Peptídio GHK-Cu: estrutura molecular, mecanismos de ação e aplicações em pesquisas científicas

O GHK-Cu é um complexo de tripeptídeo de cobre naturalmente presente que atrai a atenção dos cientistas devido à sua participação na comunicação celular, na regulação da matriz extracelular e em processos biológicos relacionados com a manutenção e reparação das células. Desde a sua identificação em 1973 por Lorena Pickart, os pesquisadores têm analisado a sua estrutura molecular, a sua capacidade de ligação à metalicidade, o seu efeito na expressão de genes e a sua interação com os circuitos celulares envolvidos em processos inflamatórios, estresse oxidativo e reparação das células.

Esta ligação foi identificada pela primeira vez durante estudos sobre os componentes da soro sanguínea humana e o seu efeito na síntese de proteínas nas células. Pickart observou que o fator derivado da soro pode influenciar a função das células hepáticas envelhecidas, estimulando padrões de síntese proteica característicos das células mais jovens [1]. Estudos posteriores permitiram identificar o tripeptídeo glicil-L-histidil-L-lisina (GHK) e analisar a sua capacidade de formar um complexo estável com íons de cobre de duas valências (Cu²⁺).

O GHK é composto por três aminoácidos: glicina, histidina e lisina. Após a ligação ao ião de cobre(II), forma um complexo comumente denominado GHK-Cu ou peptídeo de cobre do GHK.

Este peptídeo foi detectado em fluidos biológicos humanos, incluindo plasma, saliva e urina. De acordo com dados publicados, seu nível no plasma diminui com a idade — de cerca de 200 ng/mL aos 20 anos para cerca de 80 ng/mL aos 60 anos [2–9]. Estas observações contribuíram para o desenvolvimento de estudos sobre as relações entre o GHK, as alterações celulares associadas ao envelhecimento e a regulação dos processos tissulares.

Em estudos experimentais, foi demonstrado que o GHK-Cu pode influenciar na síntese de colágeno, na remodelação da matriz extracelular, na sinalização angiogênica e na atividade de enzimas antioxidantes. Além disso, em culturas de fibroblastos e modelos animais, foi analisado seu efeito sobre mediadores inflamatórios, migração celular e padrões de expressão gênica relacionados à remodelação tissular.

Algumas análises associaram o GHK a alterações em mais de 4000 genes, o que sugere que a sua atividade biológica pode envolver vários caminhos celulares interligados [9].

As alterações na expressão de genes não significam, no entanto, automaticamente uma melhoria no funcionamento dos tecidos ou resultados clínicos favoráveis. Muitas observações derivam de estudos celulares, análises computacionais ou experiências em animais.

O GHK-Cu permanece, portanto, um objeto importante de pesquisa molecular e pré-clínica, especialmente no contexto da coordenação da metaloproteinase, da biologia da matriz extracelular, do estresse oxidativo e da resposta celular às lesões.

O que é o GHK-Cu?

O GHK-Cu é um complexo coordenador que se forma quando o tripeptídeo glicil-L-histidina-L-lisina liga-se ao ião de cobre(II). A capacidade de coordenação de cobre constitui uma das propriedades moleculares que o diferenciam de muitos outros peptídeos curtos [1, 2].

O cobre é um elemento essencial em pequenas quantidades que participa em numerosos processos biológicos. Acelera a atividade de enzimas, a produção de energia mitocondrial, a proteção antioxidante e a formação e manutenção das células conectivas.

Ao mesmo tempo, a economia da prata deve ser sujeita a uma regulamentação rigorosa, pois a prata não ligada ou controlada inadequadamente pode participar em reações que conduzem à formação de formas reativas de oxigênio.

O GHK cria um ambiente molecular que permite a ligação da prata e a influência sobre suas propriedades químicas. Graças a essa interação, o GHK-Cu tornou-se um modelo útil para analisar a participação de pequenos peptídeos na coordenação de metais e na sinalização celular.

Estudos iniciais concentraram-se no seu efeito sobre as fibroblastos, ou seja, as células responsáveis pela produção e manutenção de vários componentes da massa conjuntiva.

As fibroblastos sintetizam colágeno, componentes relacionados com a elastina, glicosaminoglicanos e outras moléculas da matriz extracelular. Estas substâncias são responsáveis pelas propriedades mecânicas, pela organização e pela estabilidade estrutural das células.

Investigações conduzidas por Borela, Maquart e colaboradores demonstraram que o GHK-Cu pode influenciar o metabolismo da matriz extracelular em células-tronco fibroblastos mesmo em concentrações de cerca de 1–10 nanomoles por litro (nM) [10–13].

Os efeitos observados incluíram alterações na produção e degradação do colágeno, dos glicosaminoglicanos sulfatados e de pequenos glicosaminoglicanos, como a dekrinina.

O que é importante é que a manutenção da matriz extracelular requer algo mais do que um aumento na produção de proteínas estruturais.

A regeneração adequada dos tecidos baseia-se na síntese coordenada, modificação e desintegração dos componentes da matriz.

As metaloproteinases maternas (MMP) participam na degradação da matriz extracelular, enquanto os inibidores de metaloproteinases tissulares (TIMP) ajudam a regular a sua atividade.

Em estudos experimentais, foi observado que o GHK-Cu afeta a atividade das MMP e a expressão de inibidores, como TIMP-1 e TIMP-2 [11, 12].

Estas observações sugerem uma relação entre a exposição ao GHK-Cu e as alterações nos componentes da matriz. No entanto, não comprovam que essa relação cause consistentemente uma regeneração benéfica dos tecidos em humanos.

Em estudos pré-clínicos adicionais, o GHK-Cu foi analisado em modelos de feridas, incluindo experimentos sobre o fechamento de feridas, a integração de transplantes, a sinalização inflamatória e a migração celular [3–5].

Outros estudos abordaram a resposta dos fibroblastos a lesões relacionadas com a radiação. Nesses estudos foram observadas alterações no crescimento e na viabilidade celular, bem como na expressão de fatores de crescimento [14].

Os experimentos também analisaram interações que envolvem células imunitárias e células endoteliais, que participam da resposta dos tecidos a lesões [15].

Estudos em animais demonstraram alterações na atividade antioxidante e em parâmetros relacionados com as lesões após a exposição a GHK-Cu ou a materiais que contêm peptídeos relacionados [16–21].

Esses resultados aumentaram o interesse pelo GHK-Cu como ferramenta de investigação para analisar o envelhecimento celular, a regulação da matriz extracelular e a resposta das células aos danos oxidativos e mecânicos.

No entanto, as observações relativas ao fechamento das feridas, ao comportamento dos fibroblastos ou à sinalização molecular em modelos experimentais não devem ser interpretadas como evidência de eficácia terapêutica em humanos.

Mecanismo de ação do GHK-Cu: resultados de estudos in vitro e in vivo

Os mecanismos biológicos associados ao GHK-Cu envolvem vários caminhos interconectados, e não um único objetivo molecular claramente definido.

Em estudos experimentais, foi analisado o seu efeito na expressão de genes, na sinalização de fatores de crescimento, no metabolismo da matriz extracelular, na resposta ao estresse oxidativo, nos circuitos inflamatórios e nas interações entre as células e os tecidos circundantes.

Esses mecanismos foram estudados através de cultivo celular, modelos animais e análises computacionais.

Expressão gênica e remodelamento da estrutura pulmonar

Uma das áreas importantes de pesquisa é a relação entre o GHK e os padrões de expressão de genes relacionados à doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC).

Em um estudo multicêntrico realizado por pesquisadores da Boston University, da University of Groningen, da University of British Columbia e da University of Pennsylvania, foram analisados os sinais de expressão gênica associados à destruição da massa pulmonar no curso da esclerose [22].

Um grupo de 127 genes associados à bronquite foi identificado e investigado se o GHK pode influenciar em padrões de transcrição anormais.

Os cientistas observaram que a exposição ao GHK estava associada a alterações na sinalização do fator de crescimento transformante beta (TGF-β).

TGF-β é um regulador importante da diferenciação celular, da produção de matriz extracelular, da remodelação tecidual e da fibrose.

A sua ação depende do contexto biológico. Embora o TGF-β participe no funcionamento normal das células, a sinalização alterada também pode contribuir para a acumulação patológica de componentes da matriz e para o desenvolvimento da fibrose.

