāciju, ārpusšūnu matriksa pārbūvi, kā arī gēnu ekspresijas analīzi.

Šajās sadaļās ir sniegti svarīgākie eksperimentālie rezultāti un to ierobežojumi.

Pētījumi par antioksidatīvo iedarbību un redoksprocesiem

Ar varu atkarīgie antioksidanto fermenti ir svarīgs šūnu aizsardzības elements pret oksidatīvo stresu.

Viens no piemēriem ir SOD1, kuras pareizai darbībai ir nepieciešams varš un cinks.

Pētījumi par vara deficītu ir parādījuši, ka tā nepietiekama pieejamība var ietekmēt SOD1 aktivitāti un palielināt ar oksidatīvo stresu saistīto parametru vērtības [35–38].

Šie rezultāti apstiprina pareizas vara vielmaiņas regulācijas bioloģisko nozīmi.

Tomēr pētījumus par vara deficītu vai tā piegādes atjaunošanu uzturā nevar automātiski uzskatīt par pierādījumu identiskai GHK-Cu iedarbībai.

Atšķirība ir būtiska, jo konkrētā vara kompleksa bioloģiskā uzvedība ir atkarīga no tā molekulārās struktūras, izvietojuma un mijiedarbības ar ceļiem, kas regulē šī metāla apriti.

Eksperimentos pētījumos, kuros tika iekļauti biomateriāli, kas satur GHK un vara tripeptīdu kompleksus, analizēja antioksidantu atbildes reakcijas un ar audiem saistītos parametrus.

Daļa pētījumu attiecās uz to, vai GHK-Cu ietekmē ar feritīnu saistīto lipīdu peroksidāciju.

Feritīns ir olbaltumviela, kas piedalās dzelzs uzkrāšanā šūnās.

Dzelzs var piedalīties oksidēšanās reakcijās, ja tā atrodas reaktīvās formās.

Pētījumos ir parādīts, ka ar GHK koordinēts varš noteiktos eksperimentālos apstākļos var ietekmēt no feritīna atkarīgu lipīdu peroksidāciju [39, 40].

Šie novērojumi sniedz informāciju par mijiedarbību starp vara kompleksiem, ar dzelzi saistītiem procesiem un oksidatīvo reakciju ķīmiju.

Papildu ķīmiskie pētījumi analizēja GHK reakcijas ar lipīdu peroksidācijas produktiem, piemēram, 4-hidroksinonenālu un akroleīnu [41, 42].

Rezultāti pamato turpmākus pētījumus par GHK kā molekulu, kas spēj piedalīties ķīmiskajās reakcijās ar aldehīdiem.

Tomēr antioksidatīvā aktivitāte, kas pierādīta ķīmiskajā testā vai šūnu modelī, nepierāda klīnisku aizsardzību pret oksidatīvajiem bojājumiem.

iekaisuma signālu pārnese un citokīnu regulācija

iekaisums ietver koordinētu mijiedarbību starp imūnšūnām, signālproteīniem un audu reakcijām.

Vairākos laboratorijas pētījumos tika analizēta GHK-Cu ietekme uz iekaisuma ceļiem.

Šūnu pētījumos, kuros izmantoja makrofāgiem līdzīgas RAW 264.7 šūnas un zarnu epitēlija Caco-2 šūnas, pēc ekspozīcijas pret GHK-Cu tika novērotas izmaiņas oksidatīvajos un iekaisuma parametros.

Tās ietvēra reaktīvo skābekļa formu veidošanās samazināšanos, ar glutationu saistīto antioksidanto parametru vērtību palielināšanos un tādu iekaisuma mediatoru kā TNF-$\alpha$ un IL-6 izmaiņas [43–47].

Pētnieki analizēja arī signālceļus, kas ietver kodolfaktoru kappa B (NF-κB) un mitogēnu aktivēto proteīnkināzi p38 (p38 MAPK).

NF-κB piedalās to gēnu regulēšanā, kas saistīti ar iekaisumu, imunitāti, šūnu izdzīvošanu un atbildes reakciju uz stresu.

P38 MAPK signālu ceļš ir iesaistīts šūnu reakcijās, kas saistītas ar iekaisuma mediatoriem un vides stresu.

Eksperimentos pētījumos GHK-Cu ir saistīts ar NF-κB p65 un p38 MAPK signālceļu izmaiņām.

Šie rezultāti liecina, ka savienojums laboratorijas apstākļos var ietekmēt iekaisuma atbildes reakcijā iesaistītos ceļus.

Tomēr ne visi pētījumi, kas citēti plašākā diskusijā, tieši izvērtē GHK-Cu. Daļa publikāciju sniedz vispārīgu informāciju par iekaisuma ceļiem vai citiem eksperimentāliem savienojumiem.

Tāpēc pats par sevi pētījumu par NF-κB vai p38 MAPK esamība nepierāda, ka GHK-Cu izraisa noteiktu klīnisku pretiekaisuma efektu.

Šie rezultāti ir visnoderīgāki iespējamo molekulāro mijiedarbību izpētei un tādu jautājumu identificēšanai, kuri prasa turpmākus eksperimentus.

Šķiedrošanas, plaušu bojājumu un neiroprotekcijas modeļi

Fibroze ir nepareiza ārpusšūnu matrikas komponenšu uzkrāšanās vai organizācija audos.

Tas var attīstīties, reaģējot uz ilgstošu bojājumu, iekaisumu vai izmainītu šūnu signālu pārraidi.

GHK tiek pētīts eksperimentālos plaušu fibrozes modeļos tā aprakstītās ietekmes dēļ uz fibroblastu aktivitāti un ar TGF-β saistītajiem ceļiem.

Bleomicīna izraisītas plaušu fibrozes peles modelī zinātnieki novēroja audu biezuma izmaiņas, iekaisuma šūnu infiltrāciju un ar epitēlija-mesenhimālo pāreju saistītos ceļus [48].

Pētījumā analizēta TGF-β1/Smad signālu ceļa darbība, kas piedalās šūnu atbildes reakcijās, kuras saistītas ar matriksa veidošanos un fibrozi.

Šie novērojumi liecina, ka GHK var ietekmēt noteiktus ar fibrozi saistītus ceļus eksperimentos ar dzīvniekiem.

Tomēr ķīmiski izraisītā peļu slimības modelī iegūtais rezultāts nepierāda efektivitāti plaušu fibrozes ārstēšanā cilvēkiem.

Bioloģiskie mehānismi, slimības gaita un klīniskie apstākļi var būtiski atšķirties.

