Peptidul GHK-Cu: structura moleculară, mecanismele de acțiune și aplicațiile în cercetarea științifică

GHK-Cu este un complex de tripeptida natural cu cuprul, care atrage interesul cercetătorilor datorită rolului său în comunicarea celulară, reglarea matricei extracelulare și în procesele biologice legate de menținerea și repararea țesuturilor. De la identificarea sa în 1973 de către Lorena Pickart, cercetătorii analizează structura moleculară a acestuia, capacitatea de legare a cuprului, impactul asupra expresiei genelor și interacțiunea cu căile celulare implicate în procesele inflamatorii, stresul oxidativ și remodelarea țesuturilor.

Acest legament a fost identificat pentru prima dată în timpul studiilor privind componentele serului uman și impactul acestora asupra sintezei proteinelor în celule. Pickart a observat că un factor derivat din ser poate influența funcționarea celulelor hepatice în vârstă, stimulând tipurile specifice de sinteza proteinelor caracteristice celulelor mai tinere [1]. Studiile ulterioare au permis identificarea tripeptidului glicil-L-histidin-L-lizină (GHK) și analiza capacității acestuia de a forma un complex stabil cu ioni de cupru (Cu²⁺) de valoare dublă.

GHK este formată din trei aminoacizi: glicină, histidină și lizină. După legarea de ionul de cupru (II), formează un complex cunoscut în mod obișnuit sub numele de GHK-Cu sau peptida de cupru GHK.

Acest peptide a fost detectat în fluidele biologice umane, inclusiv în plasma, saliva și urina. Conform datelor publicate, concentrația sa în plasma scade odată cu vârsta – de aproximativ 200 ng/ml la vârsta de 20 de ani până la aproximativ 80 ng/ml la vârsta de 60 de ani [2–9]. Aceste observații au contribuit la dezvoltarea cercetărilor privind legăturile dintre GHK, modificările celulare asociate cu îmbătrânirea și reglarea proceselor țesutale.

În studiile experimentale s-a demonstrat că GHK-Cu poate influența sinteza colagenului, remodelarea matricei extracelulare, semnalizarea angiogenetică și activitatea enzimelor antioxidante. În studiile pe fibroblastii în cultură și modelele animale, s-a analizat, de asemenea, impactul său asupra mediatorilor inflamatorii, migrației celulare și a tiparelor de expresie a genelor asociate cu remodelarea țesuturilor.

Unele analize au legat GHK de modificări ale peste 4000 de gene, ceea ce sugerează că activitatea sa biologică poate implica mai multe căi celulare interconectate [9].

Modificările expresiei genelor nu înseamnă însă automat o îmbunătățire a funcționării țesuturilor sau rezultate clinice favorabile. Multe observații provin din culturi celulare, analize computerizate sau experimente pe animale.

GHK-Cu rămâne, prin urmare, un subiect important de studiu molecular și preclinic, în special în ceea ce privește coordonarea cu cuprul, biologia matricei extracelulare, stresul oxidativ și răspunsul celulelor la leziuni.

Ce este GHK-Cu?

GHK-Cu este un complex coordonator care se formează atunci când tripeptida glicil-L-histidinil-L-lizina se leagă de ionul de cupru(II). Capacitatea de coordonare a cupru constituie una dintre proprietățile moleculare care îl distinge de multe alte peptide scurte [1, 2].

Cărbunele este un element minor esențial care participă la numeroase procese biologice. Sprijină activitatea enzimelor, producția de energie mitocondrială, protecția anti-oxidantă și formarea și menținerea țesuturilor conjunctive.

În același timp, economia cuprinsă de cuprul trebuie să fie supusă unei reglementări stricte, deoarece cuprul neconectat sau necontrolat în mod adecvat poate participa la reacții care conduc la formarea de forme reactive de oxigen.

GHK creează un mediu molecular care permite legarea cuprului și influențează proprietățile sale chimice. Datorită acestei interacțiuni, GHK-Cu a devenit un model de cercetare util pentru analiza rolului peptidelor mici în coordonarea metalelor și în semnalizarea celulară.

Investigațiile timpurii s-au axat pe impactul său asupra fibroblastei, adică a celulelor responsabile cu producerea și menținerea multor componente ale țesutului conjunctiv.

Fibroblastele sintetizează colagenul, componentele asociate cu elastina, glicozaminoglicanii și alte molecule ale matricei extracelulare. Aceste substanțe sunt responsabile de proprietățile mecanice, organizarea și stabilitatea structurală a țesuturilor.

Investigațiile efectuate de Borela, Maquart și colaboratorii săi au demonstrat că GHK-Cu poate influența metabolismul membranei extracelulare în culturile de fibroblaste chiar și la concentrații de aproximativ 1–10 nanomoli pe litru (nM) [10–13].

Efectele observate au inclus modificări în producția și degradarea colagenului, a glicozaminoglicanelor sulfatate și a micilor proteoglicanuri, precum decurina.

Importanța acestui aspect este că menținerea matricei extracelulare necesită mai mult decât creșterea producției de proteine structurale.

Reconstrucția normală a țesuturilor se bazează pe sinteza, modificarea și distrugerea coordonată a componentelor materne.

Metoproteinazele matricei (MMP) participă la degradarea matricei extracelulare, în timp ce inhibitoarele de metaloproteinaze (TIMP) din țesut ajută la reglarea activității acestora.

În studiile experimentale s-a observat că GHK-Cu influențează activitatea MMP și expresia inhibitorilor, precum TIMP-1 și TIMP-2 [11, 12].

Aceste observații sugerează o asociere între expunerea la GHK-Cu și modificările componentelor materne. Cu toate acestea, acestea nu demonstrează că această asociere provoacă în mod consecvent o remodelare pozitivă a țesuturilor la oameni.

În studii preclinice adiționale, GHK-Cu a fost analizată în modele de rană, inclusiv în experimente privind contractura ranelor, integrarea transplanturilor, semnalizarea inflamatorie și migrarea celulelor [3–5].

Alte studii au abordat reacțiile fibroblastelor la leziunile legate de radiații. S-au observat modificări ale creșterii și viabilității celulelor, precum și expresia factorilor de creștere [14].

În experimente s-au analizat, de asemenea, interacțiunile care implică celulele imunitare și celulele endoteliale, care participă la răspunsul tisular la leziuni [15].

Studii pe animale au evidențiat modificări ale activității antioxidante și ale parametrilor legat de rănile provocate de expunerea la GHK-Cu sau la materiale care conțin peptidele conexe [16–21].

Aceste rezultate au sporit interesul pentru GHK-Cu ca instrument de cercetare pentru analiza procesului de îmbătrânire celulară, a reglării matricei extracelulare și a răspunsului țesuturilor la leziunile oxidative și mecanice.

Cu toate acestea, observatiile privind inchiderea ranilor, comportamentul fibroblastilor sau semnalizarea moleculara in modelele experimentale nu trebuie interpretate ca dovada eficacitatii terapeutice la om.

Mecanismul de acțiune al GHK-Cu: rezultatele studiilor in vitro și in vivo

Mezaniile biologice asociate cu GHK-Cu includ mai multe căi interconectate, și nu un singur obiectiv molecular definit în mod clar.

În studiile experimentale, s-a analizat impactul său asupra expresiei genelor, a semnalizării factorilor de creștere, a metabolismului matricei extracelulare, a răspunsului la stres oxidativ, a căilor inflamatorii și a interacțiunilor celulelor cu țesuturile care le înconjoară.

Aceste mecanisme au fost studiate utilizând culturi celulare, modele animale și analize computerizate.

Exprimarea genelor și remodelarea țesutului pulmonar

Unul dintre domeniile importante de cercetare este legătura dintre GHK și modelele de expresie a genelor asociate cu boala pulmonară obstructivă cronică (BPOC).

Într-un studiu multicentric, în care au participat cercetători de la Boston University, University of Groningen, University of British Columbia și University of Pennsylvania, au fost analizate semnele de expresie a genelor asociate cu distrugerea țesutului pulmonar în cadrul sindromului de embolie pulmonară [22].

A fost identificată o grupă de 127 de gene asociate cu bronșita și s-a examinat dacă GHK poate influența tiparele de transcriere anormale.

Cercetătorii au observat că expunerea la GHK a fost asociată cu modificări ale sintezei factorului de creștere transformant beta (TGF-β).

TGF-β este un regulator important al diferențierei celulare, al producției de matrice extracelulară, al remodelării țesuturilor și al fibrozei.

Acțiunea sa depinde de contextul biologic. Deși TGF-β participă la menținerea normală a țesuturilor, semnalizarea perturbată poate, de asemenea, contribui la acumularea patologică a componentelor matricei și la dezvoltarea fibrozei.