Em experimentos laboratoriais com fibroblastos pulmonares retirados de pacientes com EPOC, a exposição à GHK foi associada a uma melhoria na capacidade de contrair e reorganizar o colágeno.

Os pesquisadores também observaram uma expressão aumentada da integrina β1, o que sugere a possível participação de interações celulares dependentes da integrina [22, 23].

Os integrinas são proteínas que ajudam as células a interagir com a matriz extracelular que as rodeia. Participam na adesão e migração das células, na transmissão de sinais mecânicos e na organização das estruturas teciduais.

Estas observações sugerem que o GHK pode influenciar as relações entre a sinalização do TGF-β, a expressão de integrinas e a regulação da matriz extracelular.

Os experimentos, no entanto, não comprovam que o GHK-Cu reverte o curso da DPOC ou restaure a função pulmonar em pacientes.

Os resultados dizem respeito aos padrões de expressão genética e ao comportamento das células em condições experimentais.

Expressão de genes relacionados com o câncer e proliferação celular

O GHK também foi analisado em estudos sobre redes genéticas associadas a cânceres.

Hong e seus colegas analisaram os padrões de expressão de genes relacionados à progressão do câncer colorretal e ao seu potencial de disseminação [7, 24].

Posteriores interpretações desses dados associaram o GHK a uma redução na expressão de cerca de 70% genes selecionados relacionados a metástases.

Neste contexto, foram abordados, entre outros, os genes MAP3K5, LMNA, APP e NFATC2.

Esses genes participam em diversos processos biológicos, incluindo sinalização intracelular, organização do núcleo celular, regulação celular e respostas transcricionais.

No entanto, as alterações na expressão de genes relacionados com a disseminação não devem ser confundidas com a prevenção comprovada das recidivas.

As assinaturas de expressão gênica podem ajudar a identificar os caminhos envolvidos no curso da doença, mas a sua modificação não constitui uma evidência clínica independente de ação anticancerígena.

Em outros estudos laboratoriais, a exposição à GHK foi analisada em linhas celulares tumorais humanas.

Em algumas partes dos experimentos que incluíam modelos de neuroblastoma e câncer de mama, foram observadas alterações na apoptose e na proliferação celular em concentrações nanomolares [25].

A apoptoza é uma forma regulada de morte celular que participa no desenvolvimento das células e no funcionamento da homeostase celular.

Os distúrbios da apoptose são importantes na biologia dos cânceres, pois as células malignas podem desenvolver mecanismos que permitem evitar os sinais normais que levam à morte celular.

A observação de apoptose em culturas de células cancerosas, no entanto, não comprova a ação selectiva anticancerígena no organismo humano.

As linhas celulares diferem dos tumores reais em termos de arquitetura, metabolismo, microambiente, interação com o sistema imunológico e condições de exposição.

Por isso, estes resultados continuam a ser importantes para estudos sobre os mecanismos de tumorização, e não para aplicações confirmadas em oncologia clínica.

A atividade dos fibroblastos e a reconstrução da matriz extracelular

Os estudos sobre fibroblastos constituem um outro elemento importante da literatura científica sobre GHK-Cu.

Após a exposição a complexos de tripeptídeos de cobre, foram observados alterações na produção de colágeno, na degradação da matriz e na expressão de fatores de crescimento [9, 26].

A síntese de colágeno é apenas um dos elementos da regulação da matriz extracelular.

Para manter a estrutura normal das células, a matriz também precisa ser sujeita a uma degradação e reorganização controladas.

O GHK-Cu foi associado a alterações na atividade das metaloproteinases maternas e na expressão de TIMP-1 e TIMP-2.

Esses resultados sugerem que o composto pode influenciar tanto a produção quanto a desintegração dos componentes da matriz.

A direção e o significado dessas mudanças dependem do modelo experimental e das condições biológicas que o rodeiam.

Nos modelos de fibroblastos irradiados, os pesquisadores analisaram se os tripeptídeos de cobre influenciam o crescimento das células e a expressão de fatores de crescimento após a exposição à radiação [26].

As análises da expressão de genes abordadas na literatura também registaram alterações em vias envolvidas na reparação do DNA. Incluíam 47 genes com expressão aumentada e cinco genes cuja expressão diminuiu em pelo menos 50% [9, 26].

Esses resultados indicam mudanças na resposta transcricional das células.

No entanto, elas não demonstram por si só uma reparação completa do DNA, uma reversão do envelhecimento celular ou a restauração do funcionamento normal das células.

Sinais angiogênicos e fatores de crescimento

O GHK-Cu também foi estudado no contexto da angiogênese, ou seja, do processo de formação de novos vasos sanguíneos a partir de estruturas vasculares já existentes.

A angiogênese participa do desenvolvimento de tecidos, da resposta a lesões e do suporte da rede de vasos sanguíneos.

Em estudos experimentais, foram analisadas as relações entre os materiais que contêm GHK e fatores como o fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) e o fator de crescimento fibroblastico básico (bFGF) [27].

O VEGF participa da sinalização celular dos endoteliais e do desenvolvimento das veias sanguíneas.

O FGF básico participa na proliferação e diferenciação das células e na resposta tecidual que envolve células vasculares e tecidos conjuntivos.

Em alguns estudos, foi observada uma expressão ou secreção aumentada desses fatores após a exposição a materiais relacionados com o GHK.

Como um elemento possível desses efeitos, também foi discutida a sinalização dependente de integridade.

As alterações na expressão de VEGF ou bFGF, no entanto, não indicam a formação de vasos sanguíneos funcionais.

A angiogênese correta envolve vários estágios, incluindo a migração das células endoteliais, a formação de vasos sanguíneos, a sua estabilização e a sua integração no sistema circulatório existente.

Os resultados disponíveis, portanto, fornecem evidências mecanísticas relevantes para estudos vasculares, mas não confirmam os benefícios clínicos associados ao funcionamento dos vasos sanguíneos.

Estrutura e bioquímica do GHK-Cu

A estrutura molecular da GHK-Cu foi estudada utilizando diversas técnicas analíticas e espectroscópicas.

Incluíam a cristalografia de raios-X, o ressonância magnética eletrônica (EPR), a espectroscopia de absorção de raios-X, o ressonância magnética de prótons e métodos de mensuração química [28–30].

Estas metodologias ajudaram a caracterizar o ambiente coordenativo da prata no complexo peptídico.

Coordenação da metalicidade e geometria molecular

O GHK é composto por três aminoácidos dispostos em uma sequência glicina–histidina–lisina.

A restrição histidona tem importância especial, pois a sua cadeia imidazolada pode participar na coordenação de íons metálicos.

Os estudos estruturais indicam que a prata(II) pode formar ligações coordenativas com três átomos de azoto que desempenham a função de donadores de elétrons na molécula do peptídeo.

Entre eles estão o átomo de nitrogênio da glicina, um grupo amino, o átomo de nitrogênio de amida desprotonado, associado à ligação glicina–histidina, e o átomo de nitrogênio do anel imidazolado da histidina [28–30].

A quarta posição de coordenação pode ser ocupada por outro grupo de doadores, dependendo do ambiente químico.

Este sistema é frequentemente descrito como uma geometria quadrático-planar ou semelhante a uma geometria quadrático-planar.

A geometria precisa pode depender do pH, das condições do solvente, da presença de ligantes adicionais e da forma de complexo estudada.

A coordenação de cobre afeta as propriedades químicas do GHK-Cu e distingue este complexo do peptídeo GHK não ligado.

A dependência estrutural entre o peptídeo e a prata é importante, pois a ligação do metal pode alterar a reactividade da molécula e as suas interações com outros compostos biológicos.

Figura: a estrutura molecular do complexo GHK-Cu

A estrutura molecular do GHK-Cu mostra como o peptídeo glicina-histidina-lisina fornece locais de coordenação contendo nitrogênio que permitem a ligação da prata(II).

Em estudos estruturais e espectroscópicos, foi identificado o nitrogénio da ligação amino-aminada, o nitrogénio amida da ligação peptídica e o nitrogénio do anel imidazolado da histidina como elementos importantes envolvidos na ligação à prata.

O ambiente coordenativo ajuda a explicar por que o GHK é estudado como um peptídeo que liga a prata e como um modelo de interações entre metais e peptídeos.

Interações com a albumina e outras moléculas que ligam a prata

Com um pH fisiológico, o GHK-Cu pode participar em diversas equilíbrios coordenativos com a participação de ligantes adicionais.

