GHK-Cu peptiid: molekulaarne struktuur, toimemehhanismid ja rakendused teadusuuringutes

GHK-Cu on looduslikult esinev vask-tripeptiidi kompleks, mis pakub teadlastele huvi tänu oma osalemisele rakulises kommunikatsioonis, rakuvälise maatriksi regulatsioonis ning kudede säilitamise ja paranemisega seotud bioloogilistes protsessides. Alates selle avastamisest 1973. aastal Loren Pickarti poolt on teadlased analüüsinud selle molekulaarset struktuuri, vase sidumise võimet, mõju geneetilisele ekspressioonile ja koostoimeid rakuliste radadega, mis osalevad põletikulistes protsessides, oksüdatiivses stressis ja kudede ümberehituses.

Seda ühendit tuvastati esmakordselt inimseerumi komponentide ja nende mõju uurimisel valkude sünteesile rakkudes. Pickart täheldas, et seerumist pärinev tegur võib mõjutada vananevate maksarakkude käitumist, stimuleerides noorematele rakkudele omaseid valgusünteesi mustreid [1]. Hilisemad uuringud võimaldasid identifitseerida tripeptiidi glütsüül-L-histidüül-L-lüsiin (GHK) ja analüüsida selle võimet moodustada stabiilne kompleks kahevalentsete vaskioonidega (Cu²⁺).

GHK koosneb kolmest aminohappest: glütsiinist, histidiinist ja lüsiinist. Vask(II)iooniga seondumisel moodustab see kompleksi, mida tavaliselt nimetatakse GHK-Cu-ks ehk vaskpeptiidiks GHK.

Seda peptiidi on avastatud inimeste bioloogilistes vedelikes, sealhulgas vereplasmas, süljes ja uriinis. Avaldatud andmete kohaselt väheneb selle kontsentratsioon plasmas vanusega – umbes 200 ng/ml-lt 20-aastaselt umbes 80 ng/ml-le 60-aastaselt [viited 2–9]. Need tähelepanekud on aidanud kaasa uuringute arengule GHK, vananemisega seotud rakuliste muutuste ja koeprotsesside regulatsiooni vaheliste seoste kohta.

Eksperimentaalsed uuringud on näidanud, et GHK-Cu võib mõjutada kollageeni sünteesi, rakuvälise maatriksi ümberkujunemist, angiogeenset signaaliülekannet ja antioksüdantsete ensüümide aktiivsust. Fibroblastide kultuurides ja loommudelites on analüüsitud ka selle mõju põletikumediaatoritele, rakkude migratsioonile ja kudede ümberkujunemisega seotud genoomse ekspressiooni mustritele.

Mõned analüüsid on seostanud GHK-d muutustega enamikus kui 4000 genoomis, mis viitab sellele, et selle bioloogiline aktiivsus võib hõlmata paljusid omavahel seotud rakuteid [9].

Geeni ekspressiooni muutused ei tähenda siiski automaatselt kudede talitluse paranemist ega soodsaid kliinilisi tulemusi. Paljud vaatlused pärinevad rakukultuuridest, arvutianalüüsidest või loomkatsetest.

GHK-Cu on seega endiselt oluline molekulaarsete ja prekliiniliste uuringute objekt, eriti vase koordinatsiooni, rakuvälise maatriksi bioloogia, oksüdatiivse stressi ja rakkude kahjustustele reageerimise kontekstis.

Mis on GHK-Cu?

GHK-Cu on koordinatsioonikompleks, mis tekib tripeptiidi glütsüül-L-histidüül-L-lüsiini seondumisel vask(II)iooniga. Vase koordineerimise võime on üks molekulaarseid omadusi, mis eristab seda paljudest teistest lühikestest peptiididest [1, 2].

Vask on asendamatu mikroelement, mis osaleb arvukates bioloogilistes protsessides. See toetab ensüümide aktiivsust, mitokondriaalset energiatootmist, antiosüdantset kaitset ning sidekeste moodustumist ja säilitamist.

Samal ajal peab vasespetsiifiline majandustegevus olema rangelt reguleeritud, sest sidumata või valesti kontrollitud vask võib osaleda reaktsioonides, mis viivad reaktiivsete hapnikuliikide tekkeni.

GHK loob molekulaarse keskkonna, mis võimaldab vase sidumist ja selle keemiliste omaduste mõjutamist. Tänu sellele koostoimele on GHK-Cu muutunud kasulikuks uurimismudeliks väikeste peptiidide rolli analüüsimisel metallide koordineerimises ja rakusignaaliülekandes.

Varajased uuringud keskendusid selle mõjule fibroblastidele ehk rakkudele, mis vastutavad paljude sidekoe komponentide tootmise ja säilitamise eest.

Fibroblastid sünteesivad kolageeni, elastiiniga seotud komponente, glükosaminoglükaane ja teisi rakuvälise maatriksi molekulaarseid komponente. Need ained vastutavad kudede mehaaniliste omaduste, organisatsiooni ja struktuurse stabiilsuse eest.

Boreli, Maquarti ja kaastöötajate uuringud on näidanud, et GHK-Cu võib mõjutada rakuvälise maatriksi metabolismi fibroblastide kultuurides isegi kontsentratsioonidel umbes 1–10 nanomooli liitri kohta (nM) [10–13].

Täheldatud toimed hõlmasid muutusi kolageeni, sulfateeritud glükosaminoglükaanide ja väikeste proteoglükaanide, näiteks dekoriini sünteesis ja lagundamises.

Mis oluline, rakuvälise maatriksi säilitamine nõuab enamat kui lihtsalt struktuursete valkude tootmise suurendamist.

Õige kudede ümberehitus põhineb maatriksi komponentide koordineeritud sünteesil, modifikatsioonil ja lagundamisel.

Maatriksi metalloproteinaasid (MMP-d) osalevad rakuvälise maatriksi lagundamises, samas kui metalloproteinaside koelised inhibiitorid (TIMP-d) aitavad reguleerida nende aktiivsust.

Eksperimentaalsetes uuringutes on täheldatud, et GHK-Cu mõjutab MMP-de aktiivsus ja inhibiitorite, nagu TIMP-1 ja TIMP-2, ekspressiooni [11, 12].

Need vaatlused viitavad seosele GHK-Cu ekspositsiooni ja maatriksi komponentide muutuste vahel. Need aga ei tõesta, et see seos kutsuks inimestel järjekindlalt esile soodsat koepõhjust.

Täiendavates prekliinilistes uuringutes analüüsiti GHK-Cu-d haavamudelites, sealhulgas haava kokkutõmbumise, pookide integreerimise, põletikulise signaalülekande ja rakkude migratsiooni katsetes [3–5].

Varasemad uuringud on käsitlenud fibroblastide reaktsiooni kiirgusvigastustele. Neis on täheldatud muutusi rakkude kasvatuses ja elujõulisuses ning kasvufaktorite ekspressioonis [14].

Katsetes analüüsiti ka immuunrakkude ja endoteelirakkude vahelisi koostoimeid, mis osalevad kudede vastuses kahjustustele [15].

Uuringud loomadel on näidanud antioksüdantse aktiivsuse ja haavadega seotud parameetrite muutusi pärast kokkupuudet GHK-Cu või sugulaspeptiide sisaldavate materjalidega [16–21].

Need tulemused on suurendanud huvi GHK-Cu vastu kui uurimistööriista rakulise vananemise, rakuvälise maatriksi regulatsiooni ning kudede vastuse analüüsimiseks oksüdatiivsetele ja mehaanilistele kahjustustele.

Kuid eksperimentaalsetes mudelites tehtud tähelepanekuid haavade sulgumise, fibroblastide käitumise või molekulaarse signaalülekande kohta ei tohiks tõlgendada tõendina terapeutilise tõhususe kohta inimestel.

GHK-Cu toimemehhanism: in vitro ja in vivo uuringute tulemused

GHK-Cu-ga seotud bioloogilised mehhanismid hõlmavad mitut omavahel seotud rada, mitte ühte kindlaksmääratud molekulaarset märklaua.

Eksperimentaalsetes uuringutes analüüsiti selle mõju geeniekspressioonile, kasvufaktorite signaalülekandele, rakuvälise maatriksi metabolismile, oksüdatiivse stressi vastusele, põletikuradadele ja rakkude koostoimele ümbritsevate kudedega.

Nende mehhanismide uurimisel kasutati rakukultuure, loomakoude ja arvutuslikke analüüse.

Geenide ekspressioon ja kopsukoe ümberehitus

Üks olulisi uuringuvaldkondi on GHK ja kroonilise obstruktiivse kopsuhaigusega (KOK) seotud geneetilise ekspressiooni mustrite vaheline seos.

Mitmekeskuselises uuringus, milles osalesid teadlased Bostoni Ülikoolist, Groningeni Ülikoolist, Briti Columbia Ülikoolist ja Pennsylvania Ülikoolist, analüüsiti emfüseemi käigus kopsu Koe hävimisega seotud geeniekspressiooni signatuure [22].

Tuvastati 127 kopsuemfüseemiga seotud geniaalne rühm ning uuriti, kas GHK võib mõjutada ebanormaalseid transkriptsioonimustreid.

Teadlased märkisid, et GHK-ga kokkupuude oli seotud transformeeriva kasvufaktori beta (TGF-β) signaalülekande muutustega.