Neirobioloģiskajos pētījumos, kas saistīti ar GHK, tika analizēts arī oksidatīvais stress, iekaisuma signālu pārnese un iespējamā mijiedarbība ar gēnu regulēšanas ceļiem.

Daži pētījumi saista šos mehānismus ar histonu deacetilāzi 2 (HDAC2) — enzīmu, kas piedalās hromatīna regulācijā un gēnu ekspresijā.

Tomēr citētā literatura par kognitīvajām izmaiņām novecojošām pelēm un ar HDAC saistītajiem mehānismiem ietver arī pētījumus, kas tieši nepstiprina GHK-Cu raksturīgo iedarbību [49].

Tāpēc apgalvojumi par kognitīvo funkciju uzlabošanu, neiroiekaisuma mazināšanu vai tiešu HDAC2 regulāciju, ko veic GHK-Cu, prasa skaidru nošķiršanu no citu eksperimentālo intervenciju pētījumu rezultātiem.

Pieejamie pierādījumi pamato interesi par mehāniskiem pētījumiem, bet nepstiprina pierādītu neiroprotektīvu iedarbību cilvēkiem.

Novērojumi angioģenēzes un asinsvadu bioloģijas modeļos

Angioģenēze ir būtisks process audu attīstībā un labošanā.

Tas ietver jaunu asinsvadu veidošanos un prasa koordinētu mijiedarbību starp endotēlija šūnām, augšanas faktoriem, ārpusšūnu matricas komponentiem un apkārtējiem audiem.

GHK-Cu ir pētīts eksperimentālajās sistēmās, kas saistītas ar asinsvadu signalizāciju un audu remodelēšanu.

Dažos pētījumos ir reģistrētas ar angioģenēzi saistīto faktoru, tostarp VEGF un bFGF, izmaiņas [50, 51].

Šie olbaltumvielas piedalās endotēlija šūnu aktivitātē, asinsvadu attīstībā un šūnu atbildes reakcijā uz bojājumiem.

Zinātnieki analizēja arī attiecības starp ar GHK saistītiem savienojumiem un strukturālajiem olbaltumvielām, piemēram, kolagēnu un elastīnu.

Kolagēns ir atbildīgs par audu izturību, savukārt elastīns nodrošina to spēju stiepties un atgriezties sākotnējā formā.

Abiem olbaltumvielām ir nozīme asinsvadu struktūrā un ārpusšūnu matriksa organizācijā.

Tomēr izauguma faktoru ekspresijas vai matrices olbaltumvielu sintēzes izmaiņas ne vienmēr nozīmē asins plūsmas uzlabošanos.

Funkcionālā asinsvadu atjaunošana ietver papildu procesus, tostarp asinsvadu veidošanos, to nobriešanu, integrāciju un fizioloģisko regulāciju.

Dažos plašākos pētījumos par asinsvadu reģenerāciju tiek pieminēta arī antitrombotiskā un asinsvadus paplašinošā iedarbība.

Tie ir atsevišķi fizioloģiski procesi, un nevajadzētu pieņemt, ka tie tieši izriet no iedarbības uz GHK-Cu bez atbilstošiem pierādījumiem par šo konkrēto savienojumu.

Tāpēc pašreizējie rezultāti joprojām ir nozīmīgi galvenokārt eksperimentāliem pētījumiem par angioģenēzi un asinsvadu bioloģiju.

Pierādījumi no neironu un neirotrofiskajiem modeļiem

Neuronu attīstība un reģenerācija ietver augšanas faktoru līdzdalību, mijiedarbību ar ārpusšūnu matriku, šūnu migrāciju un neironu izaugumu pagarināšanos.

Neirītu augšana ir viens no eksperimentālajiem parametriem, ko izmanto neironu diferenciācijas un attīstības pētīšanai.

Agrīnajos pētījumos, izmantojot neironu audu kultūras, tika analizēta peptīdu un kondicionēto barotņu ietekme uz neironu diferenciāciju [52, 53].

Šie pētījumi veicināja plašāku interesi par īsiem peptīdiem kā iespējamiem šūnu uzvedības regulatoriem.

Ar GHK saistītos materiālus analizēja arī eksperimentālās nervu reģenerācijas sistēmās.

Vienā no pētījumiem tika ieviests peptīds, kas veicina šūnu adheziju pie kolagēna caurulītēm, ko izmanto pārrautu nervu posmu savienošanai [54].

Zinātnieki reģistrēja izmaiņas augšanas faktoros un iekaisuma mediatoros, tostarp nervu augšanas faktorā (NGF) un neirotrofīnos NT-3 un NT-4.

Papildu novērojumi ietvēra aksonu parametrus un Švanna šūnu reakcijas.

Švana šūnas ir svarīga perifērās nervu sistēmas sastāvdaļa. Tās atbalsta aksonus un piedalās atbildes reakcijā uz perifēro nervu bojājumiem.

Tomēr rezultātus, kas iegūti, izmantojot kolagēna caurulītes, kuras satur peptīdus, nevajadzētu automātiski attiecināt uz brīvi cirkulējošu GHK-Cu.

Novērotos efektus var ietekmēt biomateriāls, lokālā vide, peptīda pasniegšanas veids un izmantotais eksperimentālais modelis.

Tāpat augšanas faktoru ekspresijas vai aksonu skaita palielināšanās eksperimentālā sistēmā nepierāda funkcionālu neiroloģisko reġenerāciju cilvēkiem.

Šos pētījumus vislabāk var interpretēt kā biomateriālu, kas satur peptīdus, un neirotrofiskās signālapmaiņas analīzi.

Gēnu regulācija un matricas pārstrukturēšana

Gēnu ekspresijas pētījumi ir kļuvuši par nozīmīgu zinātniskās diskusijas elementu par GHK un GHK-Cu.

Agrīnie eksperimenti bija vērsti uz šūnējošām atbildes reakcijām, kas saistītas ar brūcēm, tostarp fibroblasta uzvedību, kolagēna ražošanu un ārpusšūnu matrikss organizāciju [55, 56].

Vēlāki Makvarta (Maquart) un līdzstrādnieku pētījumi analizēja GHK-Cu ietekmi uz kolagēna sintēzi un ar matricu saistītām molekulām [57–59].

Eksperimentos, kuros izmanto fibroblastu kultūras, tika novērotas kolagēna ražošanas izmaiņas pie zemām koncentrācijām.