În experimentele de laborator efectuate folosind fibroblaste pulmonare prelevate de la pacienți cu POChP, expunerea la GHK a fost asociată cu o îmbunătățire a capacității de contracție și reorganizare a colagenului.

Cercetătorii au observat, de asemenea, o exprimare crescută a integrinei β1, ceea ce sugerează o posibilă implicare a interacțiunilor celulare dependente de integrine [22, 23].

Integrinele sunt proteine care ajută celulele să interacționeze cu matricea extracelulară care le înconjoară. Ele participă la adhezia și migrarea celulelor, la transmiterea semnalelor mecanice și la organizarea țesuturilor.

Aceste observații sugerează că GHK poate influența legăturile dintre semnalizarea TGF-β, expresia integrinelor și reglarea matricei extracelulare.

Experimentele nu arată însă că GHK-Cu inversează evoluția BPOC sau restabilește funcția pulmonară la pacienți.

Rezultatele se refera la modelele de exprimare a genelor și comportamentul celulelor în condiții experimentale.

Exprimarea genelor asociate cu cancerul și proliferarea celulelor

GHK a fost analizat și în studii privind rețelele genetice asociate cu cancerul.

Hong și colaboratorii săi au studiat modelele de expresie a genelor asociate cu progresia cancerului de colon și cu potențialul său de metastază [7, 24].

Interpretările ulterioare ale acestor date au legat GHK de scăderea expresiei a aproximativ 70% de gene selectate asociate cu metastazele.

În acest context, au fost discutate, printre altele, genele MAP3K5, LMNA, APP și NFATC2.

Aceste gene participă la diverse procese biologice, care includ semnalizarea intracelulară, organizarea nucleului celular, reglarea celulelor și răspunsurile transcripționale.

Însă modificările în expresia genelor asociate cu metastazele nu trebuie confundate cu prevenirea demonstrată a acestora.

Semnăturile expresiei genelor pot ajuta la identificarea căilor asociate cu evoluția bolii, dar modificarea lor nu constituie o dovadă independentă clinică a efectului anticancerigen.

În alte studii de laborator s-a analizat expunerea la GHK în cadrul unor linii de celule tumorale umane.

În unele dintre experimentele care au inclus modele de neuroblastom și cancer mamar, s-au observat modificări ale apoptozei și proliferării celulelor la concentrații nanomolare [25].

Apoptoza este o formă reglementată de moarte celulară, care participă la dezvoltarea țesuturilor și la menținerea homeostaziei celulare.

Disfuncțiile de apoptoză sunt importante în biologia tumorilor, deoarece celulele maligne pot dezvolta mecanisme care le permit să evite semnalele normale care conduc la moartea celulară.

Observarea apoptozei în culturile de celule tumorale nu demonstrează, însă, un efect selectiv anticancerigen în organismul uman.

Linia celulară diferă de tumorile reale în ceea ce privește arhitectura, metabolismul, micro-mediul, interacțiunea cu sistemul imunitar și condițiile de expunere.

Prin urmare, aceste rezultate rămân importante pentru studiile privind mecanismele de dezvoltare a tumorilor, și nu pentru aplicările confirmate în oncologia clinică.

Activitatea fibroblastelor și remodelarea matricei extracelulare

Analizele fibroblastelor constituie un alt element important al literaturii științifice privind GHK-Cu.

După expunerea la complexele de tripeptidi de cupru, s-au observat modificări în producția de colagen, degradarea matricei și expresia factorilor de creștere [9, 26].

Sinteza colagenului este doar unul dintre elementele reglementării matricei extracelulare.

Pentru a menține structura normală a țesuturilor, matricea trebuie, de asemenea, să fie supusă unei degradări și unei reorganizări controlate.

GHK-Cu a fost asociat cu modificări ale activității metaloproteinazelor materne și cu expresia TIMP-1 și TIMP-2.

Aceste rezultate sugerează că acest compus poate influența atât producția, cât și descompunerea ingredientelor materne.

Direcția și importanța acestor schimbări depind de modelul experimental și de condițiile biologice din jurul acestuia.

În modelele în care au fost expuși fibroblastii, cercetătorii au analizat dacă tripeptidii de cupru influențează creșterea celulelor și expresia factorilor de creștere după expunerea la radiație [26].

În analizele privind expresia genelor descrise în literatură s-au observat, de asemenea, modificări în căile implicate în repararea ADN-ului. Acestea au inclus 47 de gene cu o expresie crescută și cinci gene ale căror expresie a scăzut cu cel puțin 50% [9, 26].

Aceste rezultate indică modificări ale răspunsului transcripțional al celulelor.

Nu însă ele însele demonstrează o reparare completă a ADN-ului, o inversare a procesului de îmbătrânire celulară sau refacerea funcționării normale a țesuturilor.

Angiogenizarea și factorii de creștere

GHK-Cu a fost studiat și în contextul angiogenezei, procesul de formare a noilor vase de sânge din structurile vasculare deja existente.

Angiogeneza participă la dezvoltarea țesuturilor, la răspunsul la leziuni și la menținerea rețelei de vase de sânge.

În studiile experimentale s-a analizat relația dintre materialele care conțin GHK și factori precum VEGF și bFGF [27].

VEGF participă la semnalizarea celulelor endoteliale și la dezvoltarea vaselor de sânge.

FGF bazic participă la proliferarea și diferențierea celulelor, precum și la răspunsul tisular care include celulele vasculare și țesutul conjunctiv.

În unele studii s-a observat o creștere a expresiei sau a secreției acestor factori după expunerea la materialele conținând GHK.

Ca element posibil al acestor efecte, a fost discutată și semnalizarea dependentă de integritate.

Modificările expresiei VEGF sau bFGF nu demonstrează, însă, apariția unor vase de sânge funcționale.

Angiogeneza corectă include mai multe etape, inclusiv migrarea celulelor endoteliale, formarea vaselor, stabilizarea acestora și integrarea în sistemul circulator existent.

Rezultatele disponibile oferă astfel dovezi mecanistice importante pentru studiile vasculare, dar nu confirmă beneficiile clinice asociate cu funcționarea vaselor.

Structura și biochimia GHK-Cu

Structura moleculară a GHK-Cu a fost studiată utilizând diverse tehnici analitice și spectrometrice.

Acestea au inclus cristalografia cu raze X, rezonanța magnetică paramagnetică electronică (EPR), spectroscopia de absorbanță a radiației X, rezonanța magnetică protonică și metodele de măsurare chimică [28–30].

Aceste metode au ajutat la caracterizarea mediului de coordonare a cuprului în cadrul complexului peptidic.

Coordonarea metalului și geometria moleculară

GHK este formată din trei aminoacizi legați în secvența glicină–histidină–lizină.

Restul histidinelor este deosebit de important deoarece grupul său imidazolic poate participa la coordonarea ionilor metalici.

Analizele structurale indică faptul că cupru(II) poate forma legături coordonante cu trei atomi de azot care îndeplinesc funcția de donatori de electroni în moleculele de peptidă.

Printre acestea se numără atomul de azot al grupului amino glicină, atomul de azot dehidrogenat al amidului legat de legarea glicină–histidină și atomul de azot al grupului imidazolic al histidinei [28–30].

A patra poziție coordonatorie poate fi ocupată de o altă grupă de donatori, în funcție de mediul chimic.

Acest sistem este adesea descris ca geometrie quadrangulară-planară sau apropiată de aceasta.

Geometria exactă poate depinde de pH, condițiile solventului, prezența ligandilor suplimentari și forma studiata a complexului.

Coordonarea cu metalul de fier influențează proprietățile chimice ale GHK-Cu și diferențiază acest complex de peptidul GHK neîntregit.

Dependența structurală dintre peptid și cupru este importantă, deoarece legarea metalului poate modifica reactivitatea moleculei și interacțiunile acesteia cu alte compuși biologici.

Discutie: structura moleculara a complexului GHK-Cu

Structura moleculară a GHK-Cu arată modul în care peptidul glicină-histidină-lizină furnizează locurile coordonatoare care conțin azot, permițând legarea de cupru(II).

În studiile structurale și spectroscopice, azotul grupului aminoacidic, azotul amidic al legăturilor peptoidice și azotul din lanțul imidazolic al histidinei au fost identificate ca elemente importante care participă la legarea cuprului.

Mediul de coordonare ajută la explicarea motivului pentru care GHK este studiat ca un peptid care leagă cuprul, precum și modelul de interacțiune dintre metale și peptide.

Interacțiunea cu albumina și alte molecule care leagă cuprul

La pH fiziologic GHK-Cu poate participa la diverse echilibruri coordonante, cu participarea a suplimentari liganduri.