TGF-β on rakkude diferentseerumise, ekstratsellulaarse maatriksi sünteesi, koe ümberehituse ja fibroosi oluline regulaator.

Selle toime sõltub bioloogilisest kontekstist. Kuigi TGF-β osaleb kudede normaalses säilitamises, võib häirunud signaalülekanne aidata kaasa ka maatriksikomponentide patoloogilisele kuhjumisele ja fibroosi tekkimisele.

Laboratoorsetes katsetes COPD-patsientidelt saadud kopsufibroblastidega seostus GHK-ga kokkupuude kollageeni kokkutõmbumise ja reorganiseerimise võime paranemisega.

Teadlased täheldasid ka integriin $\beta 1$ suurenenud ekspressiooni, mis viitab integriinisõltuvate rakulistele vastastikmõjudele võimaliku osalemise [22, 23].

Integriinid on valgud, mis aitavad rakkudel suhelda neid ümbritseva rakuvälise maatriksiga. Nad osalevad rakkude adhesioonis ja migratsioonis, mehaaniliste signaalide edastamises ning kudede organiseerimises.

Need vaatlused viitavad sellele, et GHK võib mõjutada seoseid TGF-β signalingi, integriinide ekspressiooni ja rakuvälise maatriksi regulatsiooni vahel.

Katsed ei tõesta siiski, et GHK-Cu pöörab KOK-i kulu ümber või taastab patsientidel kopsufunktsiooni.

Tulemused käsitlevad geeniekspressiooni mustreid ja rakkude käitumist eksperimentaalsetes tingimustes.

Kasvajatega seotud genede ekspressioon ja rakkude proliferatsioon

GHK-d analüüsiti ka vähiga seotud geeniivõrgustikke käsitlevates uuringutes.

Hong ja kaastöölised uurisid jämesoolevähi progresseerumise ja selle metastaatilise potentsiaaliga seotud geeni ekspressiooni mustreid [7, 24].

Hilisemad andmete tõlgendused seostasid GHK-d ligikaudu 70% valitud metastaasidega seotud geenide rühma ekspressiooni vähenemisega.

Selles kontekstis arutleti muuhulgas MAP3K5, LMNA, APP ja NFATC2 geenide üle.

Need genid osalevad erinevates bioloogilistes protsessides, sealhulgas intratsellulaarses signaaliedastuses, raku tuuma organiseerumises, rakkude regulatsioonis ja transkriptsioonilistes vastustes.

Metastaasidega seotud geniaalset ekspressioonimuutust ei tohiku siiski samastada tõestatud metastaaside ennetamisega.

Geeniekspressiooni signatuurid võivad aidata tuvastada haiguse kuluga seotud radu, kuid nende modifikatsioon ei kujuta endast iseseisvat kliinilist tõendit kasvajavastase toime kohta.

Teistes laboriuuringutes analüüsiti GHK ekspositsiooni inimese vähirakuliinides.

Neuroblastoomi ja rinnavähi mudeleid hõlmavates katsetes täheldati nanomolaarsete kontsentratsioonide juures muutusi rakkude apoptoosis ja proliferatsioonis [25].

Apaptoos on reguleeritud rakusurma vorm, mis osaleb kudede arengus ja rakulise homöostaasi säilitamises.

Apoptoosi häiretel on vähibioloogias oluline tähendus, kuna pahaloomulised rakud võivad välja töötada mehhanisme, mis võimaldavad vältida normaalseid rakusurmani viivaid signaale.

Apoptoosi täheldamine vähirakukultuurides ei tõenda siiski selektiivset vähivastast toimet inimorganismis.

Rakuliinid erinevad tegelikest kasvajatest arhitektuuri, ainevahetuse, mikrokeskkonna, immuunsüsteemiga interaktsioonide ja ekspositsioonitingimuste poolest.

Seetõttu on need tulemused olulised kasvajate tekke mehhanismide uurimisel, mitte aga kliinilise onkoloogia kinnitatud rakendustes.

Fibroblastide aktiivsus ja rakuvälise maatriksi ümberehitus

Fibroblastide uuringud on GHK-Cu käsitleva teaduskirjanduse teine oluline element.

Vask-tripeptiidkompleksidega kokkupuutel täheldati muutusi kollageeni sünteesis, maatriksi lagunemises ja kasvufaktorite ekspressioonis [9, 26].

Kollageeni süntees on vaid üks rakuvälise maatriksi regulatsiooni elemente.

Koe õige struktuuri säilitamiseks peab maatriks samuti alluma kontrollitud lagunemisele ja ümberkorraldamisele.

GHK-Cu on seostatud maatriksi metalloproteinaaside aktiivsuse muutuste ning TIMP-1 ja TIMP-2 ekspressiooniga.

Need tulemused viitavad sellele, et ühend võib mõjutada nii maatriksi komponentide sünteesi kui ka lagunemist.

Nende muutuste suund ja tähendus sõltuvad eksperimentaalsest mudelist ja ümbritsevatest bioloogilistest tingimustest.

Kiiritatud fibroblastide mudelites analüüsisid teadlased, kas vasktripeptiidid mõjutavad rakkude kasvu ja kasvufaktorite ekspressiooni pärast kiirgusega kokkupuudet [26].

Kirjanduses käsitletud geneetilise ekspressiooni analüüsides on täheldatud muutusi ka DNA parandamisega seotud radades. Need hõlmasid 47 suurenenud ekspressiooniga genoomi ja viit genoomi, mille ekspressioon vähenes vähemalt 50% [9, 26].

Need tulemused viitavad rakkude transkriptsioonilise vastuse muutustele.

Need ei tõesta siiski iseenesest DNA täielikku paranemist, raku vananemise ümberpööramist ega kudede normaalse talitluse taastumist.

Angiogeenne signaalülekanne ja kasvufaktorid

GHK-Cu-d uuriti ka angiogeneesi ehk olemasolevatest veresoonestruktuuridest uute veresoonte moodustumise protsessi kontekstis.

Angiogenees osaleb kudede arengus, kahjustustele reageerimises ja veresoonte võrgustiku säilitamises.

Eksperimentaalsetes uuringutes analüüsiti seoseid GHK-d sisaldavate materjalide ja selliste tegurite vahel nagu vaskulaarne endoteeli kasvufaktor (VEGF) ja aluseline fibroblastide kasvufaktor (bFGF) [27].

VEGF osaleb endoteliaalsete rakkude signaalülekandes ja veresoonte arengus.

Aluseline FGF osaleb rakkude proliferatsioonis ja diferentseerumises ning koede vastuses, mis hõlmab vaskulaarseid ja sidekoe rakke.

Mõnes uuringus on täheldatud nende tegurite suurenenud ekspressiooni või sekretsiooni pärast kokkupuudet GHK-ga seotud materjalidega.

Integrinidest sõltuvat signalisatsiooni on samuti arutatud kui nende mõjude võimalikku elementi.

VEGF või bFGF ekspressiooni muutused ei tõenda siiski funktsionaalsete veresoonte moodustumist.

Korrektne angiogenees hõlmab mitut etappi, sealhulgas endoteelirakkude migratsiooni, veresoonte moodustumist, nende stabiliseerumist ja lülitumist olemasolevasse vereringesse.

Olemasolevad tulemused pakuvad seega mehaanilisi tõendeid, mis on olulised veresoonte uuringute jaoks, kuid ei kinnita veresoonte talitlusega seotud kliinilist kasu.

GHK-Cu struktuur ja biokeemia

GHK-Cu molekulaarset struktuuri on uuritud erinevate analüütiliste ja spektroskoopiliste tehnikate abil.

Need hõlmasid röntgenkristallograafiat, elektronparamagnetilist resonantsi (EPR), röntgenkiirguse neeldumisspektroskoopiat, prootonmagnitresonantsi ja keemilise tiitrimise meetodeid [28–30].

Need meetodid aitasid theeliitkompleksis vaskioonide koordinatsioonikeskkonda andmete põhjal iseloomustada.

Vase koordinatsioon ja molekulaarne geomeetria

GHK koosneb kolmest aminohappest, mis on paigutatud glütsiini-histidiini-lüsiini järjestusse.

Histidiini jäägil on eriline tähendus, sest selle imidasoolrühm saab osaleda metalliioonide koordineerimises.

Struktuurianalüüsid näitavad, et vask(II) võib moodustada peptiidimolekulis elektronide doonoritena toimiva lämmastiku aatomiga kolm koordinatsioonsidet.

Nende hulka kuuluvad glütsiini aminorühma lämmastikuatom, glütsiini-histidiini sidemega seotud deprotoneeritud amiidne lämmastikuatom ja histidiini imidasooltuuma lämmastikuatom [28–30].

Neljandat koordinatsioonipositsiooni võib keemilisest keskkonnast olenevalt hõivata teine doonorgrupp.

Seda paigutust kirjeldatakse sageli ruut-planaarse või ruut-planaarse lähedase geomeetriana.

Täpne geomeetria võib sõltuda pH-st, lahusti tingimustest, täiendavate ligandide olemasolust ja uuritavast kompleksivormist.

Vase koordinatsioon mõjutab GHK-Cu keemilisi omadusi ja eristab seda kompleksset ühendit sidumata GHK peptiidist.

Peptiidi ja vase vaheline struktuuriline seos on oluline, kuna metalli sidumine võib muuta molekuli reaktiivsust ja selle koostoimeid teiste bioloogiliste ühenditega.