Citos pētījumos analizēja sulfatētus glikozaminoglikānus un mazus proteoglikānus.

Šīs molekulas piedalās ārpusšūnu matriksas organizēšanā, hidratācijas uzturēšanā, mehānisko īpašību veidošanā un mijiedarbībā starp šūnām un apkārtējiem audiem.

GHK-Cu ir saistīts arī ar ekstracelulāro matriksa metalloproteināzu, tostarp MMP-2, ekspresijas izmaiņām [59].

Tam ir nozīme, jo ārpusšūnu matricas uzturēšana prasa gan kontrolētu degradāciju, gan sintēzi.

Pats kolagēna ražošanas pieaugums vēl nepierāda audu organizācijas uzlabošanos.

Līdzīgi paaugstināta MMP aktivitāte var izraisīt dažādas sekas atkarībā no audu veida un bioloģiskā konteksta.

Tādējādi pētījumi liecina, ka GHK-Cu var ietekmēt matricas pārmaiņas, izmantojot vairākus savstarpēji saistītus ceļus.

Tomēr šie novērojumi nepierāda dzīšanu bez rētu veidošanās vai paredzamu audu regenerāciju cilvēkiem.

Papildu eksperimentos tika novērotas izmaiņas attiecībā uz tādām molekulām kā dekoriņš, dermatansulfāts un hondroitīnsulfāts [60].

Dekorīns ir mazs proteoglikāns, kas saistīts ar kolagēna organizāciju un ārpusšūnu matrikss regulēšanu.

Dermatansulfāts un hondroitīnsulfāts pieder pie glikozaminoglikāniem, kas ietekmē saistaudu struktūru un īpašības.

Izmaiņas to ekspresijā vai sintēzē sniedz informāciju par matriksas metabolismu.

Tomēr tie paši par sevi nepierāda audu izturības, to izskata vai klīnisko dzīšanas rezultātu uzlabošanos.

Integrīnu ekspresija un epidermas šūnu pētījumi

Keratinocīti ir epidermas dominējošais šūnu tips.

Tie piedalās ādas barjeras veidošanā, šūnu diferencēšanā un atbildes reakcijā uz audu bojājumiem.

Seulas Nacionālās universitātes zinātnieki pētīja vara peptīda GHK ietekmi uz integrīnu ekspresiju un p63 pozitīvu šūnu klātbūtni keratinocītos [61].

Integrīni piedalās šūnu piesaistīšanā un komunikācijā ar ārpusšūnu matriksu.

Proteīns p63 ir saistīts ar epitēlija attīstību un noteiktu epitēlija šūnu populāciju uzturēšanu.

Pētījumā tika novērota palielināta integrīnu ekspresija un lielāks p63-pozitīvo šūnu īpatsvars pēc ekspozīcijas pret vara peptīdu GHK.

Šie novērojumi liecina par iespējamu ietekmi uz šūnu pazīmēm, kas saistītas ar epidermas uzturēšanu.

Tomēr šo marķieru izmaiņas pašas par sevi nepierāda pastiprinātu ādas deģenerāciju (or: reģenerāciju) cilvēkiem. *Note: The contextually correct translation for "regeneracji" in skincare is "reģenerāciju" (regeneration), not "deģenerāciju" (degeneration).* Tomēr šo marķieru izmaiņas pašas par sevi nepierāda pastiprinātu ādas reģenerāciju cilvēkiem.

Rezultāti paliek ierobežoti ar izmantotajiem šūnu modeļiem un analizētajiem parametriem.

Liela mēroga gēnu ekspresijas profilēšana

Datora metodes ir palielinājušas iespējas analizēt dažādu savienojumu ietekmi uz gēnu ekspresijas tīkliem.

Savienojamības karte, ko bieži dēvē par cMap, ir pētniecības resurss, ko izmanto gēnu ekspresijas modeļu salīdzināšanai, kuri saistīti ar bioloģiskiem stāvokļiem un ķīmisko vielu iedarbību.

Saistītās skaitļošanas pieejas, tostarp MANTRA, tika izmantotas, lai pētītu sakarības starp savienojumiem un transkripcijas atbildes reakcijām [62, 63].

GHK šajā kontekstā tika apspriests tā saistības dēļ ar plašām gēnu ekspresijas modeļu izmaiņām.

Vienā no analīzēm tika reģistrēti 268 geni ar paaugstinātu ekspresiju un 167 geni ar samazinātu ekspresiju.

Citos pētījumos GHK tika saistīts ar izmaiņām, kas ietver lielāku gēnu un ceļu skaitu [9, 62–64].

Šie rezultāti liecina, că ar GHK saistītās atbildes reakcijas var ietvert daudzas bioloģiskas sistēmas, nevis vienu molekulāro mērķi.

Tomēr gēnu ekspresijas datu kopas prasa rūpīgu interpretāciju.

Informācijas RNS (mRNS) daudzuma izmaiņas ne vienmēr rada atbilstošas izmaiņas olbaltumvielas koncentrācijā vai bioloģiskajā funkcijā.

Gēnu ekspresijas raksturlielumi ir atkarīgi arī no šūnu tipa, ekspozīcijas apstākļiem, mērījumu metodēm un analītiskajiem sliekšņiem.

Tāpēc ar konkrētu savienojumu saistīto gēnu skaitu nevajadzētu uzskatīt par tā terapeitiskās iedarbības spēka tiešu mēru.

Datora prognozes ir vērtīgas hipotēžu formulēšanā, taču tām ir nepieciešams eksperimentāls apstiprinājums.

Gēnu tīkli, kas saistīti ar neiroprotekciju

Gēnu ekspresijas analīzes, kas apskatītas literatūrā par GHK, identificēja izmaiņas, kas ietver gēnus, kuri saistīti ar neironu darbību, šūnu izdzīvošanu un attīstības signālu pārraidi.

Piemēri ietver SIGMAR1, EPM2A, NAIP, FGFR2 un SLIT2 [65].

Šie gēni piedalās dažādos bioloģiskajos procesos.

Gēns SIGMAR1 kodē sigma-1 receptoru – olbaltumvielu, kas ir iesaistīta šūnu signālu pārraidē un ar stresu saistītos procesos.

EPM2A ir saistīts ar laforīnu – olbaltumvielu, kas ir svarīga glikogēna metabolismam.

NAIP piedalās šūnu izdzīvošanas un imūnās atbildes ceļos.

FGFR2 kodē receptoru, kas piedalās fibroblastu augšanas faktora signalizācijā.