Lau și Sarkar au studiat interacțiunile dintre cupru(II), GHK, moleculele care conțin histidină și albumina serului [28–30].

Albumina sângelui este o proteină care se găsește în cantități mari în plasmă. Participă la transportul și legarea a numeroase substanțe, inclusiv a ionilor metalici selectați.

În literatură s-a descris o legare puternică atât a GHK, cât și a albumenelor pentru legarea cu cuprul. În condițiile studiate, s-au obținut valori de aproximativ log₁₀ 16,44 pentru GHK și log₁₀ 16,2 pentru albumina.

Aceste valori sugerează că GHK poate participa la interacțiuni competitive legate de legarea cu cuprul.

Cu toate acestea, distribuția cuprului în lichidele biologice depinde de mai mult decât doar de forța de legare dintre două molecule izolate.

La disponibilitate a cuprului au un impact și concentrațiile diferitelor substanțe concurente, leganții, interacțiunile proteice și sistemele de transport celulare.

Capacitatea GHK de a lega cuprul constituie astfel baza cercetărilor privind transferul metalelor și echilibrul coordonator.

Nu demonstrează însă că GHK-Cu furnizează în mod sigur cuprul în toate țările sau că previne toate reacțiile oxidative asociate cu cuprul.

Enzimele dependente de cupru și reglarea proceselor redox

Medaulul este necesar pentru activitatea multor enzime importante.

Lizozima oxidază participă la formarea legăturilor transversale între proteinele colagenului și elastinei.

Dismutaza de cupru-zinc superoxidază, cunoscută în mod obișnuit sub numele de SOD1, sprijină protecția anti-oxidantă prin catalizarea transformării radicalilor superoxidativi în produse mai puțin reactive.

Oksidaza cromofilică c participă la transportul electronicilor în mitocondrii și la producerea energiei celulare.

Deoarece GHK leagă cuprul, cercetătorii au analizat dacă GHK-Cu poate influența disponibilitatea acestui metal și procesele biochimice asociate cu acesta.

Prezența peptidei de legare a cuprului nu înseamnă însă că metalul este transmis direct către fiecare enzimă dependentă de cuprul.

Celula are transportoare specializate, proteine de legare și sisteme de reglare a distribuției intracelulare a metalului.

Aceste mecanisme sunt importante deoarece cuprul liber sau reglementat incorect poate participa la reactiile de oxidare.

În anumite condiții, reacțiile redox asociate cu cuprul pot contribui la formarea de forme chimice reactive.

Prin urmare, GHK-Cu a fost studiat în ceea ce privește potențialul său de a influența reactivitatea cuprului și procesele oxidative [31, 32].

Această dependență este complexă din punct de vedere chimic. Legarea cuprului poate modifica reactivitatea metalului, dar consecințele biologice depind de întregul mediu chimic.

Legarea aldehidilor și chimia anti-oxidantă

GHK a fost, de asemenea, studiat în ceea ce privește capacitatea de reacție cu aldehidele selectate care apar în timpul peroxidării lipidelor.

Peroxidarea lipidilor include reacțiile de oxidare care afectează lipidele membranelor celulare și alte structuri care conțin lipide.

În urma acestor reacții pot apărea aldehide reactive, precum 4-hidroksynonenal și acroleină.

Ambele legături sunt subiectul cercetărilor, deoarece pot interacționa cu proteinele și alte molecule ale celulelor.

În studiile chimice s-a demonstrat că GHK poate forma produse de reacție cu acești aldehide, ceea ce sugerează potențialul lor de legare în condiții experimentale [31, 32].

Aceste rezultate furnizează informații despre reactivitatea chimică a GHK.

Cu toate acestea, capacitatea de reacție cu aldehidii în cadrul experimentului de laborator nu demonstrează că peptidul previne deteriorarea țesuturilor datorată oxidației la oameni.

Conținuturile de reactivi, prezența moleculelor biologice concurente și viteza reacției sunt importante în evaluarea potențialelor consecințe biologice.

Adhezia celulelor și interacțiunea cu matricea extracelulară

GHK-Cu a fost studiat și în contextul aderării celulelor și a interacțiunii acestora cu materialele extracelulare.

Adhezia celulară este necesară pentru organizarea corectă a țesuturilor, deoarece celulele trebuie să recunoască mediul înconjurător și să interacționeze cu acesta.

În studii care au inclus celule osteoblastice și modele de aderare a hepatocitelor, s-a analizat impactul materialelor asociate cu GHK asupra răspândirii celulelor, aderenței acestora și fenotipului [33, 34].

Acestea sunt importante pentru dezvoltarea biomaterialelor în care peptidele pot fi încorporate în suprafețele ingineriale sau pot fi legate de acestea.

Efectele observate depind de tipul de peptidă, de compoziția materialului, de tipul celulelor și de condițiile experimentale.

Acestea furnizează informații despre interacțiunile dintre peptide și suprafețe, precum și între celule și matricea țesutului, și nu dovedesc direct regenerarea țesuturilor la oameni.

Utilizările GHK-Cu în cercetarea științifică

GHK-Cu a fost studiat în mai multe domenii de cercetare moleculară și preclinică.

Acestea includ biologia stresului oxidativ, semnalizarea inflamatorie, fibrozizarea, leziunile pulmonare, răspunsurile neuronale, reglarea vaselor sanguine, remodelarea matricei extracelulare și analiza expresiei genelor.

Secțiunile de mai jos prezintă cele mai importante rezultate ale experimentului și limitările acestuia.

Studii privind activitatea antioxidantă și procesele redox

Enzimele antioxidante dependente de cupru constituie un element important al protecției celulare împotriva stresului oxidativ.

Unul dintre exemple este SOD1, care necesită cupru și zinc pentru a funcționa corect.

Studii privind deficitul de cupru au arătat că lipsa acesteia poate influența activitatea SOD1 și poate crește valorile parametrilor legați de stresul oxidativ [35–38].

Aceste rezultate confirmă importanța biologică a unei reglementări corecte a economiei cuprului.

Cu toate acestea, studiile privind deficitul de cupru sau restabilirea sa în dietă nu pot fi considerate automat dovezi ale acțiunii identice a GHK-Cu.

Distincția este importantă, deoarece comportamentul biologic al unui anumit complex de cupru depinde de structura sa moleculară, distribuția și interacțiunea cu căile de reglare a metabolismului acestui metal.

În studiile experimentale care au inclus biomateriale care conțineau GHK și complexe de tripeptide de cupru, s-au analizat răspunsurile antioxidante și parametrii asociate cu țesuturile.

O parte dintre aceste studii a vizat dacă GHK-Cu influențează peroxidarea lipidilor legată de ferrytină.

Feritina este o proteină implicată în stocarea ferului în interiorul celulei.

Ferulina poate participa la reacțiile de oxidare atunci când apare sub formă reactivă.

În studii s-a demonstrat că cuprul, în coordonare cu GHK, poate influența peroxidația lipidică dependentă de ferrytin în anumite condiții experimentale [39, 40].

Aceste observații furnizează informații despre interacțiunile dintre complexele de cupru, procesele asociate cu fierul și chimia reacțiilor oxidative.

Analizele chimice suplimentare au analizat reacțiile GHK cu produsele de peroxidare a lipidelor, precum 4-hidroksynonenal și acroleina [41, 42].

Rezultatele justifică studii suplimentare asupra GHK ca moleculă capabilă să participe la reacțiile chimice cu aldehidele.

Cu toate acestea, activitatea anti-oxidantă demonstrată în testul chimic sau în modelul celular nu demonstrează protecția clinică împotriva leziunilor oxidative.

Sygnalizarea inflamatorie și reglarea citokinelor

Starea inflamatorie implică interacțiuni coordonate între celulele imunitare, proteinele semnalizante și reacțiile țesutului.

În câteva studii de laborator s-a analizat impactul GHK-Cu asupra căilor inflamatorii.

În studiile celulare care au utilizat celulele macrofage analoge RAW 264.7 și celulele epiteliale intestinale Caco-2, s-au observat modificări ale parametrilor oxidați și inflamatorii după expunerea la GHK-Cu.

Acestea au inclus reducerea producției de forme reactive de oxigen, creșterea valorilor parametrilor antioxidanți legați de glutation și modificări ale mediatorilor inflamatori, precum TNF-α și IL-6 [43–47].

Cercetătorii au analizat, de asemenea, căile de semnalizare care implică factorul nuclear kappa B (NF-κB) și kinaza proteică activată de mitogenii p38 (p38 MAPK).