Joonis: GHK-Cu kompleksi molekulaarne struktuur

GHK-Cu molekulaarne struktuur näitab, kuidas glütsüül-histidüül-lüsiinpeptiid pakub lämmastikku sisaldavaid koordinatsioonikohti, mis võimaldavad vase(II) sidumist.

Struktuursetes ja spektroskoopilistes uuringutes tuvastati aminorühma lämmastik, peptiidsideme amiidne lämmastik ja histidiini imidasooltuuma lämmastik oluliste elementidena, mis osalevad vasa sidumises.

Koordinatsioonikeskkond aitab selgitada, miks GHK-d uuritakse vaske siduva peptiidi ja metallide ja peptiidide vaheliste koostoimete mudelina.

Interaktsioonid albumiini ja teiste vaske siduvate molekulidega

Füsioloogilisel pH-l võib GHK-Cu osaleda erinevates koordinatsioonitasakaaludes, milles osalevad täiendavad ligandid.

Lau ja Sarkar analüüsisid vase(II), GHK, histidiini sisaldavate molekulide ja seerumalbumiini vahelisi koostoimeid [28–30].

Seerumalbumiin on vereplasmas suurtes kogustes leiduv valk. See osaleb paljude ainete, sealhulgas teatud metalliioonide transpordis ja sidumises.

Kirjanduses on kirjeldatud nii GHK kui ka albumiini suurt afiinsust vase sidumisel. Uuritud tingimustes saadi väärtused ligikaudu log₁₀ 16,44 GHK jaoks ja log₁₀ 16,2 albumiini jaoks.

Need väärtused viitavad sellele, et GHK võib osaleda vaske siduvates konkurentsinteraktsioonides.

Vases mulla jaotus bioloogilistes vedelikes ei sõltu siiski ainult kahe eraldatud molekuli sidumistugevusest.

Vases kättesaadavust mõjutavad ka konkreetsete ainete kontsentratsioonid, konkureerivad ligandd, valkude vastastikmõjud ja rakulised transpordisüsteemid.

GHK võime vaske siduda on seega aluseks metalli transpordi ja koordinatsioonitasakaalude uuringutele.

See ei tõenda siiski, et GHK-Cu viib vaske ohutult kõikidesse kudedesse ega seda, et see hoiab ära kõik vasega seotud oksüdatsioonireaktsioonid.

Vasest sõltuvad ensüümid ja redoksprotsesside regulatsioon

Vask on hädavajalik paljude oluliste ensüümide aktiivsuseks.

Lüsiinoksüdaas osaleb ristsidemete moodustumises kollageeni- ja elastiinimolekulide vahel.

Vask-tsink-superoksiiddismutaas, mida tavaliselt nimetatakse SOD1-ks, toetab antoksüdantset kaitset, katalüüsides superoksiidradikaalide muundumist vähem reaktiivseteks saadusteks.

Tsütokroom c oksüdaas osaleb mitokondriaalses elektronide transpordis ja rakuenergia tootmises.

Kuna GHK seob vaskset, analüüsisid teadlased, kas GHK-Cu võib mõjutada selle metalli kättesaadavust ja sellega seotud biokeemilisi protsesse.

Vaskpeptiidi olemasolu ei tähenda siiski, et metall antakse otse edasi igale vasepõhisele ensüümile.

Rakkudel on spetsialiseerunud transporterid, siduvad valgud ja süsteemid, mis reguleerivad vase intratsellulaarset jaotust.

Need mehhanismid on olulised, sest vaba või valesti reguleeritud vask võib osaleda oksüdatsioonireaktsioonides.

Teatud tingimustes võivad vaskseotud redoksreaktsioonid aidata kaasa reaktiivsete keemiliste vormide tekkele.

Seetõttu uuriti GHK-Cu potentsiaalset mõju miedzi reaktiivsusele ja oksüdatsiooniprotsessidele [31, 32].

See sõltuvus on keemiliselt keeruline. Vase sidumine võib muuta metalli reaktiivsust, kuid bioloogilised tagajärjed sõltuvad kogu keemilisest keskkonnast.

Aldehüüdide sidumine ja antioksüdantne keemia

GHK-d uuriti ka seoses võimega reageerida teatud aldehüüdidega, mis tekivad lipiidide peroksüdatsiooni käigus.

Lipiidide peroksidatsioon hõlmab oksüdatsioonireaktsioone, mis mõjutavad rakumembraanide lipiide ja muid lipiide sisaldavaid struktuure.

Nende reaktsioonide tulemusena võivad tekkida reaktiivsed aldehüüdid, nagu 4-hüdroksünonenaal ja akroleiin.

Mõlemat ühendit uuritakse, kuna need võivad interakteeruda valkude ja teiste rakumolekulidega.

Keemilistes uuringutes on näidatud, et GHK võib nende aldehüüdidega moodustada reaktsioonisaadusi, mis viitab nende võimalikule sidumisvõimele katsetingimustes [31, 32].

Need tulemused annavad teavet GHK keemilise reaktiivsuse kohta.

Ent võime reageerida aldehüüdidega laboritingimustes ei tõesta, et peptiid hoiab ära kudede oksüdatiivseid kahjustusi inimestel.

Reagentide kontsentratsioonid, konkureerivate bioloogiliste molekulide olemasolu ja reaktsioonikiirus on olulised võimalike bioloogiliste tagajärgede hindamisel.

rakkude adhesioon ja interaktsioonid rakuvälise maatriksiga

GHK-Cu-d uuriti ka rakkude kinnitumise ja nende rakuvälise maatriksi materjalidega interaktsioonide kontekstis.

Rakkude adhesioon on kudede õigeks organiseerumiseks hädavajalik, kuna rakud peavad ümbritsevat keskkonda ära tundma ja sellega suhestuma.

Osteoblastiliste rakkude ja hepatotsüütide adhesioonimudelitega seotud uuringutes analüüsiti GHK-ga seotud materjalide mõju rakkude levimisele, adhesioonile ja fenotüübile [33, 34].

Nendel uuringutel on tähtsus biomaterjalide väljatöötamisel, milles peptiide saab integreerida insenertehnilistesse pindadesse või nende külge kinnitada.

Vaadeldavad efektid sõltuvad peptiidi tüübist, materjali koostisest, rakutüübist ja katsetingimustest.

Need pakuvad teavet peptiidide ja pindade ning rakkude ja maatriksi vaheliste koostoimete kohta, mitte aga otseseid tõendeid kudede regeneratsiooni kohta inimestel.

GHK-Cu rakendused teadusuuringutes

GHK-Cu-d on uuritud paljudes molekulaarsete ja prekliiniliste uuringute valdkondades.

Need hõlmavad oksüdatiivse stressi bioloogiat, põletikulist signaaliülekannet, fibroosi, kopsukahjustusi, neuraalseid vastuseid, veresoonte regulatsiooni, rakuvälise maatriksi ümberehitust ja geeniekspressiooni analüüsi.

Järgmised sektsioonid esitavad peamised katsetulemused ja nende piirangud.

Antoksüdantse toime ja redoksprotsesside uuringud

Vask sõltuvad antioksüdantsed ensüümid on oluline osa rakkude kaitsest oksüdatiivse stressi eest.

Üks näide on SOD1, mis vajab nõuetekohaseks toimimiseks vaske ja tsinki.

Vase puudust käsitlevad uuringud on näidanud, et selle ebapiisav kättesaadavus võib mõjutada SOD1 aktiivsust ja suurendada oksüdatiivse stressiga seotud parameetrite väärtusi [35–38].

Need tulemused kinnitavad vaseainevahetuse õige regulatsiooni bioloogilist tähtsust.

Vaskdefitsiidi või selle sisalduse taastamise uuringuid dieedis ei saa siiski automaatselt võtta tõendina GHK-Cu identse toimimise kohta.

Eristus on oluline, kuna konkreetse vaskompleksi bioloogiline käitumine sõltub selle molekulaarsest struktuurist, jaotusest ja koostoimest selle metalli metabolismi reguleerivate rajadega.

Eksperimentaalsetes uuringutes, mis hõlmasid GHK-d ja vask-tripeptiidi komplekse sisaldavaid biomaterjale, analüüsiti antioksüdantseid vastuseid ja koega seotud parameetreid.

Osa uuringutest keskendus sellele, kas GHK-Cu mõjutab ferritiiniga seotud lipiidide peroksüdatsiooni.

Ferritiin on valk, mis osaleb rakusiseses raua talletamises.

Raud võib osaleda oksüdatsioonireaktsioonides, kui see esineb reaktiivsetes vormides.

Uuringud on näidanud, et GHK-ga koordineeritud vask võib teatud eksperimentaalsetes tingimustes mõjutada ferritiinist sõltuvat lipiidide peroksüdatsiooni [39, 40].

Need vaatlused annavad teavet vaskkomplekside vaheliste koostoimete, rauaga seotud protsesside ja oksüdatsioonireaktsioonide keemia kohta.

Täiendavad keemilised uuringud analüüsisid GHK reaktsioone lipiidide peroksüdatsiooni produktidega, nagu 4-hüdroksinonenaal ja akroleiin [41, 42].

Tulemused õigustavad edasisi uuringuid GHK kui aldehüüdidega keemilistes reaktsioonides osaleda suutelise molekuli kohta.