SLIT2 piedalās attīstības procesos, kas saistīti ar šūnu virzīšanu un migrāciju.

Šo gēnu iesaistīšanās nervu sistēmas bioloģijā ir radījusi interesi par to iespējamo saistību ar GHK izraisītajām transkripcijas atbildes reakcijām.

Tomēr gēna klātbūtne ar GHK saistītajā datu kopā nepierāda, ka GHK tieši kontrolē šo gēnu katrā bioloģiskajā vidē.

Tas arī nepierāda, ka GHK novērš demenci vai uzlabo neiroloģiskās funkcijas.

Citētie pētījumi par daļu no šiem geniem sniedz plašāku bioloģisko kontekstu, nevis tiešus pierādījumus par GHK-Cu iedarbību.

Tāpēc šie rezultāti ir jāuztver kā novērojumi, kas kalpo par pamatu hipotēžu formulēšanai par gēnu regulāciju un neirobioloģiju.

Epigenētisko pētījumu un ar HDAC saistīto ceļu rezultāti

Epigenētiskā regulācija ietver gēnu aktivitātes izmaiņas, kurām nav nepieciešama pamata DNS secības modifikācija.

Viens no svarīgiem mehānismiem ir histonu modifikācija.

Histoni ir olbaltumvielas, ap kurām ir organizēta DNS. To ķīmiskās modifikācijas var ietekmēt noteiktu DNS reģionu pieejamību transkripcijas aparātam.

Histonu deacetilāzes (HDAC) noņem acetilgrupas no histoniem un citiem olbaltumvielu substrātiem.

Viņu aktivitāte var ietekmēt hromatīna struktūru un gēnu ekspresiju.

GHK tika apspriests saistībā ar HDAC saistītajiem ceļiem, ņemot vērā plašākus novērojumus par gēnu regulāciju un ar vecumu saistītām transkripcijas izmaiņām [66, 67].

Tomēr citētie pētījumi par HDAC un epigenētisko novecošanos galvenokārt sniedz vispārīgu informāciju par šiem bioloģiskajiem procesiem.

Tās pašas par sevi nepierāda, ka GHK-Cu ir klīniski apstiprināts HDAC inhibitors.

Tāpat gēnu ekspresijas modeļu izmaiņas nevajadzētu automātiski raksturot kā epigenētiskās novecošanas inversiju.

Tiešs apgalvojums par HDAC inhibīciju prasa eksperimentus, kas pierāda ietekmi uz šo enzīmu aktivitāti noteiktos apstākļos.

Apgalvojumi par novecošanās inversiju prasa papildu pierādījumus, kas saista molekulāros mērījumus ar nozīmīgiem bioloģiskiem rezultātiem.

Saistības starp GHK, ahromatīna regulāciju un ar novecošanu saistīto gēnu ekspresiju tātad joprojām ir turpmāku mehānisku pētījumu joma.

GHK-Cu materiālu kvalitāte un izpēte pētniecības nolūkiem

GHK-Cu analītiskais raksturojums ir svarīgs, jo pētījumu rezultāti ir atkarīgi no analizētā materiāla identitātes, sastāva un kvalitātes.

Preparāts, kas pazīstams kā GHK-Cu, ir jānovērtē ar metodēm, kas ļauj raksturot peptīda sastāvdaļu un sniegt pierādījumus par tā ar varu saistīto formu.

Kvalitātes pārbaude var ietvert hromatogrāfiju, masspektrometriju, metālu satura analīzi un papildu metodes, kas pielāgotas konkrētam analītiskajam mērķim.

Neviens atsevišķs ikdienas tests tomēr neapstiprina visus būtiskos kvalitātes parametrus.

Šķidruma hromatogrāfija savienota ar masu spektrometriju

Šķidruma hromatogrāfija savienojumā ar masu spektrometriju (LC-MS) apvieno hromatogrāfisko sadalīšanu ar detekciju, kuras pamatā ir jonu masas mērīšana.

Hromatogrāfiskā daļa nodrošina paraugā esošo savienojumu atdalīšanu.

Mass spektrometrs sniedz informāciju apie joniem, pamatojoties uz to masas un lādiņa attiecību.

LC-MS var atbalstīt peptīda identifikāciju, detektējot molekulāros jonus, kas atbilst sagaidāmajam savienojumam.

Atkarībā no izmantotās metodes papildu informācija par fragmentāciju var palīdzēt raksturot peptīdu secību.

Tomēr molekulmasas novērošana, kas atbilst GHK, viena pati neapstiprina visus molekulas struktūras aspektus.

Līdzīgi arī varš saistītās formas klātbūtnei atbilstošu signālu noteikšana nenozīmē pilnīgas koordinācijas ģeometrijas pierādījumu vai visu alternatīvo kompleksu izslēgšanu.

Var būt nepieciešami papildu pētījumi par varas saistīšanas raksturojumu, izmantojot piemērotas spektroskopiskās metodes vai metāla satura analīzi.

LC-MS ir tāpēc vērtīgs analītiskais rīks, taču iegūto secinājumu ticamība ir atkarīga no metodes, atsauces standartiem, parauga sagatavošanas un papildu pierādījumiem.

Augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfija un tīrība

Augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfija (HPLC) tiek plaši izmantota peptīdu preparātu komponenšu atdalīšanai.

Tas var palīdzēt identificēt piemaisījumus, kas saistīti ar sintēzi, degradāciju vai citiem ražošanas procesiem.

Hromatogrāfiskās tīrības rezultāts parasti balstās uz relatīvajiem signāliem, kas konstatēti noteiktos analītiskajos apstākļos.

Tomēr hromatogrāfiskā tīrība nav tas pats, kas ķīmiskā identitāte, peptīda saturs, vara kompleksa stehiometrija vai materiāla vispārējā kvalitāte.

Piemēram, deklarētā tīrība 98% līmenī nenozīmē, ka 98% no parauga kopējā svara veido pareizi izveidots GHK-Cu komplekss.

Interpretācija ir atkarīga no izmantotās analītiskās metodes un rezultāta aprēķināšanas veida.

Hromatogramm apstiprina arī sterilitāti, endotoksīnu saturu vai visu iespējamo piemaisījumu neesamību.

Avota materiālā ir norādīta deklarētā tīrības specifikācija, kas ir vismaz % noteiktiem pētījumu preparātiem.

Šāda specifikācija ir jāuzskata par piegādātāja deklarāciju, ja vien to neapstiprina pieejamā analītiskā dokumentācija attiecībā uz konkrēto partiju.

