GHK-Cu peptidas: molekulinė struktūra, veikimo mechanizmai ir pritaikymas moksliniuose tyrimuose

GHK-Cu yra natūraliai pasitaikantis vario tripeptido kompleksas, kuris kelia mokslininkų susidomėjimą dėl savo dalyvavimo ląstelinėje komunikacijoje, tarpląstelinės matrikso reguliavime ir biologiniuose procesuose, susijusiuose audinių palaikymu ir atstatymu. Nuo jo atradimo 1973 metais, kurį padarė Loren Pickart, tyrėjai analizuoja jo molekulinę struktūrą, gebėjimą jungti varį, poveikį genų ekspresijai ir sąveiką su ląstelių signaliniais keliais, dalyvaujančiais uždegiminiuose procesuose, oksidaciniame strese ir audinių persitvarkyme.

Šis junginys pirmą kartą buvo identifikuotas tyrimų, susijusių su žmogaus serumo sudedamosiomis dalimis ir jų poveikiu baltymų sintezei ląstelėse, metu. Pickart pastebėjo, kad iš serumo gautas faktorius gali paveikti senstančių kepenų ląstelių elgseną, paskatindamas jaunesnėms ląstelėms būdingus baltymų sintezės modelius [1]. Vėlesni tyrimai leido identifikuoti tripeptidą glicil-L-histidil-L-liziną (GHK) ir išanalizuoti jo gebėjimą suformuoti stabilų kompleksą su dvivalenčiais vario jonais (Cu²⁺).

GHK sudaro trys aminorūgštys: glicinas, histidinas ir lizinas. Susijungęs su vario(II) jonu, jis sudaro kompleksą, paprastai vadinamą GHK-Cu arba vario peptidu GHK.

Šis peptidas buvo aptiktas žmogaus biologiniuose skysčiuose, įskaitant plazmą, seiles ir šlapimą. Remiantis paskelbtais duomenimis, jo koncentracija plazmoje mažėja su amžiumi – nuo maždaug 200 ng/mL 20 metų amžiuje iki maždaug 80 ng/mL 60 metų amžiuje [2–9]. Šie stebėjimai prisidėjo prie tyrimų, susijusių su GHK, su senėjimu susijusių ląstelių pokyčių ir audinių procesų reguliavimo sąsajomis, plėtros.

Eksperimentiniais tyrimais įrodyta, kad GHK-Cu gali daryti įtaką kolageno sintezei, tarpląstelinės matrikso remodeliacijai, angiogeniniams signalams ir antioksidacinių fermentų aktyvumui. Fibroblastų kultūrose ir gyvūnų modeliuose taip pat buvo analizuojamas jo poveikis uždegiminiams mediatoriams, ląstelių migracijai ir su audinių remodeliacija susijusiems genų raiškos modeliams.

Kai kurios analizy siekė GHK su pokyčiais, susijusiais su daugiau nei 4000 genų, o tai rodo, kad jo biologinis aktyvumas gali apimti daugelį tarpusavyje susijusių ląstelių takų [9].

Tačiau genų ekspresijos pokyčiai automatiškai nereiškia geresnio audinių funkcionavimo ar palankių klinikinių rezultatų. Daugelis stebėjimų yra gauti iš ląstelių kultūrų, kompiuterinių analizių arba eksperimentų su gyvūnais.

GHK-Cu išlieka svarbiu molekulinių ir ikiklinikinių tyrimų objektu, ypač vario koordinacijos, ekstralelrinės matrikso biologijos, oksidacinio streso ir ląstelių atako į pažeidimus kontekste.

Kas yra GHK-Cu?

GHK-Cu yra koordinacinis kompleksas, susidarantis, kai tripeptidas glicilo-L-histidilo-L-lizinas susijungia su vario(II) jonu. Gebėjimas koordinuoti varį yra viena iš jo molekulinių savybių, skiriančių jį nuo daugelio kitų trumpų peptidų [1, 2].

Varis yra būtinas mikroelementas, dalyvaujantis daugybėje biologinių procesų. Jis palaiko fermentų aktyvumą, mitochondrijų energijos gamybą, apsaugą nuo oksidacinio streso bei jungiamojo audinio susidarymą ir palaikymą.

Vuo metu vario apyvaita turi būti griežtai reglamentuojama, nes nesusietas arba netinkamai kontroliuojamas varis gali dalyvauti reakcijose, sukeliančiose reaktyviųjų deguonies formų susidarymą.

GHK sukuria molekulinę aplinką, leidžiančią sujungti varį ir paveikti jo chemines savybes. Dėl šios sąveikos GHK-Cu tapo naudingu tyrimų modeliu, padedančiu analizuoti mažuosius peptidus dalyvaujant metalų koordinacijoje ir ląstelių signalizacijoje.

Ancesti tyrimai buvo sutelkti į jo poveikį fibroblastams – ląstelėms, atsakingoms už daugelio jungiamojo audinio komponentų gamybą ir palaikymą.

Fibroblastai sintetina kolageną, su elastinu susijusius komponentus, glikozaminoglikanus ir kitas tarpląstelinės matrikso molekules. Šios medžiagos atsako už mechanines audinių savybes, organizaciją ir struktūrinį stabilumą.

Borelio, Maquarto ir bendradarbių tyrimai parodė, kad GHK-Cu gali paveikti ekstraląnelinės matrikso metabolizmą fibroblastų kultūrose netgi esant maždaug 1–10 nanomolių litre (nM) koncentracijai [10–13].

Stebėti efektai apėmė kolageno gamybos ir irimo, sulfatuotų glikozaminoglikanų bei smulkių proteoglikanų, tokių kaip dekorinas, pokyčius.

Svarbu tai, kad tarpląstelinės matrikso palaikymas reikalauja daugiau nei tik struktūrinių baltymų gamybos padidinimo.

Taisyklinga audinių pertvarka remiasi koordinuota matricos komponentų sinteze, modifikacija ir irimu.

Matrikso metaloproteinazės (MMP) dalyvauja ardant tarpląselinį matriksą, tuo tarpu audinių metaloproteinazių inhibitoriai (TIMP) padeda reguliuoti jų aktyvumą.

Eksperimentiniuose tyrimuose pastebėta, kad GHK-Cu veikia MMP aktyvumą ir inhibitorių, tokių kaip TIMP-1 ir TIMP-2, ekspresiją [11, 12].

Šie stebėjimai rodo ryšį tarp GHK-Cu poveikio ir matrikso komponentų pokyčių. Vis dėlto jie neįrodo, kad šis ryšys žmonėms nuosekliai sukelia naudingą audinių persitvarkymą.

Papildomuose ikiklinikiniuose tyrimuose GHK-Cu buvo analizuojamas žaizdų modeliuose, įskaitant žaizdų susitraukimo, transplantatų integracijos, uždegiminės signalizacijos ir ląstelių migracijos eksperimentus [3–5].

Kiti tyrimai susiję su fibroblastų reakcija į radiacinę žalą. Juose buvo pastebėti ląstelių augimo ir gyvybingumo bei augimo faktorių raiškos pokyčiai [14].

Eksperimentuose taip pat buvo analizuojama sąveika, apimanti imunines ląsteles ir endotelio ląsteles, kurios dalyvauja audinių atakeje į pažeidimus [15].

Tyrimai su gyvūnais parodė antioksidacinio aktyvumo ir su žaizdomis susijusių parametrų pokyčius po poveikio GHK-Cu arba medžiagoms, kurių sudėtyje yra giminingų peptidų [16–21].

Šie rezultatai padidino susidomėjimą GHK-Cu kaip tiriamuoju įrankiu ląstelių senėjimui, tarpląstelinio užrašo reguliacijai ir audinių atsakui į oksidacinę bei mechaninę žalą analizuoti.