Siiski ei tõesta keemilises testis või rakumudelis ilmnenud antioksüdantne aktiivsus kliinilist kaitset oksüdatiivsete kahjustuste eest.

Põletikuline signaalükanne ja tsütokiinide regulatsioon

Põletikuline protsess hõlmab immuunrakkude, signaalvalkude ja koereaktsioonide vahelist koordineeritud koostoimet.

Mitmes laboratoores uuringus analüüsiti GHK-Cu mõju põletikulistele radadele.

Makrofagilaadseid RAW 264.7 ja sooleepiteeli Caco-2 rakke kasutavates uuringutes täheldati oksüdatiivsete ja põletikuliste parameetrite muutusi pärast kokkupuudet GHK-Cu-ga.

Need hõlmasid reaktiivsete hapnikuliikide tekke vähenemist, glutatiooniga seotud antioksüdantsete parameetrite väärtuste suurenemist ning põletikuliste vahendajate, nagu TNF-α ja IL-6, muutusi [43–47].

Teadlased analüüsisid ka signaaliradu, mis hõlmavad tuumafaktorit kappa B (NF-κB) ja mitogeen-aktiveeritud valkunaasi p38 (p38 MAPK).

NF-κB osaleb põletiku, immuunsuse, rakkude ellujäämise ja stressivastusega seotud geenide regulatsioonis.

p38 MAPK signaalrada osaleb rakureaktsioonides, mis on seotud põletikumediaatorite ja keskkonnastressiga.

Eksperimentaalsetes uuringutes on seostatud GHK-Cu-d NF-κB p65 ja p38 MAPK signaalülekande muutustega.

Need tulemused viitavad sellele, et ühend võib laboritingimustes mõjutada põletikulises vastuses osalevaid radu.

Kõik laiemas arutelus tsiteeritud uuringud ei hinnata siiski otseselt GHK-Cu-d. Osa publikatsioonidest esitab üldist teavet põletikuteede või muude eksperimentaalsete ühendite kohta.

Seetõttu ei tõenda pelgalt NF-κB või p38 MAPK uuringute olemasolu, et GHK-Cu avaldab teatud kindlat kliinilist põletikuvastast toimet.

Need tulemused on kõige kasulikumad võimalike molekulaarsete koostoimete tundmaõppimisel ja edasisi katseid nõudvate küsimuste tuvastamisel.

Fibroosi, kopsukahjustuse ja neuroprotektsiooni mudelid

Fibroos seisneb rakuvälise maatriksi komponentide ebanormaalses kogunemises või organiseerumises kudedes.

See võib areneda vastusena püsivatele kahjustustele, põletikule või muutunud rakusignalisatsioonile.

GHK-d uuriti eksperimentaalsetes kopsufibroosi mudelites selle kirjeldatud mõju tõttu fibroblastide aktiivsusele ja TGF-β-ga seotud radadele.

Bleomütsiinist põhjustatud kopsufibroosi hiiremudelis täheldasid teadlased koepaksuse muutusi, põletikuliste rakkude infiltratsiooni ja epiteel-mesenhüümse üleminekuga seotud radu [48].

Uuringus analüüsiti TGF-β1/Smad signaalijada, mis osaleb maatriksi moodustamise ja fibriinilisusega seotud rakulistes vastustes.

Need vaatlused viitavad sellele, et GHK võib loomkatsetes mõjutada valitud fibroosiga seotud radasid.

Kuid keemiliselt esilekutsutud hiire mudelil saavutatud tulemus ei tõenda tõhusust inimeste kopsufibroosi ravis.

Bioloogilised mehhanismid, haiguse kulg ja kliinilised asjaolud võivad oluliselt erineda.

GHK-ga seotud neurobioloogilistes uuringutes on analüüsitud ka oksüdatiivset stressi, põletikulist signaalülekannet ja võimalikke koostoimeid geneetilise regulatsiooni radadega.

Mõned uuringud seovad neid mehhanisme histooni deatsetalaas 2-ga (HDAC2), ensüümiga, mis osaleb kromatiini ja genoomse ekspressiooni regulatsioonis.

Ent viidatud kirjandus vananevate hiirte kognitiivsete muutuste ja HDAC-ga seotud mehhanismide kohta sisaldab ka uuringuid, mis ei kinnita otseselt GHK-Cu spetsiifilist toimet [49].

Seetõttu tuleb väited GHK-Cu kognitiivseid funktsioone parandava, neuropõletikku vähendava või HDAC2 otseselt reguleeriva toime kohta selgelt eraldada teiste eksperimentaalsete sekkumiste uuringute tulemustest.

Olemasolevad tõendid õigustavad huvi mehhaaniliste uuringute vastu, kuid ei kinnita kindlat neuroprotektiivset toimet inimestel.

Vaatlused angiogeneesi ja veresoonte bioloogia mudelites

Angiogenees on kudede arenemisel ja paranemisel hädavajalik protsess.

See hõlmab uute veresoonte teket ja nõuab endoteelirakkude, kasvufaktorite, rakuvälise maatriksi komponentide ja ümbritsevate kudede vahelisi koordineeritud koostoimeid.

GHK-Cu-d on uuritud veresoonte signaalülekande ja koe ümberehitusega seotud eksperimentaalsetes süsteemides.

Mõnedes uuringutes on täheldatud angiogeneesiga seotud tegurite, sealhulgas VEGF-i ja bFGF-i muutusi [50, 51].

Need valgud osalevad endoteelirakkude aktiivsuses, veresoonte arengus ja rakuvastuses kahjustustele.

Teadlased analüüsisid ka seoseid GHK-ga seotud ühendite ja strukturaalsete valkude, näiteks kolageeni ja elastiini vahel.

Kollageen vastutab kudede tugevuse eest, elastiin aga toetab nende võimet venida ja naasta oma algsesse vormi.

Mõlemad valgud on olulised veresoonte struktuuri ja rakuvälise maatriksi organiseerumise jaoks.

Kasvufaktorite ekspressiooni või maatriksvalkude sünteesi muutused ei pea siiski tähendama verevoolu paranemist.

Funktsionaalne veresoonte taastamine hõlmab täiendavaid protsesse, sealhulgas veresoonte moodustumist, küpsemist, integreerumist ja füsioloogilist regulatsiooni.

Mõnedes laiemates veresoonte taastamist käsitlevates käsitlustes mainitakse samuti trombivastast toimet ja veresoonte laiendamist.

Need on eraldiseisvad füsioloogilised protsessid ja ei tohhi eeldada, et need tulenevad otseselt GHK-Cu-ga kokkupuutest ilma selle konkreetse ühendi kohta käivate piisavate tõenditeta.

Seetõttu jäävad praegused tulemused oluliseks eelkõige angiogeneesi ja veresoonte bioloogia eksperimentaalsetes uuringutes.

Tõendid neuroni- ja neurotroofsetest mudelitest

Neuronite areng ja paranemine hõlmavad kasvufaktorite osalust, interaktsioone rakuvälise maatriksiga, rakkude migratsiooni ja neuriitide pikenemist.

Neuriitide kasv on üks eksperimentaalseid parameetreid, mida kasutatakse neuronite diferentseerumise ja arengu uurimiseks.

Varajastes närvikoekultuuridega tehtud uuringutes analüüsiti peptiidide ja konditsioneeritud söötmete mõju neuronite diferentseerumisele [52, 53].

Need uuringud on aidanud kaasa lühikeste peptiidide laiemale huvile kui rakkude käitumise potentsiaalsetele regulaatoritele.

GHK-ga seotud materjale analüüsiti ka eksperimentaalsetes närvide regeneratsiooni süsteemides.

Ühes uuringus viidi sisse peptiid, mis toetab rakkude adhesiooni kollageenitorudesse, mida kasutatakse lõigatud närvilõikude ühendamiseks [54].

Teadlased registreerisid muutusi kasvufaktorites ja põletikumediaatorites, sealhulgas närvikasvufaktoris (NGF) ning neurotrofiinides NT-3 ja NT-4.

Täiendavad vaatlused hõlmasid aksonite parameetreid ja Schwanni rakkude reaktsioone.

Schwanni rakud on perifeerse närvisüsteemi oluline osa. Need toetavad aksoneid ja osalevad perifeersete närvide vigastustele reageerimisel.

Siiski ei tohiks peptiide sisaldavate kollageenjuhtmete abil saadud tulemusi automaatselt omistada vabalt ringlevale GHK-Cu-le.

Vaadeldavaid efekte võivad mõjutada biomaterjal, kohalik keskkond, peptiidi esitlemise viis ja kasutatud eksperimentaalne mudel.

Samamoodi ei tõesta kasvufaktorite ekspressiooni või aksonite arvu suurenemine eksperimentaalses süsteemis funktsionaalset neuroloogilist regeneratsiooni inimestel.

Neid uuringuid on kõige parem tõlgendada peptiide sisaldavate biomaterjalide ja neurotrofilise signaaliülekande analüüsidena.

Geenide regulatsioon ja maatriksi ümberkorraldamine

Geeniekspressiooni uuringud on muutunud GHK ja GHK-Cu teadusliku arutelu oluliseks osaks.

Varajased eksperimendid keskendusid haavadega seotud rakulistele vastustele, sealhulgas fibroblastide käitumisele, kolageni tootmisele ja rakuvälise maatriksi organiseerumisele [55, 56].