Filtrācija, sterilitāte un cieto daļiņu piesārņojuma kontrole

Avota materiāls apraksta filtrāciju caur membrānām ar 0,22 mikrometru poru izmēru kā materiāla sagatavošanas procesa elementu.

Membrānu filtrāciju var izmantot noteiktu mikrobioloģisko piesārņotāju ierobežošanai, ja izmantotā metode un apstākļi ir piemēroti.

Tomēr šķīduma izlaišana caur 0,22 mikrometru filtru viena pati neapstiprina galaprodukta sterilitāti.

Sterilitātes nodrošināšana ir atkarīga no visa procesa, tostarp iekārtām, vides, filtra integritātes, materiālu apstrādes un validētām kontroles procedūrām.

Filtrācijai nav arī jālikvidē endotoksīni, izšķīduši ķīmiskie netīrumi vai visu veidu cieto daļiņu piesārņojums.

Tāpēc apgalvojumi par sterilitāti vai piemērotību konkrētam pētnieciskajam lietojumam prasa atbilstošas pārbaudes un dokumentāciju, nevis paļaušanos tikai uz filtra poru izmēru.

Labas laboratorijas prakses un dokumentācija

Labas laboratorijas prakse (GLP) ir kvalitātes sistēma, kas saistīta ar noteiktu nekliņīcisko pētījumu organizēšanu, veikšanu, uzraudzību, dokumentēšanu un ziņošanu.

Paziņojums, ka procedūras atbilst GLP principiem, neobligāti nozīmē oficiālu atbilstību GLP prasībām vai attiecīga sertifikāta esamību.

Šādas deklarācijas nozīme ir atkarīga no konkrētajām procedūrām, dokumentācijas un izmantotās kvalitātes sistēmas.

Pētnieciskajiem materiāliem var pievienot arī analīzes sertifikātu (Certificate of Analysis, COA).

Sertifikāts parasti satur izvēlētos analīzes rezultātus attiecībā uz konkrētu partiju.

Svarīga informācija var ietvert identitātes pārbaudes, tīrības mērījumus, vielas satura noteikšanu, izmantotās analītiskās metodes, partijas identifikatorus un citus specifikācijas parametrus.

Tomēr COA informatīvā vērtība ir atkarīga no metodēm un datiem, kas ir tā izsniegšanas pamatā.

Pats sertifikāts vēl nepierāda, ka materiāls ir piemērots lietošanai cilvēkiem, kosmētiskam vai terapeitiskam nolūkam.

Līdzīgi analītiskā tīrība neapstiprina bioloģisko efektivitāti vai klīnisko drošumu.

Zinātniskajos pētījumos visnoderīgākajai kvalitatīvajai dokumentācijai ir jābūt detalizētai, identificējamai un pietiekami pilnīgai, lai nodrošinātu analītisko rezultātu pareizu interpretāciju.

Vairāk informācijas par ražotāju, piegādātāju, kvalitātes deklarāciju un partijas dokumentācijas atšķiršanu var atrast rakstā Peptīdu ražotāji un piegādātāji.

Kopsavilkums

GHK-Cu ir dabiski sastopams vara tripeptīda komplekss, kas pētīts vairāk nekā piecus gadu desmitus.

Tā molekulārā struktūra, vara saistīšanas īpašības un mijiedarbība ar šūnu sistēmām ir padarījusi to par nozīmīgu pētījumu objektu peptīdu bioķīmijā, ārpusšūnu matriksa bioloģijā, oksidatīvajā stresā un gēnu regulācijā.

Komplekss sastāv din glicil-L-histidil-L-lizīna un varis(II). Strukturālie pētījumi ļāva identificēt slāpekli saturošas koordinācijas vietas, kas piedalās vara saistīšanā un ietekmē molekulas ķīmiskās īpašības.

Šīs īpašības veido pamatu īso peptīdu mijiedarbības ar metālu joniem un koordinācijas ķīmijas ietekmes uz bioloģiskiem procesiem analizēšanai.

Eksperimentos pētījumos tika novērotas izmaiņas kolagēna sintēzē, glikozaminoglikānu veidošanā, matriksas metalloproteīnu ekspresijā, integrīnu signalizācijā, iekaisuma mediatoros un ar antioksidatīvo aizsardzību saistītajos parametros.

Papildu pētījumi ietvēra atbildes saistībā ar GHK fibroblastu kultūrās, brūču modeļos, plaušu bojājumu eksperimentos, neironu sistēmās un peptīdus saturošos biomateriālos.

Datoranalīzes arī saistīja GHK ar plašām gēnu ekspresijas tīkla izmaiņām.

Tomēr šo novērojumu zinātniskā nozīme ir atkarīga no eksperimentālā konteksta.

Gēnu ekspresijas izmaiņas neobligāti izraisa olbaltumvielu aktivitātes izmaiņas.

Palielināta kolagēna ražošana nenozīmē, ka audu struktūra uzlabojas.

Iekaisuma marķieru izmaiņas nav patstāvīgs klīnisks pierādījums pretiekaisuma iedarbībai.

Līdzīgi pētījumu rezultāti, kas ietver vēža šūnu līnijas, plaušu fibrozes modeļus vai neironu kultūras, nepierāda efektivitāti pret atbilstošām slimībām cilvēkiem.

Literatūrā pastāv arī būtiskas atšķirības starp GHK un GHK-Cu, kā arī starp eksperimentiem, kas tieši attiecas uz konkrēto savienojumu, un pētījumiem, kas sniedz tikai vispārēju bioloģisko kontekstu.

Šīs atšķirības ir jāņem vērā, interpretējot darbības mehānismus un piedāvātos pielietojumus.

Vēl viens svarīgs jautājums ir analītiskā kvalitāte. Tādas tehnikas kā LC-MS un HPLC var sniegt vērtīgu informāciju par identitāti un tīrību, taču tās pašas par sevi nepstiprina visas preparāta strukturālās, mikrobioloģiskās un bioloģiskās īpašības.

Kopumā GHK-Cu joprojām ir noderīgs instruments molekulārajos pētījumos par vara koordināciju, šūnu signālu pārnesi, ārpusšūnu matrikss metabolismu un atbildes reakciju uz oksidatīvo stresu.

Tā zināmās ķīmiskās īpašības un apjomīgā preklīniskā literatūra veido pamatu turpmākiem zinātniskiem pētījumiem. Savukārt apgalvojumi par klīnisko efektivitāti un drošumu prasa atsevišķus, attiecīgi kontrolētus pētījumus ar cilvēku līdzdalību.