Tačiau stebėjimų apie žaizdų gijimą, fibroblastų elgseną ar molekulinę signalizaciją eksperimentiniuose modeliuose nereikėtų interpretuoti kaip terapinio veiksmingumo žmonėms įrodymo.

GHK-Cu veikimo mechanizmas: in vitro ir in vivo tyrimų rezultatai

Biologiniai mechanizmai, susiję su GHK-Cu, apima kelis tarpusavyje susijusius kelių, o ne vieną aiškiai apibrėžtą molekulinį taikinį.

Eksperimentiniuose tyrimuose buvo analizuojamas jo poveikis genų ekspresijai, augimo faktorių signalizacijai, ekstraląstelinės matrikso metabolizmui, atsakui į oksidacinį stresą, uždegiminiams keliams ir ląstelių sąveikai su aplinkiniais audiniais.

Mechanizmai buvo tiriami naudojant ląstelių kultūras, gyvūnų modelius ir kompiuterines analizes.

Genų raiška ir plaučių audinio persitvarkymas

Viena iš svarbių tyrimų sričių yra ryšys tarp GHK ir genų raiškos modelių, susijusių su lėtine obstrukcine plaučių liga (LOPL).

Daugiacentriniame tyrime, kuriame dalyvavo Boston University, Groningeno universiteto, Britų Kolumbijos universiteto ir Pensilvanijos universiteto mokslininkai, buvo analizuojami genų raiškos parašai, susiję su plaučių audinio irimu emfizemos eigoje [22].

Identifikuota 127 genų grupė, susijusi su plaučių emfizema, ir ištirta, ar GHK gali paveikti nenormalius transkripcijos modelius.

Mokslininkai pastebėjo, kad GHK poveikis buvo susijęs su transformuojančio augimo faktoriaus beta (TGF-β) signalizacijos pokyčiais.

TGF-β yra svarbus ląstelių diferenciacijos, tarpląstelinės matrikso gamybos, audinių remodeliavimo ir fibrozės reguliatorius.

Jo poveikis priklauso nuo biologinio konteksto. Nors TGF-β dalyvauja palaikant normalią audinių būklę, sutrikusi signalizacija taip pat gali prisidėti laipsniškai kaupiantis matricos komponentams ir vystytis fibrozei.

Atliekant laboratorinius eksperimentus su plaučių fibroblastais, paimtais iš LOPL sergančių pacientų, GHK ekspozicija buvo susijusi su geresniu gebėjimu sutraukti ir reorganizuoti kolageną.

Tyrėjai taip pat užfiksavo padidėjusią integrino β1 ekspresiją, kas leičia manyti apie galimą nuo integrinų priklausomų ląstelių sąveikų dalyvavimą [22, 23].

Integrinai yra baltymai, padedantys ląstelėms sąveikauti su jas supančia tarpląsteline matrica. Jie dalyvauja ląstelių adhezijoje ir migracijoje, mechaninių signalų perdavime bei audinių organizavime.

Šie stebėjimai rodo, kad GHK gali paveikti ryšį tarp TGF-β signalizacijos, integrynų raiškos ir tarpląstelinio matricio reguliavimo.

Tačiau eksperimentai neįrodo, kad GHK-Cu panaikina LOPL eigą arba atkuria plaučių veiklą pacientams.

Rezultatai susiję su genų ekspresijos modeliais ir ląstelių elgsena eksperimentinėmis sąlygomis.

Su vėžiu susijusių genų raiška ir ląstelių proliferacija

GHK taip pat buvo analizuojamas tyrimuose, susijusiuose su su vėžiu susijusiais genų tinklais.

Hong ir bendradarbiai tyrė genų raiškos modelius, susijusius su storosios žarnos vėžio progresavimu ir jo metastaziniu potencialu [7, 24].

Volesni šių duomenų interpretavimai susiejo GHK su maždaug 70% pasirinktos su metastazėmis susijusios genų grupės ekspresijos sumažėjimu.

Šiame kontekste buvo aptariami, tarp kitko, MAP3K5, LMNA, APP ir NFATC2 genai.

Šie genai dalyvauja įvairiuose biologiniuose procesuose, įskaitant tarpląstelinę signalizaciją, branduolio organizaciją, ląstelių reguliaciją ir transkripcijos atsako mechanizmus.

Genų raiškos pokyčių, susijusių su metastazėmis, vis dėlto tapatinti su įrodyta metastazių prevencija nereikėtų.

Genų raiškos signatūros gali padėti identifikuoti su ligos eiga susijusius takus, tačiau jų modifikacija nėra savarankiškas klinikinis priešvėžinio poveikio įrodymas.

Kituose laboratoriniuose tyrimuose buvo analizuojamas GHK poveikis žmogaus vėžio ląstelių linijoms.

Dalyje eksperimentų, apimančių neuroblastomos ir krūties vėžio modelius, nanometrinėse koncentracijose buvo užfiksuoti ląstelių apoptozės ir proliferacijos pokyčiai [25].

Apoptozė yra reguliuojama ląstelių žūties forma, kuri dalyvauja audinių vystymuisi ir ląstelių homeostazės palaikyme.

Apoptozės sutaisymai yra svarbūs vėžio biologijoje, nes piktybinės ląstelės gali išsiugdyti mechanizmus, leidžiančius išvengti normalių signalų, sukeliančių ląstelių žūtį.

Tačiau apoptozės stebėjimas vėžinių ląstelių kultūrose neįrodo selektyvaus priešvėžinio poveikio žmogaus organizme.

Ląstelių linijos skiriasi nuo tikrųjų auglių savo architektūra, metabolizmu, mikroaplinka, sąveika su imumine sistema ir ekspozicijos sąlygomis.

Todėl šie rezultatai išlieka svarbūs vėžio mechanizmų tyrimams, o ne patvirtintiems taikymams klinikinėje onkologijoje.

Fibroblastų aktyvumas ir tarpląstelinės matrikso remodeliacija

Fibroblastų tyrimai yra dar viena svarbi mokslinės literatūros apie GHK-Cu dalis.

Po vario tripeptidų kompleksų poveikio buvo stebimi kolageno gamybos, matrikso degradacijos ir augimo faktorių ekspresijos pokyčiai [9, 26].

Kolageno sintezė yra tik vienas iš tarpląstelieninės matrikso reguliavimo elementų.

Kad būtų išlaikyta taisyklinga audinių struktūra, matrica taip pat turi būti kontroliuojamai ardoma ir pertvarkoma.

GHK-Cu buvo siejamas su matrikso metaloproteinazių aktyvumo pokyčiais bei TIMP-1 ir TIMP-2 ekspresija.

Šie rezultatai rodo, kad junginys gali turėti įtakos tiek matricos komponentų gamybai, tiek ir skilimui.

Šių pokyčių kryptis ir reikšmė priklauso nuo eksperimentinio modelio ir jį supančių biologinių sąlygų.

Švitintų fibroblastų modeliuose tyrėjai analizavo, ar vario tripeptidai veikia ląstelių augimą ir augimo faktorių raišką po ekspozicijos spinduliuote [26].

Literatūroje aptariamoje genų raiškos analizėje taip pat buvo užfiksuoti su DNR taisymu susijusių takų pokyčiai. Tai apėmė 47 genus, kurių raiška padidėjo, ir penkis genus, kurių raiška sumažėjo bent 50% [9, 26].

Šie rezultatai rodo ląstelių transkripcinio atsako pokyčius.

Vis dėlto tai savaime neįrodo visiško DNR atstatymo, ląstelių senėjimo atvirkštinio proceso ar normalios audinių funkcijos atstatymo.

Angiogeninė signalizacija ir augimo faktoriai

GHK-Cu taip pat buvo tiriamas angiogenezės, t. y. naujų kraujagyslių susidarymo iš jau esančių kraujagyslių struktūrų, kontekste.

Angiogenezė dalyvauja audinių vystymusis, atake ir pažeidimų atveju bei kraujagyslių tinklo palaikymuje.