Maquarti ja kaastöötajate hilisemad uuringud analüüsisid GHK-Cu mõju kollageeni sünteesile ja maatriksiga seotud molekulidele [57–59].

Fibroblastide kultuuri kasutavates katsetes täheldati kollageeni tootmise muutusi madalatel kontsentratsioonidel.

Teistes uuringutes analüüsiti sulfaatitud glükoosaminoglükaane ja väikseid proteoglükaane.

Need osakesed osalevad rakuvälise maatriksi organiseerimises, niiskustaseme säilitamises, mehaaniliste omaduste kujundamises ning rakkude ja ümbritsevate kudede vahelistes vastastikmõjudes.

GHK-Cu on seostatud ka maatriksi metalloproteinaaside ekspressiooni muutustega, sealhulgas MMP-2-ga [59].

Sellel on tähtsus, sest rakuvälise maatriksi säilitamine nõuab nii kontrollitud lagundamist kui ka sünteesi.

Pelk kolageeni tootmise suurenemine ei tõenda kudede organisatsiooni paranemist.

Sarnaselt võib MMP-de suurenenud aktiivsus viia erinevate tagajärgedeni sõltuvalt koetüübist ja bioloogilisest kontekstist.

Uuringud viitavad seega, et GHK-Cu võib maatriksi muundumisi mõjutada mitme koostoimiva raja kaudu.

Need tähelepanuhapped ei tõesta siiski armideta paranemist ega ennustatavat kudede regeneratsiooni inimestel.

Täiendavates katsetes täheldati muutusi selliste molekulide osas nagu dekoriin, dermatüülsulfaat ja kondroitiinsulfaat [60].

Dekoriin on väike proteoglükaan, mis on seotud kollageeni organiseerimise ja rakuvälise maatriksi regulatsiooniga.

Dermataansulfaat ja kondroitiinsulfaat kuuluvad glükosaminoglükaanidesse, mis mõjutavad sidekoe struktuuri ja omadusi.

Nende ekspressiooni või sünteesi muutused annavad teavet maatriksi ainevahetuse kohta.

Need siiski ei tõenda iseseisvalt kudede tugevuse paranemist, nende välimust ega kliinilisi paranemistulemusi.

Integriinide ekspressioon ja epidermise rakkude uuringud

Keratinotsüüdid on epidermise peamine rakutüüp.

Nad osalevad naha barjääri moodustamises, rakkude diferentseerumises ja koevigastustele reageerimises.

Soul National University teadlased uurisid vaskpeptiidi GHK mõju integriinide ekspressioonile ja p63-positiivsete rakkude esinemisele keratinotsüütides [61].

Integriinid osalevad rakkude kinnitumises ja suhtluses rakuvälise maatriksiga.

Valgul p63 on roll epiteeli arengus ja teatud epiteelirakkude populatsioonide säilitamises.

Uuringus täheldati integriinide suurenenud ekspressiooni ja suuremat p63-positiivsete rakkude osakaalu pärast kokkupuudet vasepeptiidiga GHK.

Need vaatlused viitavad võimalikule mõjule epiteeli säilitamisega seotud rakulistele omadustele.

Kuid nende markerite muutused ei tõenda iseenesest suurenenud naha regeneratsiooni inimestel.

Tulemused piirduvad kasutatud rakumudelite ja analüüsitud parameetritega.

Suuremahuline geeniekspressiooni profileerimine

Arvutusmeetodid on suurendanud võimalusi analüüsida erinevate ühendite mõju geeniekspressioonivõrgustikele.

Ühenduvuskaart, mida sageli lühendatakse cMap, on teaduslik ressurss, mida kasutatakse bioloogiliste seisundite ja keemiliste ainetega kokkupuutega seotud geeni ekspressiooni mustrite võrdlemiseks.

Seonduvaid arvutuslikke lähenemisviise, sealhulgas MANTRA-t, on kasutatud ühendite ja transkriptsiooniliste vastuste vaheliste seoste uurimiseks [62, 63].

GHK-d arutleti selles kontekstis selle seoste tõttu ulatuslike geneetilise ekspressiooni mustrite muutustega.

Ühes analüüsis märgiti 268 suurenenud ekspressiooniga genoomi ja 167 vähenenud ekspressiooniga genoomi.

Muudes uuringutes on GHK seostatud suuremat hulka gene ja radu hõlmavate muutustega [9, 62–64].

Need tulemused viitavad sellele, et GHK-ga seotud vastused võivad hõlmata mitmeid bioloogilisi süsteeme, mitte ühteainsat molekulaarset märklaua.

Sellegipoolest nõuavad genoomse ekspressiooni andmekogumid hoolikat tõlgendamist.

Informatsioonilise RNA (mRNA) hulga muutumine ei pea tingimata viima sellele vastava valgu kontsentratsiooni või bioloogilise funktsiooni muutumiseni.

Geeni ekspressiooni mustrid sõltuvad ka rakutüübist, ekspositsioonitingimustest, mõõtmismeetoditest ja analüütilistest künnistest.

Seetõttu ei tohhi teatud ühendiga seotud genoomseid arve käsitleda selle terapeutilise toime tugevuse otsese mõõdupuuna.

Arvutipõhised prognoosid on hüpoteeside püstitamisel väärtuslikud, kuid vajavad eksperimentaalset kinnitust.

Neuroprotektsiooniga seotud geneetilised võrgustikud

GHK-kirjanduses käsitletud geeniaktiivsuse analüüsid on tuvastanud muutusi geenides, mis on seotud neuronite talitluse, rakkude ellujäämise ja arengusignalisatsiooniga.

Näited hõlmavad geene SIGMAR1, EPM2A, NAIP, FGFR2 ja SLIT2 [65].

Need genid osalevad erinevates bioloogilistes protsessides.

SIGMAR1 kodeerib sigma-1 retseptorit, valku, mis osaleb rakusignaaliülekandes ja stressiga seotud protsessides.

EPM2A on seotud laforiiniga, mis on glükogeeni ainevahetuse jaoks oluline valk.

NAIP osaleb rakkude ellujäämise ja immuunvastusega seotud radades.

FGFR2 kooderdab retseptorit, mis osaleb fibroblastide kasvufaktori signaaliülekandes.

SLIT2 osaleb arenguprotsessides, mis on seotud rakkude suunamise ja migratsiooniga.

Nende genede osalemine närvisüsteemi bioloogias on äratanud huvi nende võimaliku seose vastu GHK esile kutsutud transkriptsiooniliste vastustega.

Kuid geeni olemasolu GHK-ga seotud andmestikus ei tõenda, et GHK seda genit igas bioloogilises keskkonnas otseselt kontrollib.

See ei tõenda ka seda, et GHK ennetab dementsust või parandab neuroloogilisi funktsioone.

Viidatud uuringud nende geneetiliste osade kohta pakuvad laiemat bioloogilist konteksti, mitte otseseid tõendeid GHK-Cu toimimise kohta.

Seetõttu tuleb neid tulemusi mõista kui vaatlusi, mis on aluseks geeniregulatsiooni ja neurobioloogia hüpoteeside püstitamisele.

Epigeneetiliste uuringute ja HDAC-ga seotud radade tulemused

Epigeneetiline regulatsioon hõlmab geneetilise aktiivsuse muutusi, mis ei nõua DNA põhisümbolite järjestuse modifitseerimist.

Üks olulisi mehhanisme on histoonide modifikatsioon.

Histoonid on valgud, mille ümber DNA on organiseeritud. Nende keemilised modifikatsioonid võivad mõjutada DNA teatud piirkondade kättesaadavust transkriptsiooniaparaadile.

Histooni deatsetülaasid (HDAC) eemaldavad atsetüülrühmi histoonidelt ja teistelt valgussubstraatidelt.

Nende aktiivsus võib mõjutada kromatiini struktuuri ja geenide ekspressiooni.

GHK-d on arutatud HDAC-ga seotud radade kontekstis seoses laiemate tähelepanekutega geenide regulatsiooni ja vanusega seotud transkriptsiooniliste muutuste kohta [66, 67].

Ent tsiteeritud uuringud HDAC-i ja epigeneetilise vananemise kohta pakuvad eelkõige üldist teavet nende bioloogiliste protsesside kohta.

Need ei tõesta Iseenesest, et GHK-Cu on kliiniliselt tõestatud HDAC inhibiitor.

Samamoodi ei tohiks geeniekspressiooni mustrite muutusi automaatselt kirjeldada epigeneetilise vananemise ümberpööramisena.

Otsene väide HDAC-i inhibeerimise kohta nõuab eksperimente, mis näitavad mõju nende ensüümide aktiivsusele teatud tingimustes.

Väited vananemise ümberpööramise kohta nõuavad täiendavaid tõendeid, mis seovad molekulaarsed mõõtmised oluliste bioloogiliste tulemustega.

Seosed GHK, kromatiini regulatsiooni ja vananemisega seotud geeni ekspressiooni vahel on seega edasiste mehhaaniliste uuringute valdkond.

GHK-Cu teadusuuringuteks mõeldud materjalide kvaliteet ja uuringud

GHK-Cu analüütiline karakteristika on oluline, kuna uuringute tulemused sõltuvad analüüsitava materjali identsusest, koostisest ja kvaliteedist.

Preparadina, mida tuntakse GHK-Cu nimetuse all, tuleks hinnata meetoditega, mis võimaldavad iseloomustada peptiidset komponenti ja esitada tõendeid selle vaskseotud vormi kohta.