Atruna

Šis raksts ir paredzēts tikai izglītojošiem un zinātniski informatīviem mērķiem. Tajā ir sniegti pētījumi par GHK-Cu molekulāro struktūru, vara koordināciju, bioloģiskajiem mehānismiem, analītisko raksturojumu un eksperimentālajiem lietojumiem.

Nav medicīnisks padoms, neiesaka GHK-Cu lietošanu cilvēkiem vai dzīvniekiem, nenoteic ārstēšanas shēmas un neatbalsta nekādus diagnostiskus, terapeitiskus vai kosmētiskus lietošanas veidus.

Rezultātus, kas iegūti šūnu kultūrās, eksperimentos ar dzīvniekiem, datoranalīzēs un bioķīmiskajos pētījumos, nevajadzētu interpretēt kā klīniskās efektivitātes vai drošuma pierādījumu cilvēkiem.

Informācija par analītisko tīrību, pētniecības klases materiāliem, analīzes sertifikātiem vai laboratorijas pētījumiem nepierāda, ka attiecīgais preparāts ir piemērots lietošanai cilvēkiem vai jebkādam citam ar normatīvajiem aktiem regulētam lietojumam.

Visus medicīniskos lēmumus vajadzētu pieņemt atbilstoši kvalificētiem veselības aprūpes darbiniekiem, pamatojoties uz atbilstošiem klīniskajiem pierādījumiem un spēkā esošajiem tiesību aktiem.