Eksperimentiniuose tyrimuose buvo analizuojami ryšiai medzi medžiagomis, turinčiomis GHK, ir tokiais veiksniais kaip kraujagyslių endotelio augimo faktorius (VEGF) bei bazinis fibroblastų augimo faktorius (bFGF) [27].

VEGF dalyvauja endotelio ląstelių signalizacijoje ir kraujagyslių vystymuisi.

Bazinis FGF dalyvauja ląstelių proliferacijoje ir diferenciacijoje bei audinių atake, apimančioje kraujagyslių ląsteles ir jungiamąjį audinį.

Kai kuriuose tyrimuose buvo užfiksuota padidėjusi šių veiksnių ekspresija arba sekrecija po poveikio su GHK susijusioms medžiagoms.

Integrinų priklausoma signalizacija taip pat buvo aptariama kaip galimas šių poveikių elementas.

Tačiau VEGF arba bFGF raiškos pokyčiai neįrodo funkcionalių kraujagyslių susidarymo.

Taisyklinga angiogenezė apima daugelį etapų, įskaitant endotelio ląstelių migraciją, kraujagyslių formavimąsi, jų stabilizavimą ir įtraukimą į esamą kraujotakos sistemą.

Todėl turimi rezultatai pateikia mechanistinių įrodymų, svarbių kraujagyslių tyrimams, tačiau nepatvirtina klinikinės naudos, susijusios su kraujagyslių funkcija.

GHK-Cu struktūra ir biochemija

GHK-Cu molekulinė struktūra buvo tiriama taikant įvairius analitinius ir spektroskopinius metodus.

Jos apėmė rentgeno spindulių kristalografiją, elektronų paramagnetinį rezonansą (EPR), rentgeno spindulių absorbcijos spektroskopiją, protonų magnetinį rezonansą bei cheminio titravimo metodus [28–30].

Šie metodai padėjo charakterizuoti vario koordinacinę aplinką peptidiniame komplekse.

Vario koordinacija ir molekulinė geometrija

GHK susideda iš trijų aminorūgščių, išdėstytų glicino–histidino–lizino seka.

Histidino liekana yra ypač svarbi, nes jos imidazolinė grupė gali dalyvauti metalų jonų koordinavime.

Struktūriniai tyrimai rodo, kad varis(II) peptido molekulėje gali sudaryti koordinacinius ryšius su trimis azoto atomais, atliekančiais elektronų donorų funkciją.

Tai glicino aminogrupės azoto atomas, deprotonuotas amidinio azoto atomas, susijęs su glicino–histidino jungtimi, ir histidino imidazolinio žiedo azoto atomas [28–30].

Ketvirta koordinacinė padėtis, priklausomai nuo cheminės aplinkos, gali būti užimta kita donoruojančia grupe.

Ši geometrija dažnai apibūdinama kaip kvadračio plano arba artima kvadračio planui.

Tiksli geometrija gali priklausyti nuo pH, tirpiklio sąlygų, papildomų ligandų buvimo bei tiršiamos komplekso formos.

Vario koordinacija turi įtakos GHK-Cu cheminėms savybėms ir skiria šį kompleksą nuo nesurišto GHK peptido.

Struktūrinė peptido ir vario priklausomybė yra svarbi, nes metalo prijungimas gali pakeisti molekulės reaktyvumą ir jos sąveiką su kitais biologiniais junginiais.

Piešinys: GHK-Cu komplekso molekulinė struktūra

GHK-Cu molekulinė struktura parodo, kaip glicino-histidino-lizino peptidas suteikia azoto turinčias koordinacines vietas, leidžiančias prijungti varį(II).

Struktūriniai ir spektroskopiniai tyrimai nustatė, kad aminogrupės azotas, pepto ryšio amidinis azotas ir histidino imidazolinio žiedo azotas yra svarbūs elementai, dalyvaujantys vario jungimesi.

Koordinacinė aplinka padeda paaiškinti, почему GHK tiriamas kaip varį jungiantis peptidas ir metalų bei peptidų sąveikos modelis.

Sąveika su albuminu ir kitomis varį patinančiomis molekulėmis

Esant fiziologiniam pH, GHK-Cu gali dalyvauti įvairiose koordinacinėse pusiausvyrose, kuriose dalyvauja papildomi ligandai.

Lau ir Sarkar tyrė vario(II), GHK, histidino turinčių molekulių ir serumo albumino sąveiką [28–30].

Serumo albuminas yra baltymas, kurio dideliais kiekiais yra plazmoje. Jis dalyvauja transportuojant ir sujungiant daugelį medžiagų, įskaitant pasirinktus metalų jonus.

Literatūroje aprašytas didelis gan GHK, gan albumino imlumas jungti varį. Tyrimo sąlygomis nurodytos maždaug log₁₀ 16,44 vertės GHK ir log₁₀ 16,2 albuminui.

Šios vertės rodo, kad GHK gali dalyvauti konkurenciniuose vario jonų surišimo procesuose.

Tačiau vario pasiskirstymas biologiniuose skysčiuose priklauso nuo kažko daugiau nei tik nuo dviejų išskirtų molekulių jungimosi stiprumo.

Vario prieinamumą taip pat veikia individualių medžiagų koncentracijos, konkuruojantys ligandai, baltymų sąveika ir ląstelių transporto sistemos.

GHK gebėjimas jungti varį todėl yra metalo pernešimo ir koordinacinių pusiausvyrų tyrimų pagrindas.

Vis dėlto tai neįrodo, kad GHK-Cu saugiai tiekia varį į visus audinius arba kad apsaugo nuo visų su variu susijusių oksidacinių reakcijų.

Vario priklausomi fermentai ir redoks procesų reguliavimas

Varis yra būtinas daugelio svarbių fermentų aktyvumui.

Liziloksidazė dalyvauja susidarant skersiniams ryšiams tarp kolageno ir elastino molekulių.

Vario-cinko superoksido dismutazė, paprastai vadinama SOD1, palaiko antioksidacinę apsaugą, katalizuodama superoksido radikalų virsmą į mažiau reaktyvius produktus.

Citochromo c oksidazė dalyvauja mitochondrijų elektronų transporte ir ląstelės energijos gamyboje.

Kadangi GHK jungia varį, mokslininkai tyrė, ar GHK-Cu gali paveikti šio metalo prieinamumą ir su juo susijusius biocheminius procesus.

Tačiau varį jungiančio peptido buvimas nereiškia, kad metalas yra tiesiogiai perduodamas kiekvienam nuo vario priklausomam fermentui.

Ląstelės turi specializuotus transporterius, baltymus jungiančius ir sistemas, reguliuojančias vario pasiskirstymą ląstelės viduje.

Šie mechanizmai yra svarbūs, nes laisvas arba netinkamai reguliuojamas varis gali dalyvauti oksidacijos reakcijose.

Tam tikromis sąlygomis su variu susijusios redokso reakcijos gali prisidėti laisvųjų radikalų ir kitų reaktyvių cheminių formų susidarymo.

Todėl GHK-Cu buvo tiriamas dėl jo galimo poveikio vario reaktyvumui ir oksidaciniams procesams [31, 32].

Šis ryšys yra chemiškai sudėtingas. Vario prijungimas gali pakeisti metalo reaktyvumą, tačiau biologinės pasekmės priklauso nuo visos cheminės aplinkos.

Aldehidų jungimasis ir antioksidacinė chemija

GHK taip pat buvo ištirtas dėl jo gebėjimo reagować su pasirinktais aldehidais, susidarančiais lipidų peroksidacijos metu.

Lipidų peroksidacija apima oksidacijos reakcijas, veikiančias ląstelių membranų lipidus ir kitas lipidų turinčias struktūras.

Šių reakcijų metu gali susidaryti reaktyvūs aldehidai, tokie kaip 4-hidroksinonenalas ir akroleinas.