Kvaliteedikontroll võib hõlmata kromatograafiat, massispektromeetriat, metallisisalduse analüüsi ja konkreetse analüütilise eesmärgi saavutamiseks valitud lisatehnikaid.

Ükski üksik rutiinne test ei kinnita siiski kõiki olulisi kvaliteediparameetreid.

vedelikクロマトグラfia-massispektromeetria

Vedelikkromatograafia-massispektromeetria (LC-MS) ühendab kromatograafilise eralduse ioonide massi mõõtmisel põhineva detektsiooniga.

Kromatograafiline osa võimaldab proovis sisalduvaid ühendeid eraldada.

Massspektromeeter annab teavet ioonide kohta nende massi ja laengu suhte alusel.

LC-MS võib toetada peptiidi identifitseerimist, tuvastades oodatud ühendiga sobivaid molekulaarioone.

Sõltuvalt kasutatavast meetodist võib täiendav informatsioon fragmenteerimise kohta aidata peptiidijada iseloomustada.

GHK-le vastava molekulmassi registreerimine ei kinnita siiski iseenesest molekuli struktuuri kõiki aspekte.

Samamoodi ei pea vasega seotud vormi esinemisega kooskõlas olevate signaalide tuvastamine tõestama täielikku koordinatsioonigeomeetriat ega välistama kõiki alternatiivseid komplekse.

Vase seondumise omadused võivad vajada täiendavaid uuringuid asjakohaste spektroskoopiliste meetodite abil või metallisisalduse analüüsi.

LC-MS on seega väärtuslik analüütiline tööriist, kuid saadud järeluste usaldusväärsus sõltub meetodist, võrdlusstandarditest, proovi ettevalmistusest ja täiendavatest tõenditest.

Kõrgjõudlusega vedelikukromatograafia ja puhtus

Kõrgjõudlusega vedelikkromatograafiat (HPLC) kasutatakse laialdaselt peptiidpreparaatide komponentide eraldamiseks.

See võib aidata tuvastada sünteesi, lagunemise või muude tootmisprotsessidega seotud lisandeid.

Kromatograafilise puhtuse tulemus põhineb tavaliselt suhtelistel signaalidel, mis tuvastatakse kindlates analüütilistes tingimustes.

Kromatograafiline puhtus ei ole aga sama mis keemiline identsus, peptiidsisaldus, vaskkompleksi stöhhiomeetria ega materjali üldine kvaliteet.

Näiteks ei pruugi deklareeritud 98% puhtusaste tähendada, et 98% proovi kogumassist moodustab korrektselt moodustunud GHK-Cu kompleks.

Tõlgendus sõltub kasutatud analüüsimeetodist ja tulemuse arvutamise viisist.

Kromatogram ei kinnita samuti steriilsust, endotoksiinide sisaldust ega kõigi võimalike saasteainete puudumist.

Lähtematerjal kirjeldab teatud uurimispreparaatide deklareeritud puhtusspetsifikatsiooni, mis on vähemalt 98%.

Sellist spetsifikatsiooni tuleks käsitleda tarnija deklaratsioonina, välja arvatud juhul, kus seda toetab konkreetse partii kohta kättesaadav analüütiline dokumentatsioon.

Filtreerimine, steriilsus ja tahkete osakeste saaste kontroll

Lähtematerjal kirjeldab filtreerimist 0,22-mikromeetrise poorisuurusega membraanide abil materjali ettevalmistamise protsessi osana.

Membraanfiltreerimist saab kasutada teatavate mikrobioloogiliste saasteainete piiramiseks, kui kasutatav meetod ja tingimused on sobivad.

Lahuse filtreerimine läbi 0,22-mikromeetrise pooriga filtri ei taga siiski iseenesest lõpptoote steriilsust.

Sterilsuse tagamine sõltub kogu protsessist, sealhulgas seadmetest, keskkonnast, filtri Terviklikkusest, materjali käitlemisviisist ja valideeritud kontrolliprotseduuridest.

Filtratsioon ei pea samuti eemaldama endotoksiine, lahustunud keemilisi saasteaineid ega kõiki tahkete osakeste saasteaineid.

Seetõttu nõuavad steriilsust või sobivust teatud teaduslikuks otstarbeks puudutavad väited asjakohaseid katseid ja dokumentatsiooni, mitte ainult filtri pooride suurusele tuginemist.

Hea laboritava ja dokumentatsioon

Hea laboritava (GLP) on kvaliteedisüsteem, mis on seotud teatavate mittekliiniliste uuringute korraldamise, läbiviimise, seire, dokumenteerimise ja aruandlusega.

Väide, et protseduurid on GLP põhimõtetega kooskõlas, ei pea tähendama ametlikku vastavust GLP nõuetele ega vastava sertifikaadi olemasolu.

Sellise deklaratsiooni tähendus sõltub konkreetsetest protseduuridest, dokumentatsioonist ja rakendatud kvaliteedisüsteemist.

Uuringumaterjalidega võib kaasas olla ka analüüsisertifikaat (Certificate of Analysis, COA).

CoA sisaldab tavaliselt konkreetse partii valitud analüüsitulemusi.

Oluline teave võib hõlmata identiteediuuringuid, puhtuse mõõtmisi, aine sisalduse määramist, kasutatud analüüsimeetodeid, partiide identifikaatoreid ja muid spetsifikatsiooni parameetreid.

COA teabeväärtus sõltub siiski selle väljastamise aluseks olevatest meetoditest ja andmetest.

Pelgalt sertifikaat ei tõenda, et materjal sobib inimestele manustamiseks, kosmeetiliseks või terapeutiliseks kasutamiseks.

Samamoodi ei kinnita analüütiline puhtus bioloogilist efektiivsust ega kliinilist ohutust.

Teadusuuringutes peaks kõige kasulikum kvalitatiivne dokumentatsioon olema üksikasjalik, jälgitav ja piisavalt täielik, et võimaldada analüütiliste tulemuste õiget tõlgendamist.

Lisateavet tootjate, tarnijate, kvaliteedideklaratsioonide ja partiidokumentatsiooni eristamise kohta leiate artiklist Peptiidide tootjad ja tarnijad.

Kokkuvõte

GHK-Cu on looduslikult esinev vase tripeptiidi kompleks, mida on uuritud üle viie aastakümne.

Selle molekulaarne struktuur, vase sidumise omadused ja koostoimed rakusüsteemidega on teinud sellest olulise uurimisobjekti peptiidide biokeemias, ekstratsellulaarse maatriksi bioloogias, oksüdatiivses stressis ja geeniregulatsioonis.

Kompleks moodustub glütsüül-L-histidüül-L-lüsiinist ja vask(II)-st. Struktuuriuuringud võimaldasid tuvastada lämmastikku sisaldavad koordinatsioonikohad, mis osalevad vase sidumises ja mõjutavad molekuli keemilisi omadusi.

Need omadused on aluseks lühikeste peptiidide ja metalliioonide vaheliste vastastikmõjude ning koordinatsioonikeemia mõju analüüsimisele bioloogilistele protsessidele.

Eksperimentaalsetes uuringutes on täheldatud muutusi kollageeni sünteesis, glükosaminoglükaanide tootmises, maatriksi metalloproteinaaside ekspressioonis, integriinide signaaliülekandes, põletikumediaatorites ja antioksüdantse kaitsega seotud parameetrites.

Täiendavad uuringud hõlmasid GHK-ga seotud vastuseid fibroblastide kultuurides, haavamudelites, kopsukahjustuse eksperimentides, neuroloogilistes süsteemides ja peptiide sisaldavates biomaterjalides.

Arvutianalüüsid on samuti seostanud GHK geeniekspressioonivõrgustiku ulatuslike muutustega.

Nende vaatluste teaduslik tähendus sõltub siiski eksperimentaalsest kontekstist.

Geeni ekspressiooni muutused ei pea viima valkude aktiivsuse muutusteni.

Suurenenud kollageeni tootmine ei pea tähendama kudede struktuuri paranemist.

Põletikumarkerite muutused ei kujuta endast iseseisvat kliinilist tõendit põletikuvastase toime kohta.

Samamoodi ei tõesta vähirakuliine, kopsufibroosi mudeleid või neuronite kultuure hõlmavad uuringutulemused tõhusust vastavate inimeste haiguste vastu.

Kirjanduses on olulisi erinevusi ka GHK ja GHK-Cu vahel ning otseselt kõnealuse ühendiga seotud katsete ja ainult üldist bioloogilist konteksti pakkuvate uuringute vahel.

Neid eristusi tuleb säilitada toimemehhanismide ja pakutavate rakenduste tõlgendamisel.

Teine oluline küsimus on analüötiline kvaliteet. Sellised tehnikad nagu LC-MS ja HPLC võivad anda väärtuslikku teavet identsuse ja puhtuse kohta, kuid need ei kinnita iseseisvalt preparaadi kõiki struktuurseid, mikrobioloogilisi ja bioloogilisi omadusi.

Üldiselt on GHK-Cu endiselt kasulik vahend vase koordinatsiooni, raku signalingu, rakuvälise maatriksi metabolismi ja oksüdatiivse stressi vastuse molekulaaruuringutes.