Lau e Sarkar estudaram as interações entre a prata(II), o GHK, as moléculas que contêm histidina e a albumina sérica [28–30].

A albumina sérica é uma proteína presente em grandes quantidades no plasma sanguíneo. Participa no transporte e na ligação de várias substâncias, incluindo alguns íons metálicos.

A literatura descreve uma alta afinidade tanto para o GHK como para as albuminas na ligação à prata. Nos parâmetros estudados, foram observadas valores de aproximadamente log₁₀ 16,44 para o GHK e log₁₀ 16,2 para as albuminas.

Essas valências sugerem que o GHK pode participar em interações competitivas relacionadas com a ligação à prata.

No entanto, a distribuição da prata em fluidos biológicos depende de algo mais do que apenas a força de ligação entre as duas moléculas isoladas.

A disponibilidade de cobre também é influenciada pelas concentrações de substâncias individuais, os ligantes concorrentes, as interações com proteínas e os sistemas de transporte celulares.

A capacidade do GHK em ligar a metalização constitui, portanto, a base para estudos sobre a transferência de metal e as equações de coordenação.

No entanto, não prova que o GHK-Cu fornece a prata de forma segura a todas as células nem que previne todas as reações oxidativas relacionadas com a prata.

Enzimas dependentes de metal e regulação dos processos redox

O cobre é necessário para a atividade de muitos enzimas importantes.

A lisiase oxidase participa na formação de ligações transversais entre as moléculas de colagénio e elastina.

A desmutase de cobre e zinco, comumente conhecida como SOD1, contribui para a proteção antioxidante, catalizando a conversão de radicais reativos de oxigênio em produtos menos reativos.

A citocromo c oxidase participa no transporte de elétrons no nível mitocondrial e na produção de energia celular.

Como o GHK liga-se à cromo, os cientistas analisaram se o GHK-Cu pode influenciar a disponibilidade desse metal e os processos bioquímicos associados.

A presença do peptídeo que liga a prata não significa, no entanto, que o metal seja diretamente transferido para todos os enzimas dependentes da prata.

As células possuem transportadores especializados, proteínas de ligação e sistemas reguladores que controlam a distribuição intracelular da metaloproteinase.

Esses mecanismos são importantes, pois a cromo livre ou regulada incorretamente pode participar nas reações de oxidação.

Em condições específicas, as reações redox relacionadas com a prata podem contribuir para a formação de formas químicas reativas.

Por isso, o GHK-Cu foi estudado quanto ao seu potencial impacto na reactividade da prata e nos processos oxidativos [31, 32].

Essa dependência é complexa em termos químicos. A ligação da prata pode alterar a reactividade do metal, mas as consequências biológicas dependem de todo o ambiente químico.

A ligação de aldeídos e a química antioxidante

O GHK também foi estudado quanto à sua capacidade de reagirem com aldeídos selecionados que se formam durante a peroxidação dos lipídios.

A peroxidação lipídica inclui reações de oxidação que afetam os lipídios das membranas celulares e outras estruturas que contêm lipídios.

Como resultado dessas reações, podem ser produzidos aldeídos reativos, como o 4-hidroxi-nonenal e a acroleína.

Ambos os compostos são objeto de estudo porque podem interagir com proteínas e outras moléculas celulares.

Em estudos químicos, foi demonstrado que o GHK pode formar produtos de reação com esses aldeídos, o que sugere a sua potencial capacidade de ligação em condições experimentais [31, 32].

Esses resultados fornecem informações sobre a atividade química do GHK.

No entanto, a capacidade de reagirem com aldeídos no sistema laboratorial não prova que o peptídeo previna danos oxidativos nos tecidos humanos.

As concentrações dos reagentes, a presença de moléculas biológicas concorrentes e a velocidade da reação são importantes para avaliar as possíveis consequências biológicas.

A adesão das células e as interações com a matriz extracelular

O GHK-Cu também foi estudado no contexto da adesão das células e da sua interação com os materiais extracelulares.

A adesão celular é essencial para a organização correta das células, pois elas precisam reconhecer o ambiente circundante e interagir com ele.

Em estudos que incluíram células osteoblásticas e modelos de adesão de hepatócitos, analisou-se o efeito dos compostos relacionados com GHK na disseminação das células, na sua adesão e no fenótipo [33, 34].

Estas pesquisas são importantes para o desenvolvimento de biomateriais nos quais os peptídeos podem ser incorporados nas superfícies ou ligados a elas.

Os efeitos observados dependem do tipo de peptídeo, da composição do material, do tipo de células e das condições experimentais.

Proporcionam informações sobre as interações entre os peptídeos e as superfícies, bem como entre as células e a matriz, em vez de evidências diretas de regeneração de tecidos em humanos.

Utilização do GHK-Cu em estudos científicos

O GHK-Cu foi estudado em vários campos de pesquisa molecular e pré-clínica.

Incluem a biologia do stress oxidativo, a sinalização inflamatória, a fibrose, as lesões pulmonares, as respostas neuronais, a regulação dos vasos sanguíneos, a remodelação da matriz extracelular e a análise da expressão genética.

As seções seguintes apresentam os resultados experimentais mais importantes e suas limitações.

Investigação sobre o efeito antioxidante e os processos redox

Os enzimas antioxidantes dependentes de cobre constituem um elemento importante na proteção celular contra o estresse oxidativo.

Um exemplo é a SOD1, que para funcionar corretamente necessita de cobre e zinco.

Estudos sobre a deficiência de cobre demonstraram que a sua disponibilidade insuficiente pode afetar a atividade da SOD1 e aumentar os valores de parâmetros relacionados com o estresse oxidativo [35–38].

Esses resultados confirmam a importância biológica da regulação adequada da economia de cobre.

No entanto, estudos sobre a deficiência de cobre ou sobre a restabilização da sua oferta na dieta não podem ser tratados automaticamente como evidências de um efeito idêntico do GHK-Cu.

A distinção é importante, pois a biologia de um determinado complexo de cobre depende da sua estrutura molecular, da sua distribuição e da sua interação com os sistemas reguladores da economia desse metal.

Em estudos experimentais que incluíram biomateriais contendo GHK e complexos de tripeptídeos de cobre, foram analisadas as respostas antioxidantes e os parâmetros relacionados às células.

Parte dos estudos abordou se o GHK-Cu influencia a peroxidação lipídica associada à ferritina.

A feritina é uma proteína envolvida no armazenamento de ferro dentro das células.

O ferro pode participar em reações de oxidação quando está presente em formas reativas.

Em estudos, foi demonstrado que a prata, quando combinada com GHK, pode influenciar a peroxidação lipídica dependente de ferrytina em condições experimentais específicas [39, 40].

Estas observações fornecem informações sobre as interações entre os complexos de cobre, os processos relacionados ao ferro e a química das reações oxidativas.

Estudos químicos adicionais analisaram a reação do GHK com produtos de peroxidação lipídica, como o 4-hidroxinonenal e a acroleína [41, 42].

Os resultados justificam estudos adicionais sobre o GHK como uma molécula capaz de participar em reações químicas com aldeídos.

No entanto, a atividade antioxidante demonstrada no teste químico ou no modelo celular não comprova a proteção clínica contra danos oxidativos.

Sinalização inflamatória e regulação das citocinas

O estado inflamatório envolve interações coordenadas entre as células imunitárias, os fatores de sinalização e as respostas tissulares.

Em vários estudos laboratoriais, foi analisado o efeito do GHK-Cu sobre os caminhos inflamatórios.

Em estudos celulares que utilizaram células macrofágicas RAW 264.7 e células epiteliais do intestino Caco-2, foram observadas alterações nos parâmetros oxidativos e inflamatórios após a exposição a GHK-Cu.

Incluíam a redução na produção de espécies reativas de oxigênio, o aumento dos valores de parâmetros antioxidantes relacionados ao glutatione e alterações nos mediadores inflamatórios, como o TNF-α e o IL-6 [43–47].

Os pesquisadores também analisaram os caminhos sinalizadores que envolvem o fator nuclear kappa B (NF-kB) e a quinase de proteína ativa por mitogênios p38 (p38 MAPK).

O NF-κB participa na regulação de genes relacionados com a inflamação, a resistência, a sobrevivência das células e a resposta ao stress.

O caminho MAPK p38 participa de respostas celulares relacionadas a mediadores inflamatórios e estresse ambiental.