Atsauces

1. Pickart L. A Tripeptide from Human Serum Which Enhances the Growth of Neoplastic Hepatocytes and the Survival of Normal Hepatocytes. San Francisco, Calif, USA: University of California; 1973.
2. Pickart L., Freedman J. H., Loker W. J., et al. Growth-modulating plasma tripeptide may function by facilitating copper uptake into cells. Nature. 1980;288(5792):715–717. doi: 10.1038/288715a0.
3. Pickart L. GHL-Cu lietošana kā brūču dzīšanas un pretiekaisuma līdzeklis. 1988, http://www.freepatentsonline.com/4760051.html.
4. Downey D., Larrabee W. F., Jr., Voci V., Pickart L. Brūču dzīšanas paātrināšana, izmantojot glicil-histidil-lizina varu (II) Surgical Forum. 1985;25:573–575.
5. Pickart L. Iamin: a human growth factor with multiple wound-healing properties. In: Sorenson J., editor. Biology of Copper Complexes. Clifton, NJ, USA: Humana Press; 1987. pp. 273–285.
6. Meiners S., Eickelberg O. Next-generation personalized drug discovery: the tripeptide GHK hits center stage in chronic obstructive pulmonary disease. Genome Medicine. 2012;4(8, article 70) doi: 10.1186/gm371.
7. Hong Y., Downey T., Eu K. W., Koh P. K., Cheah P. Y. A ‘metastasis-prone’ signature for early-stage mismatch-repair proficient sporadic colorectal cancer patients and its implications for possible therapeutics. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
8. Gruchlik A., Jurzak M., Chodurek E. W. A., Dzierzewicz Z. Gly-Gly-His, Gly-His-Lys un to vara kompleksu ietekme uz TNF-α atkarīgu IL-6 sekrēciju normālos cilvēka dermas fibroblastos. Acta Poloniae Pharmaceutica. 2012;69(6):1303–1306.
9. Pickart L., Vaskesa-Soltero J. M., Margolina A. GHK un DNS: cilvēka genoma atiestatīšana uz veselību. BioMed Research International. 2014;2014:10. doi: 10.1155/2014/151479.151479
10. Wegrowski Y., Maquart F. X., Borel J. P. Sulfatētu glikozaminoglikānu sintēzes stimulēšana ar tripeptīda-vara kompleksu Glicil-L-histidil-L-lizīns-Cu2+ . Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
11. Siméon A., Emonard H., Hornebeck W., Maquart F.-X. Tripeptīda-vara kompleksa glicil-L-histidil-L-lizīna-Cu2+ ietekme uz matriksa metalloproteināzes-2 ekspresiju fibroblastu kultūrās. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
12. Ehrlich H. Ādas dzīšanas stimulēšana imūnsupresētām žurkām. Proceedings of the Symposium on Collagen and Skin Repair; September 1991; Reims, France.
13. Siméon A., Wegrowski Y., Bontemps Y., Maquart F.-X. Glikozaminoglikānu un mazo proteoglikānu ekspresija brūcēs: tripeptīda-vara kompleksa glicil-L-histidil-L-lizīna-Cu2+ modulācija. Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
14. Makormaka M. K., Novaka K. K., Kohs R. Dž. Vara tripeptīda un tretinoīna ietekme uz augšanas faktoru veidošanos fibroblastu modelī bez seruma. Archives of Facial Plastic Surgery. 2001;3(1):28–32.
15. Buffoni F., Pino R., Dal Pozzo A. Tripeptīdu-vara kompleksu ietekme uz ādas brūču dzīšanas procesu un kultivētiem fibroblastiem. Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie. 1995;330(3):345–360.
16. Guls N. J., Topals A., Canguls I. T., Janiks K. Vietēji lietota vara tripeptīdu kompleksa un hēlija-neona lāzera ietekme uz brūču dzīšanu trušiem. Veterinārā dermatoloģija. 2008;19(1):7–14. doi: 10.1111/j.1365-3164.2007.00647.x.
17. Cangul I. T., Gul N. Y., Topal A., Yilmaz R. Vietēji lietojama tripeptīdu-vara kompleksa un cinka oksīda ietekmes uz vaļēju brūču dzīšanu trušiem novērtējums. Veterinary Dermatology. 2006;17(6):417–423. doi: 10.1111/j.1365-3164.2006.00551.x.
18. Pickart L. Vara(II) saturošu savienojumu izmantošanas metode brūču dzīšanas paātrināšanai. 1992, http://www.freepatentsonline.com/5164367.html.
19. Arul V., Kartha R., Jayakumar R. A therapeutic approach for diabetic wound healing using biotinylated GHK incorporated collagen matrices. Life Sciences. 2007;80(4):275–284. doi: 10.1016/j.lfs.2006.09.018.
20. Canapp S. O., Jr., Farese J. P., Schultz G. S., et al. The effect of topical tripeptide-copper complex on healing of ischemic open wounds. Veterinary Surgery. 2003;32(6):515–523. doi: 10.1111/j.1532-950X.2003.00515.x.
21. Swaim S. F., Vaughn D. M., Kincaid S. A. et al. Effect of locally injected medications on healing of pad wounds in dogs. American Journal of Veterinary Research. 1996;57(3):394–399.
22. Campbell J. D., McDonough J. E., Zeskind J. E., et al. Emfizēmas izraisītas plaušu destrukcijas gēnu ekspresijas signatūra un tās reversija ar tripeptīdu GHK. Genome Medicine. 2012;4, 67. raksts doi: 10.1186/gm367.
23. Boo S., Dagnino L. Integrīni kā transformējošā augšanas faktora beta signālpārneses modulatori dermalajos fibroblastos ādas reģenerācijas laikā pēc traumas. Advances in Wound Care. 2013;2(5):238–246. doi: 10.1089/wound.2012.0394.
24. Lubick K., Radke M., Jutila M. Sekurinīns, GABAA receptoru antagonists, uzlabo makrofāgu veiktu II fāzes C. burnetii likvidēšanu: salīdzinājums ar TLR agonistiem. Journal of Leukocyte Biology. 2007;82(5):1062–1069. doi: 10.1189/jlb.0407255.
25. Matalka L. E., Ford A., Unlap M. T. Tripeptīds GHK ierosina programmētu šūnu nāvi SH-SY5Y neiroblastomas šūnās. Journal of Biotechnology & Biomaterials. 2012;2, 144. raksts doi: 10.4172/2155-952X.1000144.
26. Pollards Dž. D., Kvans S., Kangs T., Kohs R. Dž. Vara tripeptīda ietekme uz normālu un apstarotu fibroblastu augšanu un augšanas faktoru ekspresiju. Žurnāls "Archives of Facial Plastic Surgery". 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
27. Jose S., Hughbanks M. L., Binder B. Y. K., Ingavle G. C., Leach J. K. Enhanced trophic factor secretion by mesenchymal stem/stromal cells with Glycine-Histidine-Lysine (GHK)-modified alginate hydrogels. Acta Biomaterialia. 2014;10(5):1955–1964. doi: 10.1016/j.actbio.2014.01.020.
28. Lau S. J., Sarkar B. Vara(II) un glicil-L-histidil-L-lizīna, no plazmas izolēta augšanu modulējoša tripeptīda, mijiedarbība. Biochemical Journal. 1981;199(3):649–656. doi: 10.1042/bj1990649.
29. Perkins C. M., Rose N. J., Weinstein B., Stenkamp R. E., Jensen L. H., Pickart L. The structure of a copper complex of the growth factor glycyl-L-histidyl-L-lysine at 1.1 Å resolution. Inorganica Chimica Acta. 1984;82(1):93–99. doi: 10.1016/s0020-1693(00)82544-x.
30. Freedman J. H., Pickart L., Weinstein B., Mims W. B., Peisach J. Glicil-L-histidil-L-lizīna-vara(II) kompleksa struktūra šķīdumā. Biochemistry. 1982;21(19):4540–4544. doi: 10.1021/bi00262a004.
31. Pickart L., Lovejoy S. Cilvēka plazmas vara saistošā augšanas faktora glicil-l-histidil-l-lizīna bioloģiskā aktivitāte. Methods in Enzymology. 1987;147:314–328. doi: 10.1016/0076-6879(87)47121-8.
32. Beretta G., Arlandini E., Artali R., Anton J. M. G., Maffei Facino R. Acrolein sequestering ability of the endogenous tripeptide glycyl-histidyl-lysine (GHK): characterization of conjugation products by ESI-MSn and theoretical calculations. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
33. Godet D., Marie P. J. Tripeptīda glicil-L-histidil-L-lizīna vara kompleksa ietekme uz osteoblastu šūnu izplatīšanos, piesaistīšanos un fenotipu. Cellular and Molecular Biology (Noisy-le-Grand, France) 1995;41(8):1081–1091.
34. Kawase M., Miura N., Kurikawa N., u.c. Tripeptīda augšanas faktora glicil-L-histidil-L-lizīna imobilizācija uz poli(vinilspirta)-kvaternizēta stilbazola (PVA-SbQ) un tā izmantošana kā ligands hepatocītu piesaistīšanai. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 1999;22(9):999–1001. doi: 10.1248/bpb.22.999.