NF-κB participă la reglarea genelor asociate cu starea inflamatorie, rezistența, supraviețuirea celulelor și răspunsul la stres.

Calea MAPK p38 participă la reacțiile celulare asociate cu mediatorii inflamatorii și stresul mediului.

În studiile experimentale, GHK-Cu a fost asociat cu modificările în semnalizarea NF-κB p65 și p38 MAPK.

Aceste rezultate sugerează că acest compus poate influența căile care participă la răspunsul inflamator în condiții de laborator.

Cu toate acestea, nu toate studiile citate în cadrul discuției mai largi evaluează direct GHK-Cu. Unele publicații prezintă informații generale privind căile inflamatorii sau alte substanțe experimentale.

Prin urmare, simplul fapt că sunt efectuate studii privind NF-κB sau p38 MAPK nu demonstrează că GHK-Cu produce un anumit efect antiinflamator clinic.

Aceste rezultate sunt cele mai utile pentru a înțelege interacțiunile moleculare posibile și pentru a identifica aspectele care necesită experimente ulterioare.

Modeli de fibrozare, leziuni pulmonare și neuroprotecție

Fibroza constă în acumularea necorespunzătoare sau în organizarea incorectă a componentelor matricei extracelulare în țesuturi.

Poate să se dezvolte ca răspuns la leziunile persistente, la inflamația sau la modificarea semnalizării celulare.

GHK a fost studiat în modele experimentale de fibroză pulmonară datorită efectului său descris asupra activității fibroblastelor și a căilor asociate cu TGF-β.

În modelul de fibroză pulmonară provocată de bleomicina la șobolani, cercetătorii au observat modificări ale grosimii țesuturilor, o creștere a presiunii de către celulele inflamatorii și a căilor implicate în trecerea dintre celulele epiteliale și mezendelulare [48].

În studiu s-a analizat semnalizarea TGF-β1/Smad, care participă la răspunsurile celulare asociate cu producerea matricei și fibroza.

Aceste observații sugerează că GHK poate influența căile selectate asociate cu fibrilația cardiacă în experimentele pe animale.

Cu toate acestea, efectul obținut în cadrul modelului chimic al bolii la șoarece nu demonstrează eficacitatea în tratarea fibrozei pulmonare la oameni.

Mezaniile biologice, evoluția bolii și circumstanțele clinice pot varia semnificativ.

În studiile neurobiologice legate de GHK au fost analizate, de asemenea, stresul oxidativ, semnalizarea inflamatorie și posibilele interacțiuni cu căile de reglare a genelor.

Unele studii le asociază cu deacetylaza histonică 2 (HDAC2), un enzim care participă la reglarea cromatinei și la expresia genelor.

Cu toate acestea, literatura citată privind modificările cognitive la șobolanii în vârstă și mecanismele asociate cu HDAC include și studii care nu confirmă direct efectul specific GHK-Cu [49].

Prin urmare, afirmațiile privind îmbunătățirea funcțiilor cognitive, reducerea neuroinflamării sau reglarea directă a HDAC2 de către GHK-Cu necesită o distincție clară de rezultatele studiilor privind alte intervenții experimentale.

Dovezile disponibile justifică interesul pentru studiile mecanistice, dar nu confirmă efectul neuroprotector stabilit la oameni.

Observații în modelele de angiogeneză și biologia vaselor de sânge

Angiogeneza este un proces esențial în dezvoltarea și repararea țesuturilor.

Acesta implică formarea de vase noi de sânge și necesită interacțiuni coordonate între celulele endoteliale, factorii de creștere, componentele matricei extracelulare și țesuturile care le înconjoară.

GHK-Cu a fost studiat în cadrul experimentelor legate de semnalizarea vasculară și remodelarea țesuturilor.

În unele studii s-au observat modificări ale factorilor legali cu angiogeneza, inclusiv VEGF și bFGF [50, 51].

Aceste proteine participă la activitatea celulelor endoteliale, la dezvoltarea vaselor sanguine și la răspunsul celular la leziuni.

Cercetătorii au analizat, de asemenea, legăturile dintre compușii legați de GHK și proteinele structurale, precum colagenul și elastina.

Colagenul este responsabil de rezistența țesuturilor, în timp ce elastina sprijină capacitatea acestora de a se întinde și de a reveni la forma inițială.

Ambele proteine sunt importante pentru structura vaselor sanguine și pentru organizarea matricei extracelulare.

Însă schimbările în expresia factorilor de creștere sau în sinteza proteinelor materne nu trebuie să însemne o îmbunătățire a fluxului sanguin.

Reconstrucția funcțională a organelor interne include procese suplimentare, inclusiv formarea organelor, maturizarea acestora, integrarea și reglementarea fiziologică.

În anumite lucrări mai ample privind regenerarea vaselor, se menționează, de asemenea, acțiunea anticoagulantă și de dilatare a vaselor.

Acestea sunt procese fiziologice distincte și nu trebuie să se presupună că rezultă direct din expunerea la GHK-Cu fără dovezi adecvate privind acestă legătură specifică.

Rezultatele actuale rămân astfel importante în primul rând pentru studiile experimentale privind angiogeneza și biologia vaselor de sânge.

Dovezi din modele neuronale și neurotrofice

Dezvoltarea și repararea neuronilor implică participarea factorilor de creștere, interacțiunea cu matricea extracelulară, migrarea celulelor și prelungirea vârfurilor neuronale.

Creșterea neurytilor este unul dintre parametrii experimentali utilizați pentru studierea diferențiunii și dezvoltării neuronilor.

În studiile timpurii, utilizând culturi de țesut nervos, s-a analizat efectul pe care îl au pe diferențierea neuronilor peptidele și substanțele nutritive condiționate [52, 53].

Aceste studii au contribuit la interesul mai larg pentru peptidele scurte ca potențiali regulatori ai comportamentului celulelor.

Materialele legate de GHK au fost analizate și în sistemele experimentale de regenerare nervoasă.

Într-unul dintre studii s-a introdus un peptid care sprijină aderența celulelor la conductele de colagen utilizate pentru a lega secțiunile întrerupte ale nervilor [54].

Cercetătorii au observat modificări ale factorilor de creștere și ai mediatorilor inflamatorii, inclusiv factorul de creștere al nervilor (NGF) și neurotrofinii NT-3 și NT-4.

Observațiile suplimentare au inclus parametrii axonali și reacțiile celulelor Schwanna.

Celulele Schwanna sunt un element important al sistemului nervos periferic. Acestea susțin axonii și participă la răspunsul la leziunile nervilor periferici.

Cu toate acestea, rezultatele obținute utilizând conducte de colagen care conțin peptide nu trebuie atribuite în mod automat GHK-Cu aflat în circulație liberă.

La efectele observate pot influența biomateria, mediul local, modul de prezentare a peptidei și modelul experimental utilizat.

De asemenea, creșterea expresiei factorilor de creștere sau a numărului de axonii în sistemul experimental nu demonstrează o regenerare neurologică funcțională la oameni.

Acestea pot fi interpretate cel mai bine ca analize ale biomaterialelor care conțin peptide și semnale neurotrofice.

Regularea genelor și reconstrucția măduvei osoase

Analizele privind expresia genelor au devenit un element important al discuțiilor științifice privind GHK și GHK-Cu.

Efectele experimentelor timpurii s-au concentrat asupra răspunsurilor celulare asociate rănilor, inclusiv asupra activității fibroblastelor, producției de colagen și organizării matricei extracelulare [55, 56].

Ulteriori studii ale lui Maquart și colaboratorilor au analizat impactul GHK-Cu asupra sintezei colagenului și a moleculelor legate de matrice [57–59].

În experimentele care au utilizat culturi de fibroblaste s-au observat modificări ale producției de colagen la concentrații scăzute.

În alte studii au fost analizate glicozaminoglicanii sulfatati și micile proteoglicane.

Aceste molecule participă la organizarea matricei extracelulare, la menținerea hidratării, la formarea proprietăților mecanice și la interacțiunile dintre celule și țesuturile care le înconjoară.

GHK-Cu a fost, de asemenea, asociat cu modificările expresiei metaloproteinazelor materne, inclusiv MMP-2 [59].

Acest lucru este important deoarece menținerea matricei extracelulare necesită atât degradarea controlată, cât și sinteza.

Însă simpla creștere a producției de colagen nu demonstrează îmbunătățirea organizării țesuturilor.

În mod similar, activitatea MMP crescută poate duce la diverse consecințe, în funcție de tipul de țesut și de contextul biologic.

De aceea, studiile sugerează că GHK-Cu poate influența transformările celulare prin intermediul mai multor căi de legare.

Aceste observații nu demonstrează însă vindecarea fără apariția de cicatrici sau regenerarea predictibilă a țesuturilor la oameni.