Em estudos experimentais, o GHK-Cu foi associado a alterações na sinalização da NF-κB p65 e da MAPK p38.

Esses resultados sugerem que o composto pode influenciar os caminhos envolvidos na resposta inflamatória em condições de laboratório.

No entanto, nem todas as pesquisas citadas na discussão mais ampla avaliam diretamente o GHK-Cu. Parte das publicações apresenta informações gerais sobre os caminhos inflamatórios ou outros compostos experimentais.

Portanto, o simples fato de estudos sobre o NF-κB ou o p38 MAPK não prova que o GHK-Cu provoca um determinado efeito anti-inflamatório clinicamente significativo.

Esses resultados são mais úteis para compreender possíveis interações moleculares e identificar questões que exigem mais experimentos.

Modelos de fibrose, lesões pulmonares e neuroproteção

A fibrose consiste na acumulação ou organização incorreta dos componentes da matriz extracelular nas células.

Pode desenvolver-se em resposta a lesões persistentes, inflamação ou alterações na sinalização celular.

O GHK foi estudado em modelos experimentais de fibrose pulmonar devido ao seu efeito descrito sobre a atividade dos fibroblastos e os caminhos envolvidos no TGF-β.

Em um modelo de fibrose pulmonar induzida por bleomicina em camundongos, os pesquisadores observaram alterações na espessura das células, na pressão causada pelas células inflamatórias e em vias relacionadas com a transição entre o epitélio e o mesênquima [48].

No estudo, a sinalização TGF-β1/Smad foi analisada, uma sinalização que participa das respostas celulares relacionadas à formação de matrizes e à fibração.

Estas observações sugerem que o GHK pode influenciar os caminhos selecionados relacionados com a fibrose em experimentos com animais.

No entanto, o efeito obtido no modelo de doença de rato induzido quimicamente não demonstra eficácia no tratamento do fibrose pulmonar em humanos.

Os mecanismos biológicos, o curso da doença e as circunstâncias clínicas podem variar significativamente.

Em estudos neurobiológicos relacionados ao GHK, também foram analisados o estresse oxidativo, a sinalização inflamatória e possíveis interações com os circuitos de regulação gênica.

Alguns estudos associam esses mecanismos à desacetilase da histona 2 (HDAC2), um enzima envolvido na regulação da cromatina e na expressão gênica.

No entanto, a literatura citada sobre as alterações cognitivas em ratos idosos e os mecanismos relacionados com HDAC também inclui estudos que não confirmam diretamente o efeito específico do GHK-Cu [49].

Por isso, as afirmações relativas à melhoria das funções cognitivas, à redução da neuroinflamação ou à regulação direta do HDAC2 pelo GHK-Cu necessitam de uma distinção clara dos resultados dos estudos sobre outras intervenções experimentais.

As evidências disponíveis justificam o interesse em estudos mecanísticos, mas não confirmam a ação neuroprotetora estabelecida em humanos.

Observações em modelos de angiogênese e biologia vascular

A angiogênese é um processo essencial no desenvolvimento e reparação das células.

Inclui a formação de novos vasos sanguíneos e requer interações coordenadas entre as células endoteliais, fatores de crescimento, componentes da matriz extracelular e tecidos circundantes.

O GHK-Cu foi estudado em sistemas experimentais relacionados à sinalização vascular e à regeneração tecidual.

Em alguns estudos foram observados alterações nos fatores relacionados à angiogênese, incluindo VEGF e bFGF [50, 51].

Estas proteínas participam na atividade das células endoteliais, no desenvolvimento das veias e artérias e na resposta celular a lesões.

Os cientistas também analisaram as relações entre os compostos relacionados ao GHK e proteínas estruturais, como o colágeno e a elastina.

O colágeno é responsável pela resistência das estruturas, enquanto a elastina apoia a sua capacidade de se esticar e voltar ao seu formato original.

Ambos os aminoácidos são importantes para a estrutura dos vasos sanguíneos e a organização da matriz extracelular.

As alterações na expressão de fatores de crescimento ou na síntese de proteínas da matriz não precisam, no entanto, significar uma melhoria do fluxo sanguíneo.

A reconstrução funcional dos vasos inclui processos adicionais, incluindo a formação dos vasos, o seu maturação, a integração e a regulação fisiológica.

Em alguns estudos mais amplos sobre a regeneração das veias, também é mencionada a ação anticoagulante e a dilatação das veias.

Esses processos fisiológicos são distintos e não se deve presumir que sejam consequência direta da exposição ao GHK-Cu, sem evidências adequadas sobre esse composto específico.

Os resultados atuais, portanto, continuam a ser importantes principalmente para os estudos experimentais sobre angiogênese e biologia vascular.

Evidências a partir de modelos neurais e neurotroficos

O desenvolvimento e a reparação dos neurônios envolve a participação de fatores de crescimento, interações com a matriz extracelular, migração celular e alongamento das espículas neurais.

O aumento de neuritas é um dos parâmetros experimentais utilizados para estudar a diferenciação e o desenvolvimento dos neurônios.

Em estudos iniciais, utilizando a cultura de tecidos nervosos, foi analisado o efeito dos peptídeos e dos condicionadores nutricionais na diferenciação neuronal [52, 53].

Estes estudos contribuíram para um maior interesse nos peptídeos curtos como potenciais reguladores do comportamento das células.

Os materiais relacionados ao GHK também foram analisados em sistemas experimentais de regeneração nervosa.

Em um estudo, foi introduzido um peptídeo que promove a adesão das células aos condutos colágenos utilizados para unir os segmentos rompidos dos nervos [54].

Os cientistas observaram alterações nos fatores de crescimento e nos mediadores inflamatórios, incluindo o fator de crescimento nervoso (NGF) e os neurotrofinos NT-3 e NT-4.

Observações adicionais incluíram parâmetros dos axônios e respostas das células de Schwanna.

As células Schwanna são um componente importante do sistema nervoso periférico. Suportam os axônios e participam da resposta a lesões nervosas periféricas.

No entanto, os resultados obtidos com os fios de colágeno contendo peptídeos não devem ser automaticamente atribuídos ao GHK-Cu em movimento livre.

Os efeitos observados podem ser influenciados pelo biomateriał, pelo ambiente local, pela forma de apresentação do peptídeo e pelo modelo experimental utilizado.

Da mesma forma, o aumento da expressão de fatores de crescimento ou do número de axônios no sistema experimental não comprova a regeneração neurológica funcional em humanos.

Estas pesquisas devem ser interpretadas melhor como análises de biomateriais que contêm peptídeos e sinalização neurotrófica.

Regulação de genes e reconstrução da matriz

Os estudos sobre a expressão genética tornaram-se um elemento importante na discussão científica sobre o GHK e o GHK-Cu.

Os primeiros experimentos concentraram-se nas respostas celulares associadas a feridas, incluindo a atividade dos fibroblastos, a produção de colágeno e a organização da matriz extracelular [55, 56].

Estudos posteriores de Maquart e colaboradores analisaram o efeito do GHK-Cu na síntese de colágeno e em moléculas relacionadas com a matriz [57–59].

Em experimentos que utilizaram fibroblastos cultivados, foram observados alterações na produção de colágeno em concentrações baixas.

Em outros estudos, foram analisados glicosaminoglicanos sulfatados e pequenos proteoglicanos.

Estas partículas participam na organização da matriz extracelular, no regulação da hidratação, na formação de propriedades mecânicas e nas interações entre as células e as tecidos circundantes.

O GHK-Cu também foi associado a alterações na expressão de metaloproteinases maternas, incluindo a MMP-2 [59].

Isso é importante, pois a manutenção da matriz extracelular exige tanto a degradação controlada quanto a síntese.

Apenas um aumento na produção de colágeno não demonstra uma melhoria na organização dos tecidos.

Da mesma forma, a atividade aumentada de MMP pode levar a diferentes consequências, dependendo do tipo de tecido e do contexto biológico.

Os estudos sugerem, portanto, que o GHK-Cu pode influenciar as alterações maternas através de várias vias interacionais.

Estas observações, no entanto, não indicam uma cicatrização sem a formação de cicatrizes nem uma regeneração tecidual previsível em humanos.

Em experimentos adicionais, foram observadas alterações em moléculas como a dekrinina, o sulfato de dermatan e o sulfato de condroitina [60].