35. Lutsenko S, Bhattacharjee A, Hubbard AL. Copper handling machinery of the brain. Metallomics. 2010;2(9):596–608. doi: 10.1039/c0mt00006j.
36. Hawk SN, Lanoue L, Keen CL, Kwik-Uribe CL, Rucker RB, Uriu-Adams JY. Copper-deficient rat embryos are characterized by low superoxide dismutase activity and elevated superoxide anions. Biology of Reproduction. 2003;68(3):896–903. doi: 10.1095/biolreprod.102.009167.
37. Bayer TA, Schäfer S, Simons A, et al. Dietary Cu stabilizes brain superoxide dismutase 1 activity and reduces amyloid Aβ production in APP23 transgenic mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2003;100(24):14187–14192. doi: 10.1073/pnas.2332818100.
38. Arul V, Gopinath D, Gomathi K, Jayakumar R. GHK peptīdu saturoša kolagēna matrica: jauns biomateriāls dermālo brūču dzīšanai žurkām. Journal of Biomedical Materials Research. 2005;73(2):383–391. doi: 10.1002/jbm.b.30246.
39. Miller DM, DeSilva D, Pickart L, Aust SD. Effects of glycyl-histidyl-lysyl chelated Cu(II) on ferritin dependent lipid peroxidation. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1990;264:79–84. doi: 10.1007/978-1-4684-5730-8_11.
40. Alberghina M, Lupo G, La Spina G, et al. Varu(II) kompleksu citoprotektīvā iedarbība pret etanola izraisītiem žurku kuņģa gļotādas bojājumiem. Journal of Inorganic Biochemistry. 1992;45(4):245–259. doi: 10.1016/0162-0134(92)84013-d.
41. Beretta G, Artali R, Regazzoni L, Panigati M, Facino RM. Glicil-histidil-lizīns (GHK) ir α,β-4-hidroksi-trans-2-nonenāla saistītājs: salīdzinājums ar karnozīnu. Ieskats reakcijas mehānismā, izmantojot elektrosmidzināšanas jonizācijas masspektrometriju, 1H kodolu magnētisko rezonansi un skaitļošanas metodes. Chemical Research in Toxicology. 2007;20(9):1309–1314. doi: 10.1021/tx700185s.
42. Beretta G, Arlandini E, Artali R, Anton JM, Maffei Facino R. Acrolein sequestering ability of the endogenous tripeptide glycyl-histidyl-lysine (GHK): characterization of conjugation products by ESI-MSn and theoretical calculations. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
43. Park JR, Lee H, Kim SI, et al. Tripeptīda GHK-Cu komplekss mazina lipopolisaharīdu izraisītu akūtu plaušu bojājumu pelēm. Oncotarget, 2016, 7(36): 58405.
44. Gao M, Chen L, Yu H et al. Diosgenin down-regulates NF-κB p65/p50 and p38MAPK pathways and attenuates acute lung injury induced by lipopolysaccharide in mice. International immunopharmacology, 2013, 15(2): 240–245.
45. Liu T, Zhang L, Joo D, et al. NF-κB signalizācija iekaisuma procesos. Signal transduction and targeted therapy, 2017, 2(1): 1–9.
46. Kaminska B. MAPK signālceļi kā pretiekaisuma terapijas molekulārie mērķi – no molekulārajiem mehānismiem līdz terapeitiskajiem ieguvumiem. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Proteins and Proteomics, 2005, 1754(1–2): 253–262.
47. Yong HY, Koh MS, Moon A. p38 MAPK inhibitori iekaisuma slimību un vēža ārstēšanai. Expert opinion on investigational drugs, 2009, 18(12): 1893–1905.
48. Zhou XM, Wang GL, Wang XB u.c. GHK peptīds kavē bleomicīna izraisītu plaušu fibrozi pelēm, nomācot TGFβ1/Smad mediēto epitēlija-mesenhimalo pāreju. Frontiers in Pharmacology, 2017, 8: 904.
49. Mukherjee K, Lee A, Zhu L, et al. Sleep-deprived cognitive impairment in aging mice is alleviated by rapamycin. Aging Pathobiology and Therapeutics, 2019, 1(1): 05–09.
50. Kalaria RN. Vascular basis for brain degeneration: Faltering controls and risk factors for dementia. Nutrition Reviews. 2010;68(supplement 2):S74–S87. doi: 10.1111/j.1753-4887.2010.00352.x.
51. Pollard JD, Quan S, Kang T, Koch RJ. Effects of copper tripeptide on the growth and expression of growth factors by normal and irradiated fibroblasts. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
52. Sensenbrenner M, Jaros GG, Moonen G, Meyer BJ. Effect of conditioned media on nerve cell differentiation. Experientia. 1980;36(6):660–662. doi: 10.1007/BF01970123.
53. Lindner G, Grosse G, Halle W, Henklein P. Sintētiska tripeptīda ietekme uz in vitro kultivētiem nervu audiem. Zeitschrift für Mikroskopisch-Anatomische Forschung. 1979;93(5):820–828. (Vācu val.).
54. Ahmed MR, Basha SH, Gopinath D, Muthusamy R, Jayakumar R. Initial upregulation of growth factors and inflammatory mediators during nerve regeneration in the presence of cell adhesive peptide-incorporated collagen tubes. Journal of the Peripheral Nervous System. 2005;10(1):17–30. doi: 10.1111/j.1085-9489.2005.10105.x.
55. Pickart L. GHL-Cu lietošana kā brūču dzīšanas un pretiekaisuma līdzeklis. Amerikas Savienoto Valstu patents 4,760,051, 1988. gada jūlijs.
56. Downey D, Larrabee WF, Voci V, Pickart L. Brūču dzīšanas paātrināšana, izmantojot glicil-histidil-lizil Cu(II). Surgical Forum. 1985;36:573–575.
57. Maquart FX, Pickart L, Laurent M, Gillery P, Monboisse JC, Borel JP. Kolagēna sintēzes stimulēšana fibroblastu kultūrās ar tripeptīda-vara kompleksu glicil-L-histidil-L-lizīnu-Cu2+ . FEBS Letters. 1988;238(2):343–346. doi: 10.1016/0014-5793(88)80509-x.
58. Wegrowski Y, Maquart FX, Borel JP. Sulfatētu glikozaminoglikānu sintēzes stimulēšana ar tripeptīda-vara kompleksu glicil-L-histidil-L-lizīns-Cu2+ . Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
59. Siméon A, Emonard H, Hornebeck W, Maquart FX. Tripeptīda-vara komplekss glicil-L-histidil-L-lizīns-Cu2+ stimulē matriksa metalloproteināzes-2 ekspresiju fibroblastu kultūrās. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
60. Siméon A, Vegrovskis Y, Bontemps Y, Makarts FX. Glikozaminoglikānu un mazo proteoglikānu ekspresija brūcēs: tripeptīda-vara kompleksa glicil-L-histidil-L-lizīna-Cu2+ modulācija. Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
61. Kang YA, Choi HR, Na JI u. c. Vara GHK palielina integrīna ekspresiju un p63 pozitivitāti keratinocītos. Archives of Dermatological Research. 2009;301(4):301–306. doi: 10.1007/s00403-009-0942-x.
62. Lamb J. The Connectivity Map: a new tool for biomedical research. Nature Reviews Cancer. 2007;7(1):54–60. doi: 10.1038/nrc2044.
63. Iorio F, Bosotti R, Scacheri E, et al. Discovery of drug mode of action and drug repositioning from transcriptional responses. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2010;107(33):14621–14626. doi: 10.1073/pnas.1000138107.
64. Hong Y, Downey T, Eu KW, Koh PK, Cheah PY. Metastāzēm labvēlīgs paraksts agrīnas stadijas DNS neatbilstības labošanas ziņā kompetentiem sporādiska kolorektālā vēža pacientiem un tā nozīme iespējamajā terapijā. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
65. Huang P, Kishida S, Cao D, et al. Neirodonālais diferenciācijas faktors neuroD1 samazina neironu atgrūšanas faktora Slit2 ekspresiju un veicina neiroblastomas šūnu kustīgumu un audzēja veidošanos. Cancer Research. 2011;71(8):2938–2948. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-10-3524.
66. Fischer A, Sananbenesi F, Mungenast A, Tsai LH. Targeting the correct HDAC(s) to treat cognitive disorders. Trends in Pharmacological Sciences. 2010;31(12):605–617. doi: 10.1016/j.tips.2010.09.003.
67. Koch CM, Wagner W. Epigenetic-aging-signature to determine age in different tissues. Aging. 2011;3(10):1018–1027. doi: 10.18632/aging.100395.