Abi junginiai yra tiriami, nes jie gali sąveikauti su baltymais ir kitomis ląstelių molekulėmis.

Cheminiai tyrimai parodė, kad GHK gali sudaryti reakcijos produktus su šiais aldehidais, o tai rodo potencialų jų sugebėjimą jungtis eksperimentinėse sąlygose [31, 32].

Šie rezultatai suteikia informacijos apie GHK cheminį reaktyvumą.

Tačiau gebėjimas reaguoti su aldehidais laboratorinėse sąlygose neįrodo, kad peptidas apsaugo nuo oksidacinio audinių pažeidimo žmonėms.

Reagentų koncentracijos, konkuruojančių biologinių molekulių buvimas ir reakcijos greitis yra svarbūs vertinant galimas biologines pasekmes.

Ląstelių adhezija ir sąveika su ekstraląsteline matrica

GHK-Cu taip pat buvo tiriamas ląstelių adhezijos ir jų sąveikos su ekstraląstelinėmis medžiagomis kontekste.

Ląsteli adhezija yra būtina tinkamam audinių organizavimui, nes ląstelės turi atpažinti jas supančią aplinką ir su ja sąveikauti.

Tyrimuose, apimančiuose osteoblastines ląsteles ir hepatocitų adhezijos modelius, buvo analizuojamas su GHK susijusių medžiagų poveikis ląstelių plitimui, jų sukibimui bei fenotipui [33, 34].

Šie tyrimai yra svarbūs biomedžiagų kūrimui, kai peptidai gali būti įterpiami į inžinerinius paviršius arba prie jų prijungiami.

Stebimi efektai priklauso nuo peptido tipo, medžiagos sudėties, ląstelių tipo ir eksperimento sąlygų.

Jie teikia informaciją apie peptidų ir paviršių bei ląstelių ir matricos sąveika, o ne tiesioginius žmonių audinių regeneracijos įrodymus.

GHK-Cu taikymas moksliniuose tyrimuose

GHK-Cu buvo tiriamas daugelyje molekulinių ir ikiklinikinių tyrimų sričių.

Jos apima oksidacinio streso biologiją, uždegiminį signalizavimą, fibrozę, plaučių pažeidimus, neuroninius atsako mechanizmus, kraujagyslių reguliaciją, ekstraląstelinio matrinkso remodeliavimą ir genų raiškos analizę.

Šiuose skyriuose pateikiami svarbiausi eksperimentiniai rezultatai ir jų apribojimai.

Antioksidacinio poveikio ir redokso procesų tyrimai

Nuo vario priklausomi antioksidaciniai fermentai yra svarbi ląstelių apsaugos nuo oksidacinio streso dalis.

Vienas iš pavyzdžių yra SOD1, kuriai tinkamam funkcionavimui reikia vario ir cinko.

Vario trūkumo tyrimai parodė, kad jo nepakankamas prieinamumas gali turėti įtakos SOD1 aktyvumui ir padidinti su oksidaciniu stresu susijusių parametrų vertes [35–38].

Šie rezultatai patvirtina tinkamo vario apykaitos reguliavimo biologinę reikšmę.

Vis dėlto tyrimų apie vario defektą arba jo papildymą mityboje negalima automatiškai vertinti kaip identiško GHK-Cu poveikio įrodymų.

Šis skirtumas yra svarbus, nes konkretaus vario komplekso biologinis elgesys priklauso nuo jo molekulinės struktūros, pasiskirstymo ir sąveikos su šio metalo apykaitą reguliuojančiais keliais.

Eksperimentiniuose tyrimuose, kuriuose buvo naudojamos biomedžiagose esančios GHK ir vario tripeptidų kompleksos, buvo analizuojami antioksidaciniai atsakymai ir su audiniais susiję parametrai.

Dalis tyrimų buvo skirta tam, ar GHK-Cu veikia su feritinu susijusią lipidų peroksidaciją.

Feritina yra baltymas, dalyvaujantis ląstelinėje geležies saugykloje.

Geležis gali dalyvauti oksidacijos reakcijose, kai ji yra reaktyvių formų.

Tyrimais įrodyta, że ​​su GHK koordinuotas varis tam tikromis eksperimentinėmis sąlygomis gali paveikti nuo feritino priklausomą lipidų peroksidaciją [39, 40].

Šie stebėjimai suteikia informacijos apie vario kompleksų, su geležimi susijusių procesų ir oksidacinių reakcijų chemijos sąveiką.

Papildomi cheminiai tyrimai ištyrė GHK reakcijas su lipidų peroksidacijos produktais, tokiais kaip 4-hidroksinonenalis ir akroleinas [41, 42].

Rezultatai pagrindžia tolesnius GHK, kaip molekulės, gebančios dalyvauti cheminėse reakcijose su aldehidais, tyrimus.

Tačiau antioksidacinis aktyvumas, nustatytas cheminiu testu ar ląstelių modeliu, neįrodo klinikinės apsaugos nuo oksidacinės pažaidos.

Uždegiminė signalizacija ir citokinų reguliacija

Uždegiminis proces apima koordinuotą imuniteto ląstelių, signalinių baltymų ir audinių reakcijų sąveiką.

Keliose laboratorinėse studijose buvo analizuojamas GHK-Cu poveikis uždegiminiams keliams.

Ląstelinių tyrimų, kuriuose naudotos makrofagus primenančios RAW 264.7 ląstelės ir žarnyno epitelio Caco-2 ląstelės, metu buvo pastebėti oksidacinių ir uždegiminių parametrų pokyčiai po poveikio GHK-Cu.

Jos apėmė reaktyviųjų deguonies formų gamybos sumažinimą, su glutationu susijusių antioksidacinių parametrų verčių padidėjimą bei uždegiminių mediatorių, tokių kaip TNF-$\alpha$ ir IL-6, pokyčius [43–47].

Tyrėjai taip pat analizavo signalinius takus, apimančius branduolinį faktorių kappa B (NF-κB) ir mitogenų aktyvuojamą baltymų kinazę p38 (p38 MAPK).

NF-κB dalyvauja reguluojant genus, susijusius su uždegimu, imunitetu, ląstelių išgyvenimu ir atsaku į stresą.

p38 MAPK takas dalyvauja ląstelių atsakose į uždegiminius mediatorius ir aplinkos stresą.

Eksperimentiniuose tyrimuose GHK-Cu buvo susietas su NF-κB p65 ir p38 MAPK signalizacijos pokyčiais.

Šie rezultatai rodo, kad junginys laboratorinėse sąlygose gali paveikti uždegiminio atsako kelius.

Tačiau ne visi tyrimai, cituojami platesnėje diskusijoje, tiesiogiai vertina GHK-Cu. Dalis publikacijų pateikia bendrą informaciją apie uždegiminius takus ar kitus eksperimentinius junginius.

Todėl vien NF-κB ar p38 MAPK tyrimų egzistavimas neįrodo, kad GHK-Cu sukelia konkretų klinikinį priešuždegiminį poveikį.

Šie rezultatai yra naudingiausi siekiant suprasti galimas molekulines sąveikas ir nustatyti klausimus, kuriems reikia tolimesnių eksperimentų.

Plaučių fibrozės, pažeidimų ir neuroprotekcijos modeliai

Fibrozė yra neįprastas ekstraląstelinės matrikso komponentų kaupimasis arba organizacija audiniuose.

Gali vystytis reaguojant į nuolatinį pažeidimą, uždegimą arba pakitusią ląstelių signalizaciją.

GHK tirirtas eksperimentiniuose plaučių fibrozės modeliuose dėl jo aprašomo poveikio fibroblastų aktyvumui ir su TGF-β susijusiems keliams.

Taikydami bleomicino sukelto plaučių fibrozės pelių modelį, mokslininkai užfiksavo audinių storio pokyčius, uždegiminių ląstelių infiltraciją ir su epitelio ir mesenchimos virsmu susijusius signalinius keliu [48].