Dekoryna é um pequeno proteoglicano envolvido na organização do colágeno e na regulação da matriz extracelular.

O sulfato de dermatan e o sulfato de condroitina são glicosaminoglicanos que influenciam a estrutura e as propriedades das estruturas conjuntivas.

As alterações na sua expressão ou síntese fornecem informações sobre o metabolismo da mãe.

No entanto, não demonstram de forma independente a melhoria da resistência das estruturas teciduais, do seu aspecto ou dos resultados clínicos da cicatrização.

Expressão de integrinas e estudo de células da camada córnea

As células queratinocíticas são o tipo predominante de células da camada córnea.

Participam na formação da barreira cutânea, na diferenciação celular e na resposta aos danos nos tecidos.

Os cientistas da Seoul National University estudaram o efeito do peptídeo de chumbo GHK na expressão das integrinas e na presença de células que exibem expressão positiva de p63 nos queratinócitos [61].

Os integrinas participam no fixamento das células e na comunicação com a matriz extracelular.

A proteína p63 está associada ao desenvolvimento do epitélio e ao suporte de determinadas populações de células epiteliais.

O estudo constatou uma expressão aumentada de integrinas e uma maior proporção de células positivas em relação ao p63 após a exposição ao peptídeo de cobre GHK.

Estas observações sugerem um possível efeito sobre as características celulares relacionadas com a manutenção da epiderme.

No entanto, essas alterações nos marcadores não demonstram por si só um aumento da regeneração da pele em humanos.

Os resultados permanecem limitados aos modelos celulares utilizados e aos parâmetros analisados.

Profilagem de expressão gênica em larga escala

As metodologias informáticas aumentaram as possibilidades de analisar o efeito de diferentes compostos nas redes de expressão gênica.

A Connectivity Map, frequentemente conhecida pelo acrônimo cMap, é um recurso de pesquisa utilizado para comparar padrões de expressão gênica associados a estados biológicos e à exposição a substâncias químicas.

Ações computacionais relacionadas, incluindo MANTRA, foram utilizadas para estudar a relação entre as associações e as respostas transcricionais [62, 63].

O GHK foi discutido neste contexto devido às suas ligações com as amplas mudanças nos padrões de expressão genética.

Em uma das análises, foram identificados 268 genes com expressão aumentada e 167 genes com expressão reduzida.

Em outros estudos, a GHK foi associada a mudanças que envolvem um maior número de genes e vias [9, 62–64].

Esses resultados sugerem que as respostas associadas ao GHK podem envolver vários sistemas biológicos, e não apenas um único alvo molecular.

No entanto, os conjuntos de dados relativos à expressão de genes exigem uma interpretação cuidadosa.

A alteração na quantidade de RNA (mRNA) não precisa levar a uma alteração correspondente no nível de proteína ou na função biológica.

Os padrões de expressão genética também dependem do tipo de células, das condições de exposição, das metodologias de medição e dos limites analíticos.

Por isso, os números de genes associados a um determinado composto não devem ser considerados como uma medida direta da sua potência terapêutica.

As previsões computacionais são valiosas na formulação de hipóteses, mas necessitam de confirmação experimental.

Redes genéticas relacionadas com a neuroproteção

As análises da expressão genética abordadas na literatura sobre o GHK identificaram alterações que abrangem genes relacionados com o funcionamento dos neurônios, a sobrevivência das células e a sinalização de desenvolvimento.

Os exemplos incluem SIGMAR1, EPM2A, NAIP, FGFR2 e SLIT2 [65].

Esses genes participam de diversos processos biológicos.

SIGMAR1 codifica o receptor sigma-1, uma proteína envolvida na sinalização celular e em processos relacionados ao estresse.

O EPM2A está associado à laforina, uma proteína importante para o metabolismo do glicogênio.

O NAIP participa de vias relacionadas com a sobrevivência celular e a resposta imunológica.

O FGFR2 codifica um receptor envolvido na sinalização do fator de crescimento dos fibroblastos.

O SLIT2 participa nos processos de desenvolvimento relacionados com a orientação e a migração das células.

A participação desses genes na biologia do sistema nervoso despertou o interesse em sua possível relação com as respostas transcricionais induzidas pela GHK.

No entanto, a presença do gene no conjunto de dados relacionado com o GHK não prova que o GHK controla diretamente esse gene em qualquer ambiente biológico.

Além disso, não prova que o GHK previna a demência ou melhore as funções neurológicas.

Os estudos citados sobre algumas dessas partes dos genes fornecem um contexto biológico mais amplo, e não evidências diretas do efeito do GHK-Cu.

Portanto, esses resultados devem ser interpretados como observações que servem para formular hipóteses sobre a regulação dos genes e a neurobiologia.

Os resultados dos estudos epigenéticos e dos caminhos relacionados com HDAC

A regulação epigenética inclui mudanças na atividade dos genes que não exigem modificação da sequência básica do DNA.

Um dos mecanismos importantes é a modificação dos histonas.

Os histones são proteínas em torno das quais o DNA se organiza. Suas modificações químicas podem afetar a disponibilidade de determinados regiões do DNA para o sistema de transcrição.

As desacetilases histônicas (HDAC) eliminam grupos acetilo das histonas e de outros substratos proteicos.

A sua atividade pode influenciar a estrutura da cromatina e a expressão dos genes.

O GHK foi discutido no contexto de rotas relacionadas a HDAC devido a observações mais amplas sobre a regulação gênica e as alterações transcricionais associadas com a idade [66, 67].

No entanto, os estudos citados sobre HDAC e o envelhecimento epigenético fornecem principalmente informações gerais sobre esses processos biológicos.

Em si mesmos, eles não demonstram que o GHK-Cu é um inibidor HDAC clinicamente comprovado.

Da mesma forma, as mudanças nos padrões de expressão de genes não devem ser automaticamente descritas como uma inversão do envelhecimento epigenético.

A afirmação direta de inibição de HDAC requer experimentos que demonstrem o efeito sobre a atividade desses enzimas em condições específicas.

As afirmações relativas à reversão do envelhecimento exigem evidências adicionais que vinculem os ensaios moleculares a resultados biológicos significativos.

As relações entre GHK, a regulação da cromatina e a expressão genética associada ao envelhecimento permanecem, portanto, um campo de investigação mecanística adicional.

Qualidade e análise de materiais GHK-Cu destinados a pesquisas científicas

A caracterização analítica do GHK-Cu é importante, pois os resultados dos testes dependem da identidade, composição e qualidade do material analisado.

O preparato denominado GHK-Cu deve ser avaliado por métodos que permitam caracterizar o componente peptídico e fornecer evidências sobre sua forma associada à prata.

A análise de qualidade pode incluir cromatografia, espectrometria de massa, análise da contagem de metais e outras técnicas selecionadas de acordo com o objetivo analítico específico.

No entanto, nenhum teste rotineiro individual confirma todos os parâmetros qualitativos importantes.

Química de cromatografia líquida associada a espectrometria de massa

A cromatografia líquida associada à espectrometria de massa (LC-MS) combina a cromatografia de separação com uma detecção baseada na massa dos íons.

Uma parte da cromatografia permite a separação dos compostos presentes na amostra.

O espectrómetro de massa fornece informações sobre os íons com base na sua massa em relação ao seu carregamento.

A LC-MS pode auxiliar na identificação de um peptídeo através da detecção de íons moleculares compatíveis com a ligação esperada.

Dependendo da metodologia utilizada, informações adicionais sobre a fragmentação podem ajudar a caracterizar a sequência peptídica.

No entanto, a observação da massa molecular compatível com a GHK não confirma por si só todos os aspectos da estrutura da molécula.

Da mesma forma, a detecção de sinais compatíveis com a presença de uma forma relacionada à prata não precisa provar a completa geometria coordenada nem excluir todos os complexos alternativos.

A caracterização da ligação da prata pode exigir estudos adicionais utilizando métodos espectroscópicos adequados ou análises da concentração de metal.

O LC-MS é, portanto, uma ferramenta analítica valiosa, mas a confiabilidade dos resultados obtidos depende da metodologia, dos padrões de referência, do preparo da amostra e dos dados complementares.

Cromatografia líquida de alta eficiência e pureza

A cromatografia líquida de alta eficiência (PLHPLC) é amplamente utilizada para separar os componentes dos preparatos peptídicos.