Selle teadaolevad keemilised omadused ja ulatuslik prekliiniline kirjandus on aluseks edasistele teadusuuringutele. Kuid väited kliinilise tõhususe ja ohutuse kohta nõuavad eraldi, nõuetekohaselt kontrollitud uuringuid inimestega.

Vastutusest loobumine

Käesolev artikkel on mõeldud üksnes hariduslikul ning teaduslik-informatiivsel eesmärgil. See esitleb uuringuid GHK-Cu molekulaarse struktuuri, vase koordinatsiooni, bioloogiliste mehhanismide, analüütiliste omaduste ja eksperimentaalsete rakenduste kohta.

See ei kujuta endast meditsiinilist nõuannet, ei soovita GHK-Cu kasutamist inimestel ega loomadel, ei määra raviprotseduure ega toeta ühtegi diagnostilist, terapeutilist ega kosmeetilist rakendust.

Rakukultuurides, loomkatsetes, arvutianalüüsides ja biokeemilistes uuringutes saadud tulemusi ei tohiku tõlgendada tõendina kliinilise tõhususe või ohutuse kohta inimestel.

Andmed analüütilise puhtuse, uurimisklassi materjalide, analüüsisertifikaatide ega laboriuuringute kohta ei tõenda, et kõnealune preparaatio sobib inimestele manustamiseks või muul reguleeritud otstarbel kasutamiseks.

Kõik meditsiinilised otsused peavad langetama piisava kvalifikatsiooniga tervishoiutöötajad, tuginedes asjakohastele kliinilistele tõenditele ja kehtivatele õigusaktidele.