Tyrimas analizavo TGF-β1/Smad signaling, dalyvaujančią ląstelių atsakie, susijusiame su matricų gamyba ir fibroze.

Šie stebėjimai rodo, kad GHK gali paveikti tam tikrus su fibroze susijusius kelių tipų signalus eksperimentuose su gyvūnais.

Tačiau chemiškai sukeltame pelių ligos modelyje pasiektas poveikis neįrodo veiksmingumo gydant plaučių fibrozę žmonėms.

Biologiniai mechanizmai, ligos eiga ir klinikinės aplinkybės gali reikšmingai skirtis.

Neurobiologiniuose tyrimuose, susijusiuose su GHK, taip pat buvo analizuojamas oksidacinis stresas, uždegiminė signalizacija ir galimos sąveikos su genų reguliavimo takais.

Kai kurie darbai šiuos mechanizmus sieja su histono deacetilaze 2 (HDAC2) – fermentu, dalyvaujančiu chromatinės struktūros ir genų ekspresijos reguliavime.

Vis dėlto cituojama literatūra apie senstančių pelių kognityvinius pokyčius ir su HDAC susijusius mechanizmus taip pat apima tyrimus, kurie tiesiogiai nepatvirtina GHK-Cu specifinio poveikio [49].

Todėl teiginiai apie pažinimo funkcijos pagerinimą, neurouždegimo sumažinimą arba tiesioginį HDAC2 reguliavimą per GHK-Cu reikalauja aiškaus atskyrimo nuo kitų eksperimentinių intervencijų tyrimų rezultatų.

Turimi įrodymai pateisina susidomėjimą mechanistiniais tyrimais, tačiau nepatvirtina nustatyto neuroprotekcinio poveikio žmonėms.

Stebėjimai angiogenezės ir kraujagyslių biologijos modeliuose

Angiogenezė yra būtinas procesas audinių vystymuisi ir atstatymui.

Jis apima naujų kraujagyslių susidarymą ir reikalauja suderintų endotelio ląstelių, augimo veiksnių, tarpląstelinės matrikso komponentų bei supančių audinių sąveikų.

GHK-Cu buvo tiriamas eksperimentinėse sistemose, susijusiose su kraujagyslių signalizacija ir audinių remodeliacija.

Kai kuriuose tyrimuose buvo užfiksuoti su angiogeneze susijusių veiksnių, įskaitant VEGF ir bFGF, pokyčiai [50, 51].

Šie baltymai dalyvauja endotelio ląstelių veikloje, kraujagyslių vystymasis ir ląstelių atake į pažeidimus.

Mokslininkai taip pat analizavo ryšius tarp su GHK susijusių junginių ir struktūrinių baltymų, tokių kaip kolagenas ir elastinas.

Kolagenas atsakingas už audinių tvirtumą, o elastinas palaiko jų gebėjimą temptis ir grįžti į pradinę formą.

Abi białkai yra svarbūs kraujagyslių struktūrai ir tarpląstelinės matrikso organizacijai.

Tačiau augimo veiksnių raiškos ar matricos proteino sintezės pokyčiai nebūtinai reiškia kraujotakos pagerėjimą.

Funkcionalus kraujagyslių atstatymas apima papildomus procesus, įskaitant kraujagyslių formavimąsi, jų brendimą, integraciją ir fizio­loginį reguliavimą.

Kai kuriuose išsamesniuose tyrimuose apie kraujagyslių regeneraciją taip pat užsimenama apie poveikį nuo krešulių ir kraujagyslių išplėtimą.

Tai yra atskiri fiziologiniai procesai, todėl neturėtų būti daroma prielaida, kad jie tiesiogiai susiję su GHK-Cu poveikiu, nes nėra atitinkamų įrodymų, susijusių su šiuo konkrečiu junginiu.

Dabartiniai rezultatai todėl išlieka svarbūs visų pirma eksperimentiniams angiogenezės ir kraujagyslių biologijos tyrimams.

Įrodymai iš neuroninių ir neurotrofinių modelių

Neuronų vystymasis ir atstatymas apima augimo veiksnių dalyvavimą, sąveiką su ekstraląsteline matrikse, ląstelių migraciją ir neuronų atšakų ilgėjimą.

Neuritų augimas yra vienas iš eksperimentinių parametrų, naudojamų neuronų diferenciacijai ir vystymuisi tirti.

Ankstyvuosiuose tyrimuose, naudojant nervinio audinio kultūras, buvo analizuojamas peptidų ir kondicionuotų terpių poveikis neuronų diferenciacijai [52, 53].

Šie tyrimai prisidėjo laisvesnio prie trumpų peptidų kaip potencialių ląstelių elgsenos reguliatorių susidomėjimo didėjimo.

GHK susijusios medžiagos taip pat buvo analizuojamos eksperimentinėse nervų regeneracijos sistemose.

Viename tyrime buvo pristatytas peptidas, skatinantis ląstelių adheziją prie kolageninių vamzdelių, naudojamų nutrūkusiems nervų segmentams sujungti [54].

Mokslininkai užregistravo augimo veiksnių ir uždegiminių mediatorių, įskaitant nervų augimo faktorių (NGF) bei neurotrofinus NT-3 ir NT-4, pokyčius.

Papildomi stebėjimai apėmė aksonų parametrus ir Švano ląstelių reakcijas.

Švano ląstelės yra svarbi periferinės nervų sistemos dalis. Jos palaiko aksonus ir dalyvauja atsake į periferinių nervų pažeidimus.

Tačiau rezultatų, gautų naudojant kolageninius vamzdelius, kurių sudėtyje yra peptidų, negalima automatiškai priskirti laisvai cirkuliuojančiam GHK-Cu.

Stebimiems efektams įtakos gali turėti biomedžiaga, vietinė aplinka, peptido pateikimo būdas bei naudotas eksperimentinis modelis.

Panašiai augimo veiksnių ekspresijos ar aksonų skaičiaus padidėjimas eksperimentinėje sistemoje neįrodo funkcinės neurologinės regeneracijos žmonėms.

Šiuos tyrimus geriausia interpretuoti kaip biomedžiagų, kuriose yra peptidų, ir neurotrofinio signalizavimo analizes.

Genų reguliacija ir matricos pertvarkymas

Genų raiškos tyrimai tapo svarbiu mokslinės diskusijos apie GHK ir GHK-Cu elementu.

Ankstyvieji eksperymentai buvo orientuoti į su žaizdomis susijusius ląstelių atsakus, įskaitant fibroblastų elgseną, kolageno gamybą ir ekstraląstelinės matrikso organizaciją [55, 56].

Vėlesni Maquarto ir bendradarbių tyrimai analizavo GHK-Cu poveikį kolageno sintezei ir su matriksu susijusioms molekulėms [57–59].

Eksperimentuose, kuriuose naudotos fibroblastų kultūros, esant mažoms koncentracijoms, buvo užfiksuoti kolageno gamybos pokyčiai.

Kituose tyrimuose buvo analizuojami sulfatuoti glikozaminoglikanai ir maži proteoglikanai.

Šios molekulės dalyvauja organizuojant tarpląselinį matricą, palaikant hidrataciją, formuojant mechanines savybes bei sąveikaujat ląstelėms su aplinkiniais audiniais.

GHK-Cu taip pat buvo siejamas su ekstraląstelinio matrikso metaloproteinazių, įskaitant MMP-2, ekspresijos pokyčiais [59].

Tai svarbu, nes tarpląstelinės matrikso palaikymas reikalauja tiek kontroliuojamos degradacijos, tiek sintezės.

Vien tik kolageno gamybos padidėjimas neįrodo audinių organizacijos pagerėjimo.

Panašiai padidėjęs MMP aktyvumas gali lemti įvairius padarinius, priklausomai nuo audinio tipo ir biologinio konteksto.