Pode ajudar a identificar contaminantes relacionados com a síntese, degradação ou outros processos de produção.

O resultado da pureza cromatográfica geralmente se baseia em sinais relativos detectados em condições analíticas específicas.

No entanto, a pureza cromatográfica não é a mesma coisa que a identidade química, a concentração de peptídeo, a estequiometria do complexo de cobre ou a qualidade geral do material.

Por exemplo, a pureza declarada de 98% não tem de significar que 98% da massa total da amostra constitui o complexo GHK-Cu corretamente formado.

A interpretação depende da metodologia analítica utilizada e do método de cálculo do resultado.

O cromatograma também não confirma a esterilidade, a presença de endotoxinas ou a ausência de todos os possíveis contaminantes.

O material de origem descreve a especificação de pureza declarada de pelo menos 98% para os preparativos de pesquisa específicos.

Essa especificação deve ser considerada uma declaração do fornecedor, a menos que esteja acompanhada de documentação analítica disponível relativa a uma determinada lotação.

Filtragem, esterilização e controle de poluentes por partículas sólidas

O material de origem descreve a filtragem por membranas com um tamanho de poro de 0,22 micrometros como um elemento do processo de preparação do material.

A filtragem por membrana pode ser utilizada para limitar certas contaminantes microbiológicos, desde que o método e as condições sejam adequados.

No entanto, a passagem do solvente através de um filtro de 0,22 micrômetros não confirma em si mesma a esterilidade do produto final.

A garantia da esterilidade depende de todo o processo, incluindo o equipamento, o ambiente, a integridade do filtro, a forma de manusear o material e as procedimentos de verificação validados.

A filtragem também não precisa eliminar endotoxinas, poluentes químicos dissolvidos ou todos os tipos de poluentes em partículas sólidas.

Por isso, os argumentos relativos à esterilidade ou à adequação para um determinado uso de pesquisa exigem testes e documentação adequados, e não baseiam-se exclusivamente na área superficial do filtro.

Boa Prática de Laboratório e Documentação

A Boa Prática de Laboratório (GLP) é um sistema de qualidade relacionado à organização, condução, monitoramento, documentação e relato de determinados estudos não clínicos.

A afirmação de que os procedimentos são conformes com os princípios da GLP não deve significar conformidade formal com os requisitos da GLP nem a posse de um certificado adequado.

A importância dessa declaração depende das especificidades das procedimentos, da documentação e do sistema de qualidade utilizado.

Os materiais de pesquisa também podem ser acompanhados de um certificado de análise (Certificate of Analysis, COA).

O COA geralmente contém os resultados selecionados das análises referentes a uma determinada lotação.

Informações importantes podem incluir testes de identidade, medições de pureza, indicação da concentração de substâncias, métodos analíticos utilizados, identificadores de lotes e outros parâmetros da especificação.

No entanto, a validez informativa da COA depende dos métodos e dos dados que a fundamentam.

O próprio certificado não prova que o material seja adequado para administração a pessoas, uso cosmético ou terapêutico.

Da mesma forma, a pureza analítica não confirma a eficácia biológica nem a segurança clínica.

Nos estudos científicos, a documentação qualitativa mais útil deve ser detalhada, identificável e suficientemente completa para permitir uma interpretação adequada dos resultados analíticos.

Mais informações sobre a distinção entre fabricantes, fornecedores, declarações de qualidade e documentação de lotes podem ser encontradas no artigo. Produtores e fornecedores de peptídeos.

Resumo

O GHK-Cu é um complexo de tripeptídio de cobre presente naturalmente e estudado há mais de cinco décadas.

A sua estrutura molecular, as propriedades de ligação à prata e as interações com os sistemas celulares fizeram dele um objeto importante para a pesquisa sobre a bioquímica de peptídeos, a biologia da matriz extracelular, o estresse oxidativo e a regulação genética.

O complexo é formado por glicol-L-histidil-L-lisina e cobre(II). As análises estruturais permitiram identificar locais de coordenação contendo nitrogênio que participam na ligação da prata e influenciam as propriedades químicas da molécula.

Estas características constituem a base para analisar as interações de peptídeos curtos com íons metálicos e o impacto da química coordenada nos processos biológicos.

Em estudos experimentais, foram observados alterações na síntese de colágeno, na produção de glicosaminoglicanos, na expressão de metaloproteinases da matriz, na sinalização das integrinas, nos mediadores inflamatórios e em parâmetros relacionados com a proteção antioxidante.

Os estudos adicionais incluíram respostas relacionadas com o GHK em culturas de fibroblastos, modelos de feridas, experiências sobre danos pulmonares, sistemas neurais e biomateriais contendo peptídeos.

As análises informáticas também associaram o GHK a mudanças abrangentes na expressão genética das células.

A importância científica dessas observações depende, no entanto, do contexto experimental.

As alterações na expressão de genes não precisam levar a alterações na atividade das proteínas.

A produção aumentada de colágeno não precisa significar uma melhoria na estrutura das células.

As alterações nos marcadores inflamatórios não constituem uma evidência clínica independente de ação anti-inflamatória.

Da mesma forma, os resultados de estudos que envolvem células cancerosas, modelos de fibrose pulmonar e culturas de neurônios não demonstram eficácia contra as doenças correspondentes em humanos.

Na literatura também existem diferenças importantes entre GHK e GHK-Cu, bem como entre os experimentos que abordam diretamente o composto em questão e os estudos que fornecem apenas um contexto biológico geral.

Esses distincos devem ser mantidos durante a interpretação dos mecanismos de ação e das aplicações propostas.

Uma questão importante é a qualidade analítica. Técnicas como LC-MS e HPLC podem fornecer informações valiosas sobre a identidade e a pureza, mas não confirmam automaticamente todas as propriedades estruturais, microbiológicas e biológicas do produto.

Em geral, o GHK-Cu permanece como uma ferramenta útil para estudos moleculares sobre a coordenação da metaloproteinase, a sinalização celular, o metabolismo da matriz extracelular e a resposta ao estresse oxidativo.

Suas propriedades químicas conhecidas e a literatura pré-clínica extensa constituem a base para futuros estudos científicos. Entretanto, os argumentos relativos à eficácia clínica e à segurança exigem estudos separados e controlados com pessoas.

Aviso legal

Este artigo tem caráter exclusivamente educacional e científico-informacional. Trata-se de estudos sobre a estrutura molecular do GHK-Cu, a coordenação da metalização, mecanismos biológicos, características analíticas e aplicações experimentais.

Não constitui conselho médico, não recomenda o uso de GHK-Cu em humanos ou animais, não estabelece esquemas de tratamento e não apóia qualquer aplicação diagnóstica, terapêutica ou cosmética.

Os resultados obtidos em culturas celulares, experimentos em animais, análises computacionais e estudos bioquímicos não devem ser interpretados como evidência de eficácia clínica ou segurança em humanos.

As informações relativas à pureza analítica, aos materiais de classe experimental, aos certificados de análise ou de ensaios laboratoriais não comprovam que o produto em questão seja adequado para administração a pessoas ou para qualquer outro uso regulamentado por lei.

Todas as decisões médicas devem ser tomadas por profissionais de saúde devidamente qualificados com base em evidências clínicas adequadas e nos regulamentos vigentes.