În experimentele suplimentare s-au observat modificări la nivelul unor molecule precum dekoryna, sulfatul de dermatan și sulfatul de chondroitină [60].

Decorina este un mic proteoglican asociat cu organizarea colagenului și cu reglarea matricei extracelulare.

Sarcina de dermatan și sarcină de chondroitin aparțin glicozaminoglicanelor care influențează structura și proprietățile țesuturilor conjunctivale.

Modificările expresiei sau sintezei acestora furnizează informații despre metabolismul mamei.

Nu dovedesc însă în mod independent îmbunătățirea rezistenței țesuturilor, aspectul lor sau rezultatele clinice ale vindecării.

Exprimarea integrinelor și studiul celulelor epidermei

Cilii keratinoizi sunt tipul dominant de celule de pe suprafața pielii.

Participă la formarea barierei cutanate, la diferențierea celulară și la răspunsul la leziunile țesutului.

Cercetătorii de la Seoul National University au studiat efectul peptidei de cupru GHK asupra expresiei integrinelor și a prezenței de celule care prezintă o expresie pozitivă a p63 în keratocitele [61].

Integrinele participă la fixarea celulelor și la comunicarea cu membrana extracelulară.

Proteina p63 este legată de dezvoltarea epiteliului și de menținerea anumitor populații de celule epiteliale.

În studiu s-a observat o expresie crescută a integrinului și un procent mai mare de celule pozitive în ceea ce privește p63 după expunerea la peptidul de cupru GHK.

Aceste observații sugerează un posibil impact asupra caracteristicilor celulare asociate cu menținerea stratului cutanat.

Cu toate acestea, modificările acestor markeri nu demonstrează în mod independent o regenerare crescută a pielii la oameni.

Rezultatele rămân limitate la modelele celulare utilizate și la parametrii analizați.

Profilarea la scară largă a expresiei genelor

Metodele informatice au sporit capacitatea de analiză a impactului diferitelor legături asupra rețelelor de expresie a genelor.

Mapamondul Conectivității, adesea cunoscut sub numele de cMap, este un instrument de cercetare utilizat pentru a compara modelele de expresie a genelor asociate cu stările biologice și expunerea la substanțe chimice.

Abordările informatice asociate, inclusiv MANTRA, au fost utilizate pentru a studia relația dintre legături și răspunsurile transcripționale [62, 63].

GHK a fost discutat în acest context datorită legăturilor sale cu schimbările profunde ale tiparelor de expresie a genelor.

Într-una dintre analize s-au constatat 268 de gene cu expresie crescută și 167 de gene cu expresie scăzută.

În alte studii, GHK a fost asociat cu modificări care implică un număr mai mare de gene și căi [9, 62–64].

Aceste rezultate sugerează că răspunsurile legate de GHK pot include mai multe sisteme biologice, și nu un singur obiectiv molecular.

Cu toate acestea, compilarea datelor privind expresia genelor necesită o interpretare prudentă.

Modificarea cantității de ARN (mRNA) nu trebuie să ducă la o schimbare corespunzătoare a concentrației de proteină sau a funcției biologice.

Formele de expresie a genelor depind, de asemenea, de tipul celulelor, de condițiile de expunere, de metodele de măsurare și de limitele analitice.

Prin urmare, cifrele privind genele asociate cu un anumit compus nu trebuie considerate o măsură directă a eficacității sale terapeutice.

Prognozele computerizate sunt valoroase în formularea ipotezelor, dar necesită confirmarea experimentală.

Rețelele genetice asociate cu neuroprotecția

Analizele expresiei genelor discutate în literatura privind GHK au identificat modificări care includ genele asociate cu funcționarea neuronilor, cu supraviețuirea celulelor și cu semnalizarea de dezvoltare.

Exemplele includ SIGMAR1, EPM2A, NAIP, FGFR2 și SLIT2 [65].

Aceste gene participă la diverse procese biologice.

SIGMAR1 codifică receptorul sigma-1, o proteină implicată în semnalizarea celulară și în procesele asociate cu stresul.

EPM2A este legat de laforină, o proteină importantă pentru metabolizarea glicogenului.

NAIP participă la procesele legate de supraviețuirea celulelor și răspunsul imunitar.

FGFR2 codifică un receptor implicat în semnalizarea factorului de creștere al fibroblastelor.

SLIT2 participă la procesele de dezvoltare legate de orientarea și migrarea celulelor.

Participarea acestor gene în biologia sistemului nervos a stârnit interesul privind posibila lor legătură cu răspunsurile transcripționale declanșate de GHK.

Cu toate acestea, prezența genului în setul de date asociat cu GHK nu demonstrează că GHK controlează direct acest gen în orice mediu biologic.

De asemenea, nu demonstrează că GHK previne demența sau duce la îmbunătățirea funcțiilor neurologice.

Analizele citate privind anumite părți ale acestor gene oferă un context biologic mai amplu și nu dovedesc direct activitatea GHK-Cu.

Prin urmare, aceste rezultate trebuie înțelese ca observații care servesc la formularea ipotezelor privind reglementarea genelor și neurobiologia.

Rezultatele studiilor epigenetice și ale căilor asociate cu HDAC

Regularea epigenetică include schimbările în activitatea genelor care nu necesită modificarea secvenței de bază a ADN-ului.

Unul dintre mecanismele importante este modificarea histonilor.

Histonii sunt proteine în jurul cărora se organizează ADN-ul. Modificările lor chimice pot influența accesibilitatea anumitor regiuni ale ADN-ului pentru aparatul de transcriere.

Deacetilaza histonilor (HDAC) elimină grupurile de acetil pe histoni și pe alte substraturi proteice.

Activitatea lor poate influența structura cromatinei și expresia genelor.

GHK a fost discutat în contextul căilor mediate de HDAC din cauza observațiilor mai ample privind reglementarea genelor și modificările de transcriere asociate cu vârsta [66, 67].

Însă studiile citate privind HDAC și îmbătrânirea epigenetică furnizează în primul rând informații generale despre aceste procese biologice.

Însă ele însele nu demonstrează că GHK-Cu este un inhibitor HDAC clinic confirmat.

De asemenea, schimbările în structura expresiei genelor nu trebuie să fie înțelese automat ca o inversare a procesului de îmbătrânire epigenetică.

Onoarea directă privind inhibarea HDAC necesită experimente care să demonstreze impactul asupra activității acestor enzime în anumite condiții.

Concluziile privind inversarea procesului de îmbătrânire necesită dovezi suplimentare care să lege măsurătorile moleculare de rezultate biologice semnificative.

Consecințele dintre GHK, reglarea cromatinei și expresia genelor asociate cu îmbătrânirea rămân astfel un domeniu al cercetărilor mecanistice ulterioare.

Calitatea și analiza materialelor GHK-Cu destinate cercetării științifice

Caracteristica analitică a GHK-Cu este importantă, deoarece rezultatele studiilor depind de identitatea, compoziția și calitatea materialului analizat.

Preparatul cunoscut sub numele de GHK-Cu trebuie evaluat prin metode care permit caracterizarea componentei peptide și furnizarea de dovezi privind forma sa legată de cupru.

Analiza calitativă poate include cromatografie, spectrometrie de masă, analiză a conținutului de metale și tehnici suplimentare alese în funcție de scopul analitic specific.

Niciun test rutinar individual nu confirmă însă toate parametrii calitativi relevanți.

Cromatografia lichidă asociată cu spectrometria de masă

Cromatografia lichidă asociată spectrometriei de masă (LC-MS) combină cromatografia cu detectarea bazată pe masă ionică.

O parte a cromatografiei permite separarea compușilor prezenti în eșantion.

Un spectrometru de masă furnizează informații despre ioni pe baza raportului dintre masa și încărcătura lor.

LC-MS poate sprijini identificarea peptidei prin detectarea de ioni moleculari compatibili cu compoziția așteptată.

În funcție de metoda utilizată, informații suplimentare despre fragmentarea proteinelor pot ajuta la caracterizarea secvenței peptidei.

Cu toate acestea, observarea masei moleculare corespunzătoare GHK nu confirmă în mod independent toate aspectele structurii moleculei.

În același fel, detectarea semnalelor care confirmă prezența unei forme asociate cu cuprul nu trebuie să indice o geometrie coordonată completă și nici să excludă toate complexele alternative.

Caracterizarea legării cuprului poate necesita studii suplimentare prin utilizarea metodelor spectroscopice adecvate sau a analizelor privind conținutul de metal.

LC-MS este, prin urmare, un instrument analitic valoros, dar fiabilitatea concluziilor obținute depinde de metodă, modele de referință, prepararea probei și elementele de confirmare.