Tyrimai todėl rodo, kad GHK-Cu gali paveikti matrikso virsmus per kelis sąveikaujančius takus.

Tačiau šie stebėjimai neįrodo gijimo be randų ar nuspėjamo audinių regeneravimo žmonėms.

Papildomuose eksperimentuose buvo užfiksuoti pokyčiai, susiję su tokiomis molekulėmis kaip dekoringas, dermatansulfatas ir chondroitinsulfatas [60].

Dekorinas yra mažas proteoglikanas, susijęs su kolageno organizacija ir ekstraląstelinės matrikso reguliacija.

Dermatano sulfatas ir chondroitino sulfatas priklauso glikozaminoglikanams, turintiems įtakos jungiamojo audinio struktūrai ir savybėms.

Jų raiškos arba sintezės pokyčiai suteikia informacijos apie matrikso metabolizmą.

Vis dėlto jie patys savaime neįrodo audinių tvirtumo, išvaizdos ar klinikinių gijimo rezultatų pagerėjimo.

Integrinų raiška ir epidermio ląstelių tyrimai

Keratinocitai yra dominuojantis epidermio ląstelių tipas.

Jos dalyvauja odos barjeros formavime, ląstelių diferenciacijoje ir atake į audinių pažeidimus.

Seulo nacionalinio universiteto mokslinčiai tyrė vario peptido GHK poveikį integrynų raiškai ir p63 teigiamų ląstelių buvimui keratinocituose [61].

Integritainiai dalyvauja ląstelių prikibime ir komunikacijoje su užląsteline matrikse.

P63 baltymas yra susijęs su epitelio vystymuisi ir tam tikrų epitelininių ląstelių populiacijų palaikymu.

Tyrimas parodė padidėjusią integrinų ekspresiją ir didesnę p63 teigiamų ląstelių dalį po ekspozicijos vario peptidui GHK.

Šie stebėjimai rodo galimą poveikį ląstelių savybėms, susijusioms su epidermio palaikymu.

Vis dėlto šių žymenų pokyčiai patys savaip neįrodo padidėjusio odos atsinaujinimo žmonėms.

Rezultatai lieka apriboti naudotais ląstelių modeliais ir analizuotais parametrais.

Didelio masto genų raiškos profiliavimas

Kompiuteriniai metodai padidino galimybes analizuoti įvairių junginių poveikį genų raiškos tinklams.

Jungčių žemėlapis, dažnai vadinamas santrumpa „cMap“, yra tyrimų išteklius, naudojamas genų raiškos modeliams, susijusiems su biologinėmis būsenomis ir cheminių medžiagų poveikiu, palyginti.

Susiję kompiuteriniai metodai, įskaitant MANTRA, buvo naudojami ryšiams tarp junginių ir transkripcinių atsako reakcijų tirti [62, 63].

GHK šiame kontekste buvo aptartas dėl jo sąsajų su plataus masto genų raiškos modelių pokyčiais.

Vienoje iš analizių užregistruoti 268 padidėjusios ekspresijos genai ir 167 sumažėjusios ekspresijos genai.

Kituose tyrimuose GHK buvo susietas su pokyčiais, apimančiais didesnį genų ir takų skaičių [9, 62–64].

Šie rezultatai rodo, kad su GHK susiję atsakymai gali apimti daugelį biologinių sistemų, o ne vieną molekulinį taikinį.

Vis dėlto genų raiškos duomenims reikia atsargaus interpretavimo.

Informacinio RNR (iRNR) kiekio pokytis nebūtinai lemia atitinkamą baltymo koncentracijos ar biologinės funkcijos pokytį.

Genų raiškos modeliai taip pat priklauso nuo ląstelių tipo, poveikio sąlygų, matavimo metodų ir analizės slenksčių.

Todėl su tam tikru junginiu susijusių genų skaičiaus nereikėtų vertinti kaip tiesioginio jo terapinio poveikio stiprumo mato.

Kompiuterinės prognozės yra vertingos formuojant hipotezes, tačiau joms būtinas eksperimentinis patvirtinimas.

Genų tinklai, susiję su neuroprotekcija

Genų raiškos analizės, aptartos literatūroje apie GHK, nustatė pokyčius, susijusius su genais, atsakingais už neuronų veiklą, ląstelių išgyvenimą ir vystymosi signalizaciją.

Pavyzdžiai apima SIGMAR1, EPM2A, NAIP, FGFR2 ir SLIT2 [65].

Šie genai dalyvauja įvairiuose biologiniuose procesuose.

SIGMAR1 koduoja sigma-1 receptorių – baltymą, dalyvaujantį ląstelių signalizacijoje ir su stresu susijusiuose procesuose.

EPM2A yra susijęs su laforinu – baltymu, svarbiu glikogeno metabolizmui.

NAIP dalyvauja ląstelių išgyvenimo ir imuninio atsako signaliniuose keliuose.

FGFR2 koduojantis receptorius, dalyvaujantis fibroblastų augimo faktoriaus signalizacijoje.

SLIT2 dalyvauja vystymosi procesuose, susijusiuose su ląstelių krypties nustatymu ir migracija.

Šių genų dalyvavimas nervų sistemos biologijoje sukėlė susidomėjimą jų galimu ryšiu su GHK sukeliamais transkripciniais atsakymais.

Vis dėlto geno buvimas su GHK susijusiame duomenų rinkinyje neįrodo, kad GHK tiesiogiai kontroliuoja tą geną bet kurioje biologinėje aplinkoje.

Tai taip pat neįrodo, kad GHK apsaugo nuo demencijos ar pagerina neurologines funkcijas.

Cituoti tyrimai dėl kai kurių iš šių genų pateikia platesnį biologinį kontekstą, o ne tiesioginius GHK-Cu poveikio įrodymus.

Todėl šiuos rezultatus reikėtų suprasti kaip stebėjimus, skirtus hipotezėms apie genų reguliaciją ir neurobiologiją suformuluoti.

Epigenetinių tyrimų ir su HDAC susijusių takų rezultatai

Epigenetinis regulavimas apima genų aktyvumo pokyčius, kuriems nereikia modifikuoti pagrindinės DNR sekos.

Vienas iš svarbių mechanizmų yra histonų modifikacija.

Histonai yra baltymai, aplink kuriuos organizuota DNR. Jų cheminiai modifikacijos gali turėti įtakos tam tikrų DNR regionų prieinamumui transkripcijos aparatui.

Histonų deacetilazės (HDAC) pašalina acetilo grupes iš histonų ir kitų baltymų substratų.

Jų aktyvumas gali paveikti chromatinės struktūrą ir genų ekspresiją.

GHK buvo aptartas su HDAC susijusių takų kontekste dėl platesnių stebėjimų apie genų reguliaciją ir su amžiumi susijusius transkripcinius pokyčius [66, 67].

Tačiau cituojami tyrimai apie HDAC ir epigenetinį senėjimą pateikia visų pirma bendrosios informacijos apie šiuos biologinius procesus.

Pačios savaime jos neįrodo, kad GHK-Cu yra kliniškai patvirtintas HDAC inhibitorius.

Panašiai genų raiškos modelių pokyčių nereikėtų automatiškai apibūdinti kaip epigenetinio senėjimo inversijos.

Tiesioginis HDAC slopinimo tvirtinimas reikalauja eksperimentų, rodančių poveikį šių fermentų aktyvumui tam tikromis sąlygomis.

Teiginiams apie senėjimo atvirkštinumą reikia papildomų įrodymų, jungiančių molekulinius matavimus su reikšmingais biologiniais rezultatais.

Taigi ryšiai tarp GHK, chromatinos regulacijos ir su senėjimu susijusio genų ekspresijos išlieka tolesnių mechanistinių tyrimų sritimi.

GHK-Cu medžiagų, skirtų moksliniams tyrimams, kokybė ir tyrimas

GHK-Cu analizinė charakteristika yra svarbi, nes tyrimų rezultatai priklauso nuo analizuojamos medžiagos tapatybės, sudėties ir kokybės.