Referências

1. Pickart L. A Tripeptídio do soro humano que aumenta o crescimento de hepatócitos neoplásicos e a sobrevivência de hepatócitos normais. São Francisco, Califórnia, EUA: Universidade da Califórnia; 1973.
2. Pickart L., Freedman J. H., Loker W. J., et al. O trípeptido plasmático que modula o crescimento pode funcionar facilitando a absorção de cobre pelas células. Nature. 1980;288(5792):715–717. doi: 10.1038/288715a0.
3. Pickart L. Utilização do GHL-Cu como agente de cicatrização e anti-inflamatório. 1988, http://www.freepatentsonline.com/4760051.html.
4. Downey D., Larrabee W. F., Jr., Voci V., Pickart L. A aceleração da cicatrização de feridas usando cobre (II) glicilhistidil-lisina (Glycyl-histidyl-lysine copper (II)) Surgical Forum. 1985;25:573–575.
5. Pickart L. Iamin: um fator de crescimento humano com múltiplas propriedades para a cicatrização de feridas. Em: Sorenson J., editor. Biologia de Complexos de Cobre. Clifton, NJ, EUA: Humana Press; 1987. pp. 273–285.
6. Meiners S., Eickelberg O. Descobrimento de medicamentos personalizados de última geração: o tripeptídeo GHK ocupa um lugar de destaque na doença pulmonar obstrutiva crônica. Genome Medicine. 2012;4(8, artigo 70) doi: 10.1186/gm371.
7. Hong Y., Downey T., Eu K. W., Koh P. K., Cheah P. Y. Uma assinatura ‘pro-metástase’ em pacientes com câncer colorretal esporádico e com capacidade de reparação de erros em estágios iniciais e suas implicações para possíveis tratamentos terapêuticos. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
8. Gruchlik A., Jurzak M., Chodurek E. W., Dzierzewicz Z. Efeito do Gly-Gly-His, Gly-His-Lys e de seus complexos de cobre na secreção de IL-6 dependente de TNF-α em fibroblastos dérmicos humanos normais. Acta Poloniae Pharmaceutica. 2012;69(6):1303–1306.
9. Pickart L., Vasquez-Soltero J. M., Margolina A. GHK e DNA: restaurando o genoma humano à saúde. BioMed Research International. 2014;2014:10. doi: 10.1155/2014/151479.151479
10. Wegrowski Y., Maquart F. X., Borel J. P. Estimulação da síntese de glicosaminoglicanos sulfatados pelo complexo tripeptídico-cobre Glycyl-L-histidil-L-lisina-Cu2+. Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
11. Siméon A., Emonard H., Hornebeck W., Maquart F.-X. O complexo tripeptídico-cobre glicil-L-histidil-L-lisina-Cu2+ estimula a expressão da matriz de metaloproteinase-2 em culturas de fibroblastos. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
12. Ehrlich H. Estimulação da cicatrização da pele em ratos com imunossupressão. Proceedings do Simpósio sobre Colágeno e Reparação da Pele; Setembro de 1991; Reims, França.
13. Siméon A., Wegrowski Y., Bontemps Y., Maquart F.-X. Expressão de glicosaminoglicanos e pequenos proteoglicanos em feridas: modulação pelo complexo tripeptídico-cobre glicil-L-histidil-L-lisina-Cu2+. Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
14. McCormack M. C., Nowak K. C., Koch R. J. O efeito do tripeptídeo de cobre e do tretinoína na produção de fatores de crescimento em um modelo de fibroblastos sem soro. Archives of Facial Plastic Surgery. 2001;3(1):28–32.
15. Buffoni F., Pino R., Dal Pozzo A. Efeito de complexos de tripeptídeo-cobre no processo de cicatrização de feridas cutâneas e em fibroblastos cultivados. Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie. 1995;330(3):345–360.
16. Gul N. Y., Topal A., Cangul I. T., Yanik K. Os efeitos do complexo tópico de cobre e do laser de hélio-neônio na cicatrização de feridas em coelhos. Veterinary Dermatology. 2008;19(1):7–14. doi: 10.1111/j.1365-3164.2007.00647.x.
17. Cangul I. T., Gul N. Y., Topal A., Yilmaz R. Avaliação dos efeitos do complexo de tripeptídeo-cobre tópico e do óxido de zinco na cicatrização de feridas abertas em coelhos. Veterinary Dermatology. 2006;17(6):417–423. doi: 10.1111/j.1365-3164.2006.00551.x.
18. Pickart L. Método de uso de compostos contendo cobre(II) para acelerar a cicatrização de feridas. 1992, http://www.freepatentsonline.com/5164367.html.
19. Arul V., Kartha R., Jayakumar R. Uma abordagem terapêutica para a cicatrização de feridas diabéticas utilizando matrizes de colágeno incorporadas com biotinilado de GHK. Life Sciences. 2007;80(4):275–284. doi: 10.1016/j.lfs.2006.09.018.
20. Canapp S. O., Jr., Farese J. P., Schultz G. S., et al. O efeito do complexo tópico de tripeptídeo-cobre na cicatrização de feridas abertas isquêmicas. Veterinary Surgery. 2003;32(6):515–523. doi: 10.1111/j.1532-950X.2003.00515.x.
21. Swaim S. F., Vaughn D. M., Kincaid S. A., et al. Efeito de medicamentos injetados localmente na cicatrização de feridas em pele de coxa em cães. American Journal of Veterinary Research. 1996;57(3):394–399.
22. Campbell J. D., McDonough J. E., Zeskind J. E., et al. Uma assinatura de expressão gênica da destruição pulmonar associada ao enfisema e sua reversão pelo tripeptídeo GHK. Genome Medicine. 2012;4, artigo 67 doi: 10.1186/gm367.
23. Boo S., Dagnino L. Integrinas como moduladoras da sinalização do fator de crescimento beta durante a regeneração da pele após lesão. Advances in Wound Care. 2013;2(5):238–246. doi: 10.1089/wound.2012.0394.
24. Lubick K., Radke M., Jutila M. O securinine, um antagonista do receptor GABAA, aumenta a eliminação dos macrófagos pelo C. burnetii na fase II: comparação com os agonistas do TLR. Journal of Leukocyte Biology. 2007;82(5):1062–1069. doi: 10.1189/jlb.0407255.
25. Matalka L. E., Ford A., Unlap M. T. O tripeptídeo GHK induz a morte celular programada em células neuroblastoma SH-SY5Y. Journal of Biotechnology & Biomaterials. 2012;2, artigo 144 doi: 10.4172/2155-952X.1000144.
26. Pollard J. D., Quan S., Kang T., Koch R. J. Efeitos do tripeptídeo de cobre no crescimento e na expressão de fatores de crescimento em fibroblastos normais e irradiados. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
27. Jose S., Hughbanks M. L., Binder B. Y. K., Ingavle G. C., Leach J. K. Secretão de fatores tróficos aumentada por células mesenquimais estaminais/stromais com hidrogéis de alginato modificados com glicina-histidina-lisina (GHK). Acta Biomaterialia. 2014;10(5):1955–1964. doi: 10.1016/j.actbio.2014.01.020.
28. Lau S. J., Sarkar B. A interação entre o cobre(II) e o glicil-L-histidil-L-lisina, um tripeptídeo de modulação do crescimento no plasma. Biochemical Journal. 1981;199(3):649–656. doi: 10.1042/bj1990649.
29. Perkins C. M., Rose N. J., Weinstein B., Stenkamp R. E., Jensen L. H., Pickart L. A estrutura de um complexo de cobre do fator de crescimento glicil-L-histidil-L-lisina com resolução de 1,1 Å. Inorganica Chimica Acta. 1984;82(1):93–99. doi: 10.1016/s0020-1693(00)82544-x.
30. Freedman J. H., Pickart L., Weinstein B., Mims W. B., Peisach J. Estrutura do complexo glicil-L-histidil-L-lisina-cobre(II) em solução. Biochemistry. 1982;21(19):4540–4544. doi: 10.1021/bi00262a004.
31. Pickart L., Lovejoy S. A atividade biológica do fator de crescimento de ligação ao cobre do plasma humano: glicil-l-histidil-l-lisina. Methods in Enzymology. 1987;147:314–328. doi: 10.1016/0076-6879(87)47121-8.
32. Beretta G., Arlandini E., Artali R., Anton J. M. G., Maffei Facino R. Capacidade de sequestro de acroleína do tripeptídio endógeno glicil-histidil-lisina (GHK): caracterização dos produtos de conjugação por ESI-MSn e cálculos teóricos. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
33. Godet D., Marie P. J. Efeitos do complexo de cobre tripeptídico glicil-L-histidil-L-lisina sobre a disseminação celular osteoblástica, a fixação e o fenótipo. Biologia Celular e Molecular (Noisy-le-Grand, França) 1995;41(8):1081–1091.