Cromatografia lichidică de înaltă performanță și puritate

Cromatografia lichidă de înaltă performanță (PLHPLC) este utilizată în mod obișnuit pentru separarea componentelor preparatelor peptidelor.

Poate ajuta la identificarea contaminanților legați de sinteza, degradarea sau alte procese de producție.

Rezultatul analizei cromatografice se bazează de obicei pe semnalele relative detectate în anumite condiții analitice.

Însă puritatea cromatografică nu este aceeași cu identitatea chimică, conținutul de peptidă, stechiometria complexului de cupru sau calitatea generală a materialului.

De exemplu, puritatea declarată la nivelul de 98% nu trebuie să însemne că 98% din masa totală a probei reprezintă un complex GHK-Cu format corect.

Interpretarea depinde de metoda analitică utilizată și de modul în care se calculează rezultatul.

Anche cromatografia nu confirmă sterilitatea, conținutul de endotoxine sau absența tuturor contaminanților posibili.

Materialul sursă descrie specificația de puritate declarată, care este de cel puțin 98% pentru anumite preparate de cercetare.

Această specificație trebuie considerată o declarație a furnizorului, cu excepția cazului în care este susținută de documentația analitică disponibilă pentru o anumită lot.

Filtrare, sterilizare și controlul contaminării cu particule solide

Materialul de referință descrie filtrarea prin membrane cu un diametru porilor de 0,22 microni ca element al procesului de preparare a materialului.

Filtrarea membranară poate fi utilizată pentru a reduce anumite contaminanți microbiologici, dacă metoda și condițiile aplicate sunt adecvate.

Cu toate acestea, trecerea soluției printr-un filtru cu dimensiunea porilor de 0,22 microne nu confirmă în sine sterilitatea produsului final.

Asigurarea sterilității depinde de întregul proces, inclusiv de echipamente, mediu, integritatea filtruului, modul de manipulare a materialului și procedurile de verificare validate.

Filtrarea nu trebuie să elimine, de asemenea, endotoxinele, contaminanții chimici disuși și toate tipurile de contaminanți prin particule solide.

De aceea, afirmațiile privind sterilitatea sau utilitatea pentru un anumit scop de cercetare necesită teste și documentație adecvate, și nu se pot baza exclusiv pe dimensiunea porilor filtruului.

Bunele practici de laborator și documentarea

Buna Practică de Laborator (GLP) este un sistem de calitate asociat cu organizarea, conducerea, monitorizarea, documentarea și raportarea anumitor studii nonclinice.

Declarația că procedurile sunt conforme cu principiile GLP nu trebuie să însemne conformitatea formală cu cerințele GLP sau deținerea unui certificat corespunzător.

Importanța unei astfel de declarații depinde de procedurile specifice, documentația și sistemul de calitate aplicat.

Materialelor de cercetare poate fi anexată și o Certificare de Analiză (Certificate of Analysis, COA).

COA conține de obicei rezultatele selectate ale analizelor referitoare la o anumită lot.

Informatiile importante pot include studii de identitate, masuratori de puritate, indicarea continutului de substante, metodele analitice utilizate, identificatorii partilor si alte parametri specificati in specificație.

Totuși, valoarea informativă a COA depinde de metodele și datele care constituie baza prezentării sale.

Certificatul în sine nu demonstrează că materialul este adecvat pentru administrarea către oameni, utilizarea cosmetică sau terapeutică.

La fel, analiza analitică nu confirmă eficacitatea biologică sau siguranța clinică.

În cercetările ştiințifice, documentația calitativă cea mai utilă ar trebui să fie detaliată, identificabilă și suficient de completă pentru a permite o interpretare adecvată a rezultatelor analitice.

Mai multe informații despre diferențierea dintre producători, furnizori, declarațiile de calitate și documentația lotului se găsesc în articol Producătorii și furnizorii de peptide.

Rezumat

GHK-Cu este un complex de tripeptida naturală cu cupru, studiat de peste cinci decenii.

Structura sa moleculară, proprietățile de legare a cuprului și interacțiunile cu sistemele celulare l-au făcut obiectul unor studii importante privind biologia peptidelor, biologia matricei extracelulare, stresul oxidativ și reglarea genelor.

Complexul este format din glicil-L-histidil-L-lizină și cupru(II). Analizele structurale au permis identificarea locurilor coordonante care conțin azot și care participă la legarea cuprului și influențează proprietățile chimice ale moleculei.

Aceste caracteristici constituie baza pentru analiza efectelor pe termen scurt ale peptidelor cu ioni de metale și a influenței chimiei coordonante asupra proceselor biologice.

În studiile experimentale s-au observat modificări ale sintezei colagenului, producției glicozaminoglicanelor, expresiei metaloproteinazelor materne, a semnalizării integrinelor, a mediatorilor inflamatorii și a parametrilor legati de protecția anti-oxidantă.

Analizele suplimentare au inclus răspunsurile la GHK în culturile de fibroblaste, modele de rană, experimente privind leziunile pulmonare, sistemele neuronale și biomaterialele care conțin peptide.

Analizele computerizate au legat de asemenea GHK de schimbări profunde în rețeaua de expresie a genelor.

Importanța științifică a acestor observații depinde însă de contextul experimental.

Modificările expresiei genelor nu trebuie să ducă la modificări ale activității proteinelor.

Producerea crescută de colagen nu trebuie să însemne o îmbunătățire a structurii țesuturilor.

Modificările markerilor inflamatori nu constituie o dovadă clinică independentă a unui efect antiinflamator.

De asemenea, rezultatele studiilor care includ linii de celule tumorale, modele de fibroziere a plămânilor sau culturi neuronale nu demonstrează eficacitatea lor în cazul bolilor care le pot fi asociate la oameni.

În literatura există, de asemenea, diferențe semnificative între GHK și GHK-Cu, precum și între experimentele care se referă direct la respectivul compus și studiile care furnizează doar un context biologic general.

Aceste distincții trebuie menținute în interpretarea mecanismelor de acțiune și a aplicațiilor propuse.

O altă problemă importantă este calitatea analitică. Tehnici precum LC-MS și HPLC pot furniza informații valoroase despre identitate și puritate, dar nu confirmă în mod independent toate proprietățile structurale, microbiologice și biologice ale preparatului.

În general, GHK-Cu rămâne un instrument util în cercetările moleculare privind coordonarea cuprului, semnalizarea celulară, metabolizarea matricei extracelulare și răspunsul la stresul oxidativ.

Proprietățile sale chimice cunoscute și literatura preclinică amplă constituie baza pentru studii ulterioare de cercetare. În schimb, afirmațiile privind eficacitatea clinică și siguranța necesită studii separate, controlate corespunzător, cu participarea oamenilor.

Mențiune

Acest articol are un caracter exclusiv educațional și informativ. Prezentă sunt cercetările privind structura moleculară a GHK-Cu, coordonarea cuprului, mecanismele biologice, caracteristicile analitice și aplicațiile experimentale.

Nu constituie sfaturi medicale, nu recomandă utilizarea GHK-Cu la oameni sau animale, nu stabilește scheme de tratament și nu susține niciun fel de utilizare diagnostică, terapeutică sau cosmetică.

Rezultatele obținute în culturile celulare, experimentele pe animale, analizele computerizate și studiile biochimice nu trebuie interpretate ca dovadă a eficacității clinice sau a siguranței în cazul oamenilor.

Informațiile privind puritatea analitică, materialele de clasă de laborator, certificatele de analiză sau de studii de laborator nu demonstrează că preparatul respectiv este adecvat pentru administrarea la oameni sau pentru orice altă utilizare reglementată de legislația în vigoare.

Toate deciziile medicale trebuie luate de către personalul medical calificat în conformitate cu dovezile clinice adecvate și cu reglementările în vigoare.