Viited

1. Pickart L. A Tripeptide from Human Serum Which Enhances the Growth of Neoplastic Hepatocytes and the Survival of Normal Hepatocytes. San Francisco, Calif, USA: University of California; 1973.
2. Pickart L., Freedman J. H., Loker W. J., et al. Growth-modulating plasma tripeptide may function by facilitating copper uptake into cells. Nature. 1980;288(5792):715–717. doi: 10.1038/288715a0.
3. Pickart L. GHL-Cu kasutamine haavade paranemise ja põletikuvastase vahendina. 1988, http://www.freepatentsonline.com/4760051.html.
4. Downey D., Larrabee W. F., Jr., Voci V., Pickart L. Haava paranemise kiirendamine glütsüül-histidüül-lüsiini vask(II)-kompleksi abil. Surgical Forum. 1985;25:573–575.
5. Pickart L. Iamin: a human growth factor with multiple wound-healing properties. In: Sorenson J., editor. Biology of Copper Complexes. Clifton, NJ, USA: Humana Press; 1987. pp. 273–285.
6. Meiners S., Eickelberg O. Next-generation personalized drug discovery: the tripeptide GHK hits center stage in chronic obstructive pulmonary disease. Genome Medicine. 2012;4(8, article 70) doi: 10.1186/gm371.
7. Hong Y., Downey T., Eu K. W., Koh P. K., Cheah P. Y. A ‘metastasis-prone’ signature for early-stage mismatch-repair proficient sporadic colorectal cancer patients and its implications for possible therapeutics. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
8. Gruchlik A., Jurzak M., Chodurek E. W. A., Dzierzewicz Z. Gly-Gly-His, Gly-His-Lys ja nende vaskkomplekside mõju TNF-α-sõltuvale IL-6 sekretsioonile normaalsetes inimese dermaalsetes fibroblastides. Acta Poloniae Pharmaceutica. 2012;69(6):1303–1306.
9. Pickart L., Vasquez-Soltero J. M., Margolina A. GHK ja DNA: inimese genoomi lähtestamine tervisele. BioMed Research International. 2014;2014:10. doi: 10.1155/2014/151479.151479
10. Wegrowski Y., Maquart F. X., Borel J. P. Stimulation of sulfated glycosaminoglycan synthesis by the tripeptide-copper complex Glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+ . Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
11. Siméon A., Emonard H., Hornebeck W., Maquart F.-X. Tripeptiid-vaskkompleks glütsüül-L-histidüül-L-lüsiin-Cu2+ stimuleerib maatriksi metalloproteinaas-2 ekspressiooni fibroblastide kultuurides. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
12. Ehrlich H. Stimuleeritud naha paranemine immunosupresseeritud rotil. Proceedings of the Symposium on Collagen and Skin Repair; September 1991; Reims, Prantsusmaa.
13. Siméon A., Wegrowski Y., Bontemps Y., Maquart F.-X. Glükosaminoglükaanide ja väikeste proteoglükaanide ekspressioon haavades: tripeptiidi-vase kompleksi glütsüül-L-histidüül-L-lüsiin-Cu2+ modulatsioon. Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
14. McCormack M. C., Nowak K. C., Koch R. J. The effect of copper tripeptide and tretinoin on growth factor production in a serum-free fibroblast model. Archives of Facial Plastic Surgery. 2001;3(1):28–32.
15. Buffoni F., Pino R., Dal Pozzo A. Tripeptiid-vaskkomplekside mõju naha haava paranemise protsessile ja kultiveeritud fibroblastidele. Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie. 1995;330(3):345–360.
16. Gul N. Y., Topal A., Cangul I. T., Yanik K. Paikse vask-tripeptiidkompleksi ja heelium-neoonlaseri mõju haava paranemisele küülikutel. Veterinary Dermatology. 2008;19(1):7–14. doi: 10.1111/j.1365-3164.2007.00647.x.
17. Cangul I. T., Gul N. Y., Topal A., Yilmaz R. Evaluation of the effects of topical tripeptide-copper complex and zinc oxide on open-wound healing in rabbits. Veterinary Dermatology. 2006;17(6):417–423. doi: 10.1111/j.1365-3164.2006.00551.x.
18. Pickart L. Vask(II) sisaldavate ühendite kasutamise meetod haavade paranemise kiirendamiseks. 1992, http://www.freepatentsonline.com/5164367.html.
19. Arul V., Kartha R., Jayakumar R. A therapeutic approach for diabetic wound healing using biotinylated GHK incorporated collagen matrices. Life Sciences. 2007;80(4):275–284. doi: 10.1016/j.lfs.2006.09.018.
20. Canapp S. O., Jr., Farese J. P., Schultz G. S., et al. Kohaliku tripeptiid-vaskkompleksi mõju isheemiliste lahtiste haavade paranemisele. Veterinary Surgery. 2003;32(6):515–523. doi: 10.1111/j.1532-950X.2003.00515.x.
21. Swaim S. F., Vaughn D. M., Kincaid S. A., et al. Effect of locally injected medications on healing of pad wounds in dogs. American Journal of Veterinary Research. 1996;57(3):394–399.
22. Campbell J. D., McDonough J. E., Zeskind J. E., et al. A gene expression signature of emphysema-related lung destruction and its reversal by the tripeptide GHK. Genome Medicine. 2012;4, article 67 doi: 10.1186/gm367.
23. Boo S., Dagnino L. Integrins as modulators of transforming growth factor beta signaling in dermal fibroblasts during skin regeneration after injury. Advances in Wound Care. 2013;2(5):238–246. doi: 10.1089/wound.2012.0394.
24. Lubick K., Radke M., Jutila M. Securiin, GABA-A retseptori antagonist, tugevdab faasi II C. burnetii makrofaagide poolset eemaldamist: võrdlus TLR agonistidega. Journal of Leukocyte Biology. 2007;82(5):1062–1069. doi: 10.1189/jlb.0407255.
25. Matalka L. E., Ford A., Unlap M. T. Tripeptiid GHK kutsub esile programmeeritud rakusurma SH-SY5Y neuroblastoomi rakkudes. Journal of Biotechnology & Biomaterials. 2012;2, artikkel 144 doi: 10.4172/2155-952X.1000144.
26. Pollard J. D., Quan S., Kang T., Koch R. J. Effects of copper tripeptide on the growth and expression of growth factors by normal and irradiated fibroblasts. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
27. Jose S., Hughbanks M. L., Binder B. Y. K., Ingavle G. C., Leach J. K. Enhanced trophic factor secretion by mesenchymal stem/stromal cells with Glycine-Histidine-Lysine (GHK)-modified alginate hydrogels. Acta Biomaterialia. 2014;10(5):1955–1964. doi: 10.1016/j.actbio.2014.01.020.
28. Lau S. J., Sarkar B. The interaction of copper(II) and glycyl-L-histidyl-L-lysine, a growth-modulating tripeptide from plasma. Biochemical Journal. 1981;199(3):649–656. doi: 10.1042/bj1990649.
29. Perkins C. M., Rose N. J., Weinstein B., Stenkamp R. E., Jensen L. H., Pickart L. The structure of a copper complex of the growth factor glycyl-L-histidyl-L-lysine at 1.1 Å resolution. Inorganica Chimica Acta. 1984;82(1):93–99. doi: 10.1016/s0020-1693(00)82544-x.
30. Freedman J. H., Pickart L., Weinstein B., Mims W. B., Peisach J. Structure of the glycyl-L-histidyl-L-lysine-copper(II) complex in solution. Biochemistry. 1982;21(19):4540–4544. doi: 10.1021/bi00262a004.
31. Pickart L., Lovejoy S. Biological activity of human plasma copper-binding growth factor glycyl-l-histidyl-l-lysine. Methods in Enzymology. 1987;147:314–328. doi: 10.1016/0076-6879(87)47121-8.
32. Beretta G., Arlandini E., Artali R., Anton J. M. G., Maffei Facino R. Acrolein sequestering ability of the endogenous tripeptide glycyl-histidyl-lysine (GHK): characterization of conjugation products by ESI-MSn and theoretical calculations. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
33. Godet D., Marie P. J. Tripeptiidi glütsüül-L-histidüül-L-lüsiini vaskkompleksi toime osteoblastsete rakkude laialivalgumisele, kinnitumisele ja fenotüübile. Cellular and Molecular Biology (Noisy-le-Grand, France) 1995;41(8):1081–1091.
34. Kawase M., Miura N., Kurikawa N., et al. Tripeptiid-kasvufaktori glütsüül-L-histidüül-L-lüsiini immobiliseerimine polü(vinüülalkohol)-kvaterniseeritud stilbasoolile (PVA-SbQ) ja selle kasutamine hepatotsüütide kinnitumise ligandina. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 1999;22(9):999–1001. doi: 10.1248/bpb.22.999.
35. Lutsenko S, Bhattacharjee A, Hubbard AL. Copper handling machinery of the brain. Metallomics. 2010;2(9):596–608. doi: 10.1039/c0mt00006j.
36. Hawk SN, Lanoue L, Keen CL, Kwik-Uribe CL, Rucker RB, Uriu-Adams JY. Copper-deficient rat embryos are characterized by low superoxide dismutase activity and elevated superoxide anions. Biology of Reproduction. 2003;68(3):896–903. doi: 10.1095/biolreprod.102.009167.
37. Bayer TA, Schäfer S, Simons A, et al. Dietary Cu stabilizes brain superoxide dismutase 1 activity and reduces amyloid Aβ production in APP23 transgenic mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2003;100(24):14187–14192. doi: 10.1073/pnas.2332818100.
38. Arul V, Gopinath D, Gomathi K, Jayakumar R. GHK-peptiidi sisaldav kollageenne maatriks: uudne biomaterjal naha haavade paranemiseks rotidel. Journal of Biomedical Materials Research. 2005;73(2):383–391. doi: 10.1002/jbm.b.30246.
39. Miller DM, DeSilva D, Pickart L, Aust SD. Glütsüül-histidüül-lüsiiniga kelaaditud Cu(II) mõju ferritiinisõltuvale lipiidide peroksüdatsioonile. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1990;264:79–84. doi: 10.1007/978-1-4684-5730-8_11.
40. Alberghina M, Lupo G, La Spina G, jt. Cytoprotective effect of copper(II) complexes against ethanol-induced damage to rat gastric mucosa. Journal of Inorganic Biochemistry. 1992;45(4):245–259. doi: 10.1016/0162-0134(92)84013-d.
41. Beretta G, Artali R, Regazzoni L, Panigati M, Facino RM. Glycyl-histidyl-lüsiin (GHK) on α,β-4-hüdroksü-trans-2-nonenaali siduja: võrdlus karnosiiniga. Pilguheit reaktsioonimehhanismile elektropihustusionisatsiooni massispektromeetria, 1H TMR ja arvutuslike tehnikate abil. Chemical Research in Toxicology. 2007;20(9):1309–1314. doi: 10.1021/tx700185s.
42. Beretta G, Arlandini E, Artali R, Anton JM, Maffei Facino R. Acrolein sequestering ability of the endogenous tripeptide glycyl-histidyl-lysine (GHK): characterization of conjugation products by ESI-MSn and theoretical calculations. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
43. Park JR, Lee H, Kim SI, et al. Tripeptiid GHK-Cu kompleks leevendab lipopolüsahhariidist põhjustatud ägedat kopsukahjustust hiirtel. Oncotarget, 2016, 7(36): 58405.
44. Gao M, Chen L, Yu H, jt. Diosgeniin alandab NF-κB p65/p50 ja p38MAPK rajad ning leevendab lipopolüsahhariidi poolt esile kutsutud ägedat kopsukahjustust hiirtel. International immunopharmacology, 2013, 15(2): 240–245.
45. Liu T, Zhang L, Joo D, jt. NF-κB-signaalrada põletikus. Signal transduction and targeted therapy, 2017, 2(1): 1–9.
46. Kaminska B MAPK signalling pathways as molecular targets for anti-inflammatory therapy—from molecular mechanisms to therapeutic benefits. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Proteins and Proteomics, 2005, 1754(1–2): 253–262.
47. Yong HY, Koh MS, Moon A. P38 MAPK inhibiitorid põletikuliste haiguste ja vähi raviks. Expert opinion on investigational drugs, 2009, 18(12): 1893–1905.
48. Zhou XM, Wang GL, Wang XB, et al. GHK-peptiid pärsib bleomütsiinist põhjustatud kopsufibroosi hiirtel, surudes alla TGFβ1/Smad-vahendatud epiteel-mesenhümaalset üleminekut. Frontiers in Pharmacology, 2017, 8: 904.
49. Mukherjee K, Lee A, Zhu L, et al. Sleep-deprived cognitive impairment in aging mice is alleviated by rapamycin. Aging Pathobiology and Therapeutics, 2019, 1(1): 05–09.
50. Kalaria RN. Vascular basis for brain degeneration: Faltering controls and risk factors for dementia. Nutrition Reviews. 2010;68(supplement 2):S74–S87. doi: 10.1111/j.1753-4887.2010.00352.x.
51. Pollard JD, Quan S, Kang T, Koch RJ. Effects of copper tripeptide on the growth and expression of growth factors by normal and irradiated fibroblasts. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
52. Sensenbrenner M, Jaros GG, Moonen G, Meyer BJ. Effect of conditioned media on nerve cell differentiation. Experientia. 1980;36(6):660–662. doi: 10.1007/BF01970123.
53. Lindner G, Grosse G, Halle W, Henklein P. Sünteetilise tripeptiidi toime närvikoes in vitro kultuuris. Zeitschrift für Mikroskopisch-Anatomische Forschung. 1979;93(5):820–828. (Saksa k).
54. Ahmed MR, Basha SH, Gopinath D, Muthusamy R, Jayakumar R. Initial upregulation of growth factors and inflammatory mediators during nerve regeneration in the presence of cell adhesive peptide-incorporated collagen tubes. Journal of the Peripheral Nervous System. 2005;10(1):17–30. doi: 10.1111/j.1085-9489.2005.10105.x.
55. Pickart L. GHL-Cu kasutamine haavade paranemise ja põletikuvastase ahendina. USA patent 4,760,051, juuli 1988.
56. Downey D, Larrabee WF, Voci V, Pickart L. Haavade paranemise kiirendamine glütsüül-histidüül-lüsüül-Cu(II) abil. Surgical Forum. 1985;36:573–575.
57. Maquart FX, Pickart L, Laurent M, Gillery P, Monboisse JC, Borel JP. Stimulation of collagen synthesis in fibroblast cultures by the tripeptide-copper complex glycl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+ . FEBS Letters. 1988;238(2):343–346. doi: 10.1016/0014-5793(88)80509-x.
58. Wegrowski Y, Maquart FX, Borel JP. Sulfaaditud glükosaminoglükaanide sünteesi stimuleerimine tripeptiidi-vaskiirgiga glütsüül-L-histidüül-L-lüsiin-Cu2+ . Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
59. Siméon A, Emonard H, Hornebeck W, Maquart FX. Tripeptiid-vaskkompleks glütsüül-L-histidüül-L-lüsiin-Cu2+ stimuleerib maatriksi metalloproteinaas-2 ekspressiooni fibroblastide kultuurides. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
60. Siméon A, Wegrowski Y, Bontemps Y, Maquart FX. Glükosaminoglükaanide ja väikeste proteoglükaanide ekspressioon haavades: tripeptiid-vaskkompleksi glütsüül-L-histidüül-L-lüsiin-Cu2+ modulatsioon. Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
61. Kang YA, Choi HR, Na JI, et al. Vask-GHK suurendab keratinotsüütide integriini ekspressiooni ja p63 positiivsust. Archives of Dermatological Research. 2009;301(4):301–306. doi: 10.1007/s00403-009-0942-x.
62. Lamb J. The Connectivity Map: a new tool for biomedical research. Nature Reviews Cancer. 2007;7(1):54–60. doi: 10.1038/nrc2044.
63. Iorio F, Bosotti R, Scacheri E, jt. Discovery of drug mode of action and drug repositioning from transcriptional responses. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2010;107(33):14621–14626. doi: 10.1073/pnas.1000138107.
64. Hong Y, Downey T, Eu KW, Koh PK, Cheah PY. A ‘metastasis-prone’ signature for early-stage mismatch-repair proficient sporadic colorectal cancer patients and its implications for possible therapeutics. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
65. Huang P, Kishida S, Cao D, jt. Neuronaalne diferentseerumisfaktor neuroD1 alreguleerib neuronaalse tõrjuva faktori Slit2 ekspressiooni ning soodustab neuroblastoomi rakkude liikuvust ja kasvajate moodustumist. Cancer Research. 2011;71(8):2938–2948. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-10-3524.
66. Fischer A, Sananbenesi F, Mungenast A, Tsai LH. Targeting the correct HDAC(s) to treat cognitive disorders. Trends in Pharmacological Sciences. 2010;31(12):605–617. doi: 10.1016/j.tips.2010.09.003.
67. Koch CM, Wagner W. Epigenetic-aging-signature to determine age in different tissues. Aging. 2011;3(10):1018–1027. doi: 10.18632/aging.100395.