34. Kawase M., Miura N., Kurikawa N., et al. Imobilização do fator de crescimento tripepridico glicil-L-histidil-L-lisina em stilbazol quaternizado em poli(vinilálcool) (PVA-SbQ) e seu uso como ligante para a fixação das hepatócitos. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 1999;22(9):999–1001. doi: 10.1248/bpb.22.999.
35. Lutsenko S, Bhattacharjee A, Hubbard AL. Máquinas de manipulação do cobre no cérebro. Metallomics. 2010;2(9):596–608. doi: 10.1039/c0mt00006j.
36. Hawk SN, Lanoue L, Keen CL, Kwik-Uribe CL, Rucker RB, Uriu-Adams JY. Os embriões de ratos com deficiência de cobre apresentam atividade baixa de superóxido dismutase e níveis elevados de anões de superóxido. Biology of Reproduction. 2003;68(3):896–903. doi: 10.1095/biolreprod.102.009167.
37. Bayer TA, Schäfer S, Simons A, et al. A Cu dietética estabiliza a atividade da superóxido dismutase 1 do cérebro e reduz a produção de amilóide Aβ em ratos transgênicos APP23. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2003;100(24):14187–14192. doi: 10.1073/pnas.2332818100.
38. Arul V, Gopinath D, Gomathi K, Jayakumar R. GHK peptide incorporado na matriz colágica: um biomaterial novo para a cicatrização de feridas dérmicas em ratos. Journal of Biomedical Materials Research. 2005;73(2):383–391. doi: 10.1002/jbm.b.30246.
39. Miller DM, DeSilva D, Pickart L, Aust SD. Efeitos do Cu(II) quelado com glicilhistidil-lisilo na peroxidação lipídica dependente de ferritina. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1990;264:79–84. doi: 10.1007/978-1-4684-5730-8_11.
40. Alberghina M, Lupo G, La Spina G, et al. Efeito citoprotector de complexos de cobre(II) contra danos induzidos pelo etanol na mucosa gástrica de ratos. Journal of Inorganic Biochemistry. 1992;45(4):245–259. doi: 10.1016/0162-0134(92)84013-d.
41. Beretta G, Artali R, Regazzoni L, Panigati M, Facino RM. O glicil-histidil-lisina (GHK) é um inibidor da α,β-4-hidroxi-trans-2-nonenal: uma comparação com a carnosina. Insights into the mechanism of reaction by electrospray ionization mass spectrometry, 1H NMR, and computational techniques. Chemical Research in Toxicology. 2007;20(9):1309–1314. doi: 10.1021/tx700185s.
42. Beretta G, Arlandini E, Artali R, Anton JM, Maffei Facino R. Capacidade de sequestro de acroleína do tripeptídeo endógeno glicil-histidil-lisina (GHK): caracterização dos produtos de conjugação por ESI-MSn e cálculos teóricos. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
43. Park JR, Lee H, Kim SI, et al. O complexo tri-péptido GHK-Cu melhora a lesão pulmonar aguda induzida pelo lipopolissacarídeo em ratos. Oncotarget, 2016, 7(36): 58405.
44. Gao M, Chen L, Yu H, et al. O diosgenina reprime a atividade de NF-κB p65/p50 e de p38MAPK e atenua a lesão pulmonar aguda induzida pelo lipopolissacarídeo em ratos. International immunopharmacology, 2013, 15(2): 240–245.
45. Liu T, Zhang L, Joo D, et al. Sinalização NF-κB na inflamação. Transdução de sinal e terapia direcionada, 2017, 2(1): 1–9.
46. As vias de sinalização MAPK de Kaminska B como alvos moleculares para a terapia anti-inflamatória — dos mecanismos moleculares aos benefícios terapêuticos. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Proteins and Proteomics, 2005, 1754(1–2): 253–262.
47. Yong HY, Koh MS, Moon A. Os inibidores da MAPK p38 para o tratamento de doenças inflamatórias e câncer. Opinião especializada sobre medicamentos em investigação, 2009, 18(12): 1893–1905.
48. Zhou XM, Wang GL, Wang XB, et al. O peptídeo GHK inibe a fibrose pulmonar induzida pelo bleomicina em ratos através da supressão da transição epitelial-mesenquimal mediada por TGFβ1/Smad. Frontiers in Pharmacology, 2017, 8: 904.
49. Mukherjee K, Lee A, Zhu L, et al. A deterioração cognitiva causada pela privação de sono em ratos idosos é aliviada pela rapamicina. Aging Pathobiology and Therapeutics, 2019, 1(1): 05–09.
50. Kalaria RN. Base vascular da degeneração cerebral: controles falhos e fatores de risco para a demência. Nutrition Reviews. 2010;68(supl. 2):S74–S87. doi: 10.1111/j.1753-4887.2010.00352.x.
51. Pollard JD, Quan S, Kang T, Koch RJ. Efeitos do tripeptídeo de cobre no crescimento e na expressão de fatores de crescimento por fibroblastos normais e irradiados. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
52. Sensenbrenner M, Jaros GG, Moonen G, Meyer BJ. Efeito do meio condicionado na diferenciação das células nervosas. Experientia. 1980;36(6):660–662. doi: 10.1007/BF01970123.
53. Lindner G, Grosse G, Halle W, Henklein P. O efeito de um tripeptídeo sintético cultivado em tecido nervoso in vitro. Zeitschrift für Mikroskopisch-Anatomische Forschung. 1979;93(5):820–828. (Ger).
54. Ahmed MR, Basha SH, Gopinath D, Muthusamy R, Jayakumar R. Regulação inicial de fatores de crescimento e mediadores inflamatórios durante a regeneração nervosa em presença de tubos de colágeno incorporados com peptídeo adesivo celular. Journal of the Peripheral Nervous System. 2005;10(1):17–30. doi: 10.1111/j.1085-9489.2005.10105.x.
55. Pickart L. Uso do GHL-Cu como agente de cicatrização e anti-inflamatório. Patente dos Estados Unidos 4.760.051, julho de 1988.
56. Downey D, Larrabee WF, Voci V, Pickart L. A aceleração da cicatrização de feridas utilizando glicil-histidil-lisil Cu(II) Surgical Forum. 1985;36:573–575.
57. Maquart FX, Pickart L, Laurent M, Gillery P, Monboisse JC, Borel JP. Estimulação da síntese de colágeno em culturas de fibroblastos pelo complexo tripeptídico-cobre glicol-L-histidil-L-lisina-Cu2+. FEBS Letters. 1988;238(2):343–346. doi: 10.1016/0014-5793(88)80509-x.
58. Wegrowski Y, Maquart FX, Borel JP. Estimulação da síntese de glicosaminoglicanos sulfatados pelo complexo de tripeptídeo-cobre glicil-L-histidil-L-lisina-Cu2+. Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
59. Siméon A, Emonard H, Hornebeck W, Maquart FX. O complexo de tripeptídeo-cobre glicil-L-histidila-L-lisina-Cu2+ estimula a expressão da matriz de metil-proteases-2 em culturas de fibroblastos. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
60. Siméon A, Wegrowski Y, Bontemps Y, Maquart FX. Expressão de glicosaminoglicanos e pequenos proteoglicanos em feridas: modulação pelo complexo de tripeptídeo-cobre glycyl-L-histidil-L-lisina-Cu2+. Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
61. Kang YA, Choi HR, Na JI, et al. O cobre-GHK aumenta a expressão de integrina e a positividade do p63 nos queratinócitos. Archives of Dermatological Research. 2009;301(4):301–306. doi: 10.1007/s00403-009-0942-x.
62. Lamb J. The Connectivity Map: uma nova ferramenta para a pesquisa biomédica. Nature Reviews Cancer. 2007;7(1):54–60. doi: 10.1038/nrc2044.
63. Iorio F, Bosotti R, Scacheri E, et al. Descobrimento do mecanismo de ação do medicamento e reposicionamento de medicamentos a partir de respostas transcricionais. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2010;107(33):14621–14626. doi: 10.1073/pnas.1000138107.
64. Hong Y, Downey T, Eu KW, Koh PK, Cheah PY. Uma assinatura ‘pro-metástase’ em pacientes com cancro colorretal esporádico com capacidade de reparação de erros em estágios iniciais e suas implicações para possíveis terapêuticas. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
65. Huang P, Kishida S, Cao D, et al. O fator de diferenciação neuronal neuroD1 reprime a expressão do fator repelente neuronal Slit2 e promove a motilidade celular e a formação de tumores no neuroblastoma. Cancer Research. 2011;71(8):2938–2948. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-10-3524.
66. Fischer A, Sananbenesi F, Mungenast A, Tsai LH. A seleção de HDACs adequados para o tratamento de distúrbios cognitivos. Trends in Pharmacological Sciences. 2010;31(12):605–617. doi: 10.1016/j.tips.2010.09.003.
67. Koch CM, Wagner W. Signatura epigenética do envelhecimento para determinar a idade em diferentes tecidos. Aging. 2011;3(10):1018–1027. doi: 10.18632/aging.100395.