Referințe

1. Pickart L. Tripeptide din serul uman care îmbunătățește creșterea celulelor hepatice neoplazice și supraviețuirea celulelor hepatice normale. San Francisco, Calif., SUA: Universitatea din California; 1973.
2. Pickart L., Freedman J. H., Loker W. J., et al. Tripeptide-ul de creștere al plazmei poate funcționa prin facilitarea absorbției de cupru în celule. Nature. 1980;288(5792):715–717. doi: 10.1038/288715a0.
3. Pickart L. Utilizarea GHL-Cu ca agent de vindecare a rănilor și antiinflamator. 1988, http://www.freepatentsonline.com/4760051.html.
4. Downey D., Larrabee W. F., Jr., Voci V., Pickart L. Accelerarea vindecării rănilor prin utilizarea cuprului glicil-histidil-lizin (II) Surgical Forum. 1985;25:573–575.
5. Pickart L. Iamin: un factor de creștere uman cu multiple proprietăți cicatrizante. În: Sorenson J., editor. Biologia complexelor de cupru. Clifton, NJ, SUA: Humana Press; 1987. pp. 273–285.
6. Meiners S., Eickelberg O. Descoperirea de medicamente personalizate de generație următoare: tripeptidele GHK ocupă un loc central în boala pulmonară obstructivă cronică. Genome Medicine. 2012;4(8, articolul 70) doi: 10.1186/gm371.
7. Hong Y., Downey T., Eu K. W., Koh P. K., Cheah P. Y. O semnatură ‘predispusă la metastaze’ la pacienții cu cancer colorectal sporadic, capabili să repare defectele de reparare în stadiul incipient, și implicațiile acesteia pentru posibilele tratamente. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
8. Gruchlik A., Jurzak M., Chodurek E. W., Dzierzewicz Z. Efectul glicinei-glicină-his, glicinei-his-lisină și complexelor de cupru ale acestora asupra secreției de IL-6 dependentă de TNF-α în fibroblastele dermale umane normale. Acta Poloniae Pharmaceutica. 2012;69(6):1303–1306.
9. Pickart L., Vasquez-Soltero J. M., Margolina A. GHK și ADN: resetarea genomului uman către sănătate. BioMed Research International. 2014;2014:10. doi: 10.1155/2014/151479.151479
10. Wegrowski Y., Maquart F. X., Borel J. P. Stimularea sintezei glicozaminoglicanelor sulfatate prin complexul tripeptide-cupru Glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+. Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
11. Siméon A., Emonard H., Hornebeck W., Maquart F.-X. Complexul tripeptide-cupru glicil-L-histidil-L-lisina-Cu2+ stimulează expresia matrixei de metaloproteinaze-2 în culturile de fibroblaste. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
12. Ehrlich H. Stimularea vindecării pielii la șobolanii imunosupresați. Programele Simpozionului privind colagenul și repararea pielii; Septembrie 1991; Reims, Franța.
13. Siméon A., Wegrowski Y., Bontemps Y., Maquart F.-X. Exprimarea glicozaminoglicanelor și a micilor proteoglicanelor în răni: modularea prin complexul tripeptide-cupru glicil-L-histidil-L-linozină-Cu2+. Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
14. McCormack M. C., Nowak K. C., Koch R. J. Efectul tripeptidei de cupru și al tretinoinei asupra producției de factori de creștere într-un model de fibroblast fără ser: Arhivele de Chirurgie Plastică Facială. 2001;3(1):28–32.
15. Buffoni F., Pino R., Dal Pozzo A. Efectul complexelor de tripeptide cu cupru asupra procesului de vindecare a rănilor la nivelul pielii și asupra fibroblastelor cultivate. Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie. 1995;330(3):345–360.
16. Gul N. Y., Topal A., Cangul I. T., Yanik K. Efectele complexului topical de cupru cu tripeptide și laserul helium-neon asupra vindecării rănilor la iepuri. Veterinary Dermatology. 2008;19(1):7–14. doi: 10.1111/j.1365-3164.2007.00647.x.
17. Cangul I. T., Gul N. Y., Topal A., Yilmaz R. Evaluarea efectelor complexului topical tripeptide-cupru și oxizilor de zinc asupra vindecării ranilor deschise la iepuri. Dermatologie Veterinară. 2006;17(6):417–423. doi: 10.1111/j.1365-3164.2006.00551.x.
18. Pickart L. Metodă de utilizare a compușilor conținători de cupru(II) pentru accelerarea vindecării rănilor. 1992, http://www.freepatentsonline.com/5164367.html.
19. Arul V., Kartha R., Jayakumar R. O abordare terapeutică pentru vindecarea rănilor diabetice utilizând matrici de colagen încorporate cu biotinilată GHK. Life Sciences. 2007;80(4):275–284. doi: 10.1016/j.lfs.2006.09.018.
20. Canapp S. O., Jr., Farese J. P., Schultz G. S., et al. Efectul complexului topical tripeptide-cupru asupra vindecării rănilor ischemică deschise. Veterinary Surgery. 2003;32(6):515–523. doi: 10.1111/j.1532-950X.2003.00515.x.
21. Swaim S. F., Vaughn D. M., Kincaid S. A., et al. Efectul medicamentelor injectate local asupra vindecării rănilor de pe pieptene la câini. American Journal of Veterinary Research. 1996;57(3):394–399.
22. Campbell J. D., McDonough J. E., Zeskind J. E., et al. O semnatură a expresiei genelor în cazul distrugerii pulmonare asociată emfizemului și reversarea acesteia prin tripeptidele GHK. Genome Medicine. 2012;4, articolul 67 doi: 10.1186/gm367.
23. Boo S., Dagnino L. Integrinele ca modulatori ai semnalizării factorului de creștere transformant beta în fibroblastele dermale în timpul regenerării pielii după leziune. Advances in Wound Care. 2013;2(5):238–246. doi: 10.1089/wound.2012.0394.
24. Lubick K., Radke M., Jutila M. Securinine, un antagonist al receptorului GABAA, îmbunătățește eliminarea macrofagilor a C. burnetii în faza II: comparație cu agenții agonisti ai TLR. Journal of Leukocyte Biology. 2007;82(5):1062–1069. doi: 10.1189/jlb.0407255.
25. Matalka L. E., Ford A., Unlap M. T. Tripeptide-ul GHK induce moartea celulară programată în celulele neuroblastomului SH-SY5Y. Journal of Biotechnology & Biomaterials. 2012;2, articolul 144 doi: 10.4172/2155-952X.1000144.
26. Pollard J. D., Quan S., Kang T., Koch R. J. Efectele tripeptidei de cupru asupra creșterii și expresiei factorilor de creștere la fibroblaste normale și iradiate. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
27. Jose S., Hughbanks M. L., Binder B. Y. K., Ingavle G. C., Leach J. K. Secretia crescută a factorilor trofici prin intermediul celulelor stem/stromale mesenchimal cu hidrogeluri modificate cu glicină, histidină și lizină (GHK). Acta Biomaterialia. 2014;10(5):1955–1964. doi: 10.1016/j.actbio.2014.01.020.
28. Lau S. J., Sarkar B. Interacțiunea dintre cupru(II) și glicil-L-histidil-L-lizină, un tripeptide care modulează creșterea din plasmă. Biochemical Journal. 1981;199(3):649–656. doi: 10.1042/bj1990649.
29. Perkins C. M., Rose N. J., Weinstein B., Stenkamp R. E., Jensen L. H., Pickart L. Structura unui complex de cupru al factorului de creștere glicil-L-histidil-L-lisină la rezoluție de 1,1 Å. Inorganica Chimica Acta. 1984;82(1):93–99. doi: 10.1016/s0020-1693(00)82544-x.
30. Freedman J. H., Pickart L., Weinstein B., Mims W. B., Peisach J. Structura complexului glicil-L-histidil-L-lisin-cupru(II) în soluție. Biochimie. 1982;21(19):4540–4544. doi: 10.1021/bi00262a004.
31. Pickart L., Lovejoy S. Activitatea biologică a glicil-l-histidin-l-lizinului, factor de creștere al metalului de cupru din plasma umană. Methods in Enzymology. 1987;147:314–328. doi: 10.1016/0076-6879(87)47121-8.
32. Beretta G., Arlandini E., Artali R., Anton J. M. G., Maffei Facino R. Capacitatea de secvențiere a acroleinei a tripeptidului endogen glicil-histidil-lizină (GHK): caracterizarea produselor de conjugare prin ESI-MSn și calcule teoretice. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
33. Godet D., Marie P. J. Efectele complexului de cupru tripeptide glicil-L-histidil-L-lisină asupra răspândirii celulare osteoblastice, a legării și a fenotipului. Biologie celulară și moleculară (Noisy-le-Grand, Franța) 1995;41(8):1081–1091.
34. Kawase M., Miura N., Kurikawa N., et al. Imobilizarea factorului de creștere tripeprid glicil-L-histidil-L-lisină pe stilbazolul quaternizat cu polivinilalcool (PVA-SbQ) și utilizarea sa ca ligand pentru legarea hepatocitelor. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 1999;22(9):999–1001. doi: 10.1248/bpb.22.999.