Preparatas, vadinamas GHK-Cu, turėtų būti vertinamas taikant metodus, leidžiančius charakterizuoti peptidinį komponentą ir pateikti įrodymų dėl jo su variu susijusios formos.

Kokybės tyrimas gali apimti chromatografiją, masės spektrometriją, metalų kiekio analizę bei papildomus metodus, parinktus konkrečiam analitiniam tikslui.

Visgi nė vienas pavienis įprastinis testas nepatvirtina visų svarbių kokybės parametrų.

Skysčių chromatografija su masės spektrometrija

Skysčių chromatografija, sujungta su masės spektrometrija (LC-MS), sujungia chromatografinį atskyrimą su detekcija, pagrįsta jonų masės matavimu.

Chromatografinė dalis leidžia atskirti mėginyje esančius junginius.

Masės spektrometras pateikia informaciją apie jonus pagal jų masės ir krūvio santykį.

LC-MS gali padėti identifikuoti peptidą, aptikdamas molekulinius jonus, atitinkančius numatomą junginį.

Priklausomai nuo taikomo metodo, papildoma informacija apie fragmentaciją gali padėti charakterizuoti peidido seką.

Tačiau GHK atitinkančios molekulinės masės stebėjimas savaip nepatvirtina visų molekulės struktūros aspektų.

Panašiai, signalų, atitinkančių su variu susijusios formos buvimą, aptikimas nebūtinai įrodo pilną koordinacinę geometriją ir neatmeta visų alternatyvių kompleksų.

Vario jungimosi charakteristikai gali prireikti papildomų tyrimų naudojant atitinkamus spektroskopinius metodus arba metalo kiekio analizę.

LC-MS yra todėl vertingas analitinis įrankis, tačiau gautų išvadų patikimumas priklauso nuo metadologijos, etaloninių standartų, mėginio paruošimo ir papildomų įrodymų.

Didelio efektyvumo skysčių chromatografija ir grynumas

Didelio efektyvumo skysčių chromatografija (HPLC) yra plačiai naudojama peptidinių preparatų komponentams atskirti.

Tai gali padėti identifikuoti priemaišas, susijusias su sinteze, degradacija ar kitais gamybos procesais.

Chromatografinio grynumo rezultatas paprastai remiasi santykiniais signalais, aptiktais tam tikromis analitinėmis sąlygomis.

Tačiau chromatografinis grynumas nėra tapatus cheminiam tapatumui, peptido kiekiui, vario komplekso stoichiometrijai ar bendrai medžiagos kokybei.

Pavyzdžiui, deklaruojamas 98% grynumas nebūtinai reiškia, kad 98% visos mėginio masės sudaro tinkamai suformuotas GHK-Cu kompleksas.

Interpretacija priklauso de taikomo analizinio metodo ir rezultato apskaičiavimo būdo.

Chromatograma taip pat nepatvirtina sterilumo, endotoksinų kiekio ar visų įmanomų teršalų nebuvimo.

Šaltinio medžiagoje nurodyta, kad tam tikrų tiriamųjų preparatų grynumo specifikacija siekia bent %.

Tokią specifikaciją należy traktować jako deklarację dostawcy, chyba że jest poparta dostępną dokumentacją analityczną dotyczącą konkretnej partii.

Filtracija, sterilumas ir kietųjų dalelių taršos kontrolė

Šaltinio medžiagoje filtravimas per 0,22 mikrometro porų dydžio membranas apibūdinamas kaip medžiagos paruošimo proceso dalis.

Membraninė filtracija gali būti naudojama tam tikriems mikrobiologiniams teršalams riboti, jei taikomas metodas ir sąlygos yra tinkami.

Tačiau tirpalo perleidimas per 0,22 mikrometro porų filtrą savaime nepatvirtina galutinio produkto sterilumo.

Sterilumo užtikrinimas priklauso nuo viso proceso, įskaitant įrangą, aplinką, filtrų vientisumą, medžiagų tvarkymą ir validuotas kontrolės procedūras.

Filtracija taip pat nebūtinai turi pašalinti endotoksinus, ištirpusius cheminius teršalus ar visų rūšių kietųjų dalelių teršalus.

Todėl teiginiams dėl sterilumo ar tinkamumo tam tikram tyrimų tikslui reikia atitinkamų tyrimų ir dokumentacijos, o ne remtis vien filtro porų dydžiu.

Gera laboratorinė praktika ir dokumentacija

Gera laboratorinė praktika (GLP) yra kokybės sistema, susijusi su tam tikrų neklinikinių tyrimų organizavimu, vykdymu, stebėsena, dokumentavimu ir ataskaitų teikimu.

Teiginys, kad procedūros atitinka GLP taisikliai, nebūtinai reiškia formalų atitiktį GLP reikalavimams arba atitinkamo sertifikato turėjimą.

Tokios deklaracijos reikšmė priklauso nuo konkrečių procedūrų, dokumentacijos ir taikomos kokybės sistemos.

Tyrimų medžiagoms taip pat gali būti pridedamas analizės sertifikatas (CoA).

CoA paprastai apima tam tikros partijos pasirinktus analizės rezultatus.

Svarbi informacija gali apimti tapatybės tyrimus, grynumo matavimus, medžiagos kiekio nustatymą, taikytus analitinius metodus, partijos identifikatorius ir kitus specifikacijos parametrus.

Vis dėlto COA informacinė vertė priklauso nuo jo išdavimo pagrindu esančių metodų ir duomenų.

Pats sertifikatas neįrodo, kad medžiaga tinkama vartoti žmonėms, naudoti kosmetikoje ar terapijoje.

Panašiai analitinis grynumas nepatvirtina biologinio veiksmingumo ar klinikinio saugumo.

Moksliniuose tyrimuose naudingiausia kokybinė dokumentacija turi būti išsami, atsekama ir pakankamai išsami, kad būtų galima tinkamai interpretuoti analitinius rezultatus.

Daugiau informacijos apie gamintojų, tiekėjų, kokybės deklaracijų ir partijų dokumentacijos atskyrimą pateikiama straipsnyje Peptidų gamintojai ir tiekėjai.

Santrauka

GHK-Cu yra natūraliai randamas vario tripeptido kompleksas, tirtas daugiau nei penkis dešimtmečius.

Jo molekulinė struktūra, vario jungimosi savybės ir sąveika su ląstelių sistemomis pavertė jį svarbiu peptidų biochemijos, ekstraląstelinės matrikso biologijos, oksidacinio streso ir genų reguliacijos tyrimų objektu.

Kompleksas susideda iš glicilo-L-histidilo-L-lizino ir vario(II). Struktūriniai tyrimai leido identifikuoti azoto turinčias koordinacines vietas, kurios dalyvauja vario jungimesi ir daro įtaką molekulės cheminėms savybėms.

Šios savybės yra pagrindas analizuoti trumpų peptidų sąveiką su metalų jonais ir koordinacinės chemijos įtaką biologiniams procesams.

Eksperimentiniuose tyrimuose užfiksuoti kolageno sintezės, glikozaminoglikanų gamybos, matrikso metaloproteinazių ekspresijos, integrynų signalizacijos, uždegiminių mediatorių bei su antioksidacine apsauga susijusių parametrų pokyčiai.

Papildomi tyrimai apėmė atsakymus, susijusius su GHK fibroblastų kultūrose, žaizdų modeliuose, plaučių pažeidimo eksperimentuose, neuroninėse sistemose ir biomedžiagose, kurių sudėtyje yra peptidų.

Kompiuterinės analizės taip pat siejo GHK su plataus masto genų ekspresijos tinklo pokyčiais.

Tačiau šių stebėjimų mokslinė reikšmė priklauso nuo eksperimento konteksto.

Genų raiškos pokyčiai nebūtinai turi lemti baltymų aktyvumo pokyčius.