35. Lutsenko S, Bhattacharjee A, Hubbard AL. Mașinile de manipulare a cuprului în creier. Metallomics. 2010;2(9):596–608. doi: 10.1039/c0mt00006j.
36. Hawk SN, Lanoue L, Keen CL, Kwik-Uribe CL, Rucker RB, Uriu-Adams JY. Embrionii de șobolan cu deficit de cupru sunt caracterizați prin activitate scăzută a superoxid dismutazei și niveluri crescute de anioni de superoxid. Biology of Reproduction. 2003;68(3):896–903. doi: 10.1095/biolreprod.102.009167.
37. Bayer TA, Schäfer S, Simons A, et al. Dieta cu stabilizează activitatea enzimei cerebrale superoxide dismutase 1 și reduce producția de amiloid Aβ la șoarecii transgenici APP23. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2003;100(24):14187–14192. doi: 10.1073/pnas.2332818100.
38. Arul V, Gopinath D, Gomathi K, Jayakumar R. GHK peptide incorporated collagenous matrix: un biomaterial nou pentru vindecarea ranilor dermice la șobolani. Journal of Biomedical Materials Research. 2005;73(2):383–391. doi: 10.1002/jbm.b.30246.
39. Miller DM, DeSilva D, Pickart L, Aust SD. Efectele chelatului Cu(II) cu glicil-histidil-liziul asupra peroxidării lipidice dependente de fierbințeală. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1990;264:79–84. doi: 10.1007/978-1-4684-5730-8_11.
40. Alberghina M, Lupo G, La Spina G, et al. Efectul citoprotector al complexelor de cupru(II) împotriva daunelor induse de etanol asupra mucoasei gastrice a șobolanilor. Journal of Inorganic Biochemistry. 1992;45(4):245–259. doi: 10.1016/0162-0134(92)84013-d.
41. Beretta G, Artali R, Regazzoni L, Panigati M, Facino RM. Glycyl-histidyl-lysine (GHK) este un inhibitor al α,β-4-hidroxi-trans-2-nonenal: o comparație cu carnosina. Insights into the mechanism of reaction by electrospray ionization mass spectrometry, 1H NMR, și tehnici computaționale. Chemical Research in Toxicology. 2007;20(9):1309–1314. doi: 10.1021/tx700185s.
42. Beretta G, Arlandini E, Artali R, Anton JM, Maffei Facino R. Capacitatea de secvențiere a acroleinei a tripeptidului endogen glicil-histidil-lizin (GHK): caracterizarea produselor de conjugare prin ESI-MSn și calcule teoretice. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
43. Park JR, Lee H, Kim SI, et al. Complexul tri-peptide GHK-Cu amelioră leziunea pulmonară acută indusă de lipopolisaharide la șoareci. Oncotarget, 2016, 7(36): 58405.
44. Gao M, Chen L, Yu H, et al. Diosgenin reglează în mod negativ căile de sinteză a proteinei NF-κB p65/p50 și a MAPK-ului p38 și atenuează leziunea pulmonară acută indusă de lipopolizaharida la șoareci. International Immunopharmacology, 2013, 15(2): 240–245.
45. Liu T, Zhang L, Joo D, et al. Semnalizarea NF-κB în inflamație. Transducția semnalului și terapia țintită, 2017, 2(1): 1–9.
46. Căile de semnalizare MAPK Kaminska B ca ținte moleculare pentru terapia antiinflamatorie – de la mecanismele moleculare la beneficiile terapeutice. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Proteins and Proteomics, 2005, 1754(1–2): 253–262.
47. Yong HY, Koh MS, Moon A. Inhibitorii p38 MAPK pentru tratamentul bolilor inflamatorii și cancerului. Opinie expertă privind medicamentele de investigație, 2009, 18(12): 1893–1905.
48. Zhou XM, Wang GL, Wang XB, et al. Peptida GHK inhibă fibroza pulmonară indusă de bleomicină la șoareci prin suprimarea tranziției epiteliu-mesenchymal mediată de TGFβ1/Smad. Frontiers in Pharmacology, 2017, 8: 904.
49. Mukherjee K, Lee A, Zhu L, et al. Deficitul de somn duce la deteriorarea cognitivă la șoarecii în vârstă; acest fenomen este ameliorat de rapamicină. Aging Pathobiology and Therapeutics, 2019, 1(1): 05–09.
50. Kalaria RN. Baza vasculară a degenerării cerebrale: controlul fragil și factorii de risc pentru demență. Nutrition Reviews. 2010;68(supplement 2):S74–S87. doi: 10.1111/j.1753-4887.2010.00352.x.
51. Pollard JD, Quan S, Kang T, Koch RJ. Efectele tripeptidei de cupru asupra creșterii și expresiei factorilor de creștere la fibroblaste normale și iradiate. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
52. Sensenbrenner M, Jaros GG, Moonen G, Meyer BJ. Efectul mediului condiționat asupra diferențiării celulelor nervoase. Experientia. 1980;36(6):660–662. doi: 10.1007/BF01970123.
53. Lindner G, Grosse G, Halle W, Henklein P. Efectul unui tripeptide sintetic cultivat in vitro in tesutul nervos. Zeitschrift für Mikroskopisch-Anatomische Forschung. 1979;93(5):820–828. (Ger).
54. Ahmed MR, Basha SH, Gopinath D, Muthusamy R, Jayakumar R. Regresarea inițială a factorilor de creștere și a mediatorilor inflamatori în timpul regenerării nervilor în prezența tuburilor de colagen încorporați cu peptide adezivi celulari. Journal of the Peripheral Nervous System. 2005;10(1):17–30. doi: 10.1111/j.1085-9489.2005.10105.x.
55. Pickart L. Utilizarea GHL-Cu ca agent de vindecare a rănilor și antiinflamator. Brevetul de invenție al Statelor Unite nr. 4.760.051, din iulie 1988.
56. Downey D, Larrabee WF, Voci V, Pickart L. Accelerarea vindecării rănilor prin utilizarea Cu(II) glicil-histidil-lisil chirurgical Forumul Surgical. 1985;36:573–575.
57. Maquart FX, Pickart L, Laurent M, Gillery P, Monboisse JC, Borel JP. Stimularea sintezei de colagen în culturile de fibroblaste prin complexul tripeptide-cupru glicl-L-histidil-L-lisină-Cu2+. FEBS Letters. 1988;238(2):343–346. doi: 10.1016/0014-5793(88)80509-x.
58. Wegrowski Y, Maquart FX, Borel JP. Stimularea sintezei de glicozaminoglicani sulfatati prin complexul tripeptide-cupru glicil-L-histidil-L-lisina-Cu2+. Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
59. Siméon A, Emonard H, Hornebeck W, Maquart FX. Complexul tripeptide-cupru glicil-L-histidil-L-lisina-Cu2+ stimulează expresia matrixei de metaloproteinaze-2 în culturile de fibroblaste. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
60. Siméon A, Wegrowski Y, Bontemps Y, Maquart FX. Exprimarea glicozaminoglicanelor și a micilor proteoglicani în rănile de tratament: modularea prin complexul tripeptide-cupru glicil-L-histidin-L-lisină-Cu2+. Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
61. Kang YA, Choi HR, Na JI, et al. Cupru-GHK crește expresia integrinei și pozitivitatea p63 la nivelul celulelor keratinice. Archives of Dermatological Research. 2009;301(4):301–306. doi: 10.1007/s00403-009-0942-x.
62. Lamb J. The Connectivity Map: o nouă tehnică pentru cercetarea biomedicală. Nature Reviews Cancer. 2007;7(1):54–60. doi: 10.1038/nrc2044.
63. Iorio F, Bosotti R, Scacheri E, et al. Descoperirea modului de acțiune al medicamentului și repozizionarea medicamentului pe baza răspunsurilor transcripționale. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2010;107(33):14621–14626. doi: 10.1073/pnas.1000138107.
64. Hong Y, Downey T, Eu KW, Koh PK, Cheah PY. O semnatură ‘predispusă la metastaze’ pentru pacienții cu cancer colorectal sporadic cu capacitate redusă de reparare a erorilor în stadiul incipient și implicațiile acesteia pentru posibilele tratamente terapeutice. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
65. Huang P, Kishida S, Cao D, et al. Factorul de diferențiere neuronală neuroD1 reglează reducerea expresiei factorului de respingere neuronală Slit2 și promovează motilitatea celulară și formarea tumorilor la neuroblastom. Cancer Research. 2011;71(8):2938–2948. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-10-3524.
66. Fischer A, Sananbenesi F, Mungenast A, Tsai LH. Vizarea corectă a HDAC-urilor pentru tratarea tulburărilor cognitive. Trends in Pharmacological Sciences. 2010;31(12):605–617. doi: 10.1016/j.tips.2010.09.003.
67. Koch CM, Wagner W. Epigenetic-aging-signature to determine age in different tissues. Aging. 2011;3(10):1018–1027. doi: 10.18632/aging.100395.