Padidėjusi kolageno gamyba nebūtinai reiškia geresnę audinių struktūrą.

Uždegiminių žymenų pokyčiai nėra savarankiškas klinikinis priešuždegiminio poveikio įrodymas.

Panašiai tyrimų rezultatai, apimantys vėžio ląstelių linijas, plaučių fibrozės modelius ar neuronų kultūras, neįrodo veiksmingumo prieš atitinkamas ligas žmonėms.

Literatūroje taip pat yra esminių skirtumų tarp GHK ir GHK-Cu bei tarp eksperimentų, tiesiogiai susijusių su konkrečiu junginiu, ir tyrimų, teikiančių tik bendrą biologinį kontekstą.

Šiuos skirtumus būtina išlaikyti aiškinantis veikimo mechanizmus ir siūlomus taikymo būdus.

Kitas svarbus klausimas yra analitinė kokybė. Tokie metodai kaip LC-MS ir HPLC gali pateikti vertingos informacijos apie tapatybę ir grynumą, tačiau patys savaime nepatvirtina visų struktūrinių, mikrobiologinių ir biologinių preparato savybių.

Apskritai, GHK-Cu išlieka naudingu įrankiu molekuliniams vario koordinacijos, ląstelių signalizacijos, tarpląstelinės matrikso metabolizmo ir atakooxidacinio streso tyrimams.

Jo nustatomos cheminės savybės ir išsami ikiklinikinė literatura yra pagrindas tolesniems moksliniams tyrimams. Tuo tarpu teiginiai apie klinikinį veiksmingumą ir saugumą reikalauja atskirų, tinkamai kontroliuojamų tyrimų su žmonėmis.

Atsakomybės apribojimas

Šis straipsnis yra skirtas tik edukaciniams ir moksliniams-informaciniams tikslams. Jame pristatomi tyrimai, susiję su GHK-Cu molekuline struktūra, vario koordinacija, biologiniais mechanizmais, analitine charakteristika ir eksperimentiniu pritaikymu.

Tai nėra medicininis patarimas, rekomendacija naudoti GHK-Cu žmonėms ar gyvūnams, gydymo schema ar pritarimas bet kokiam diagnostiniam, terapeuttiniam ar kosmetiniam naudojimui.

Rezultatų, gautų ląstelių kultūrose, bandymuose su gyvūnais, kompiuterinėse analizėse ir biocheminėse tyrimuose, nereikėtų interpretuoti kaip klinikinio veiksmingumo ar saugumo žmonėms įrodymo.

Informacijos apie analitinį grynumą, tiriamosios klasės medžiagas, analizės sertifikatus ar laboratorinius tyrimus neįrodo, kad preparatas yra tinkamas vartoti žmonėms ar bet kokiam kitam reglamentuojamam naudojimui.

Bet kokius medicininius sprendimus turi priimti tinkamai kvalifikuoti sveikatos priežiūros specialistai, remdamiesi atitinkamais klinikiniais įrodymais ir galiojančiais teisės aktais.

Nuorodos

1. Pickart L. Tripeptidas iš žmogaus serumo, kuris skatina navikinių hepatocitų augimą ir normalių hepatocitų išgyvenimą. San Francisco, Kalifornija, JAV: Kalifornijos universitetas; 1973.
2. Pickart L., Freedman J. H., Loker W. J. ir kt. Growth-modulating plasma tripeptide may function by facilitating copper uptake into cells. Nature. 1980;288(5792):715–717. doi: 10.1038/288715a0.
3. Pickart L. GHL-Cu kaip žaizdų gijimo ir priešuždegiminio agento naudojimas. 1988 m., http://www.freepatentsonline.com/4760051.html.
4. Downey D., Larrabee W. F., Jr., Voci V., Pickart L. Žaizdų gijimo paspartinimas naudojant glicil-histidil-lizino varį (II). Surgical Forum. 1985;25:573–575.
5. Pickart L. Iamin: žmogaus augimo faktorius, pasižymėjęs daugybinėmis žaizdų gijimo savybėmis. In: Sorenson J., redaktorius. Vario kompleksų biologija. Clifton, NJ, JAV: Humana Press; 1987. p. 273–285.
6. Meiners S., Eickelberg O. Naujos kartos individualizuotas vaistų kūrimas: tripeptidas GHK atsiduria centre sergant lėtine obstrukcine plaučių liga. Genome Medicine. 2012;4(8, 70 straipsnis) doi: 10.1186/gm371.
7. Hong Y., Downey T., Eu K. W., Koh P. K., Cheah P. Y. A ‘metastasei linkęs’ genomo parašas ankstyvos stadijos, pakankamo DNR neporų atstatymo funkcijos sporadického storosios žarnos vėžio pacientams ir jo reikšmė galimam gydymui. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
8. Gruchlik A., Jurzak M., Chodurek E. W. A., Dzierzewicz Z. Gly-Gly-His, Gly-His-Lys ir jų vario kompleksų poveikis nuo TNF-α priklausomai IL-6 sekrecijai normaliuose žmogaus odos fibroblastuose. Acta Poloniae Pharmaceutica. 2012;69(6):1303–1306.
9. Pickart L., Vasquez-Soltero J. M., Margolina A. GHK ir DNR: žmogaus genomo grąžinimas į sveikatos būseną. BioMed Research International. 2014;2014:10. doi: 10.1155/2014/151479.151479
10. Wegrowski Y., Maquart F. X., Borel J. P. Sulfuotų glikozaminoglikanų sintezės skatinimas tripeptido-vario kompleksu glicil-L-histidil-L-lizinu-Cu2+ . Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
11. Siméon A., Emonard H., Hornebeck W., Maquart F.-X. Tripeptido ir vario kompleksas glicil-L-histidil-L-lizinas-Cu2+ stimuliuoja matrikso metaloproteinazės-2 raišką fibroblastų kultūrose. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
12. Ehrlich H. Odos gijimo stimuliacija imunosupresinėms žiurkėms. Proceedings of the Symposium on Collagen and Skin Repair; September 1991; Reims, France.
13. Siméon A., Wegrowski Y., Bontemps Y., Maquart F.-X. Glikozaminoglikanų ir mažų proteoglikanų raiška žaizdose: moduliacija tripeptido-vario komplekso glicil-L-histidil-L-lizino-Cu2+ . Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
14. McCormack M. C., Nowak K. C., Koch R. J. Vario tripeptido ir tretinoino poveikis augimo faktorių gamybai be serumo esančiame fibroblastų modelyje. Archives of Facial Plastic Surgery. 2001;3(1):28–32.
15. Buffoni F., Pino R., Dal Pozzo A. Tripeptidų-vario kompleksų poveikis odos žaizdų gijimo procesui ir kultivuotiems fibroblastams. Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie. 1995;330(3):345–360.
16. Gul N. Y., Topal A., Cangul I. T., Yanik K. Vietinio vario tripeptido komplekso ir helio-neono lazerio poveikis žaizdų gijimui triušiams. Veterinary Dermatology. 2008;19(1):7–14. doi: 10.1111/j.1365-3164.2007.00647.x.
17. Cangul I. T., Gul N. Y., Topal A., Yilmaz R. Vietiniu būdu naudojamo tripeptidų-vario komplekso ir cinko oksido poveikio triušių atvirų žaizdų gijimui vertinimas. Veterinary Dermatology. 2006;17(6):417–423. doi: 10.1111/j.1365-3164.2006.00551.x.
18. Pickart L. Vario(II) turinčių junginių naudojimo metodas žaizdų gijimui paspartinti. 1992 m., http://www.freepatentsonline.com/5164367.html.
19. Arul V., Kartha R., Jayakumar R. Terapinis požiūris į diabetinių žaizdų gijimą naudojant biotiniliuoto GHK įterptas kolageno matricas. Life Sciences. 2007;80(4):275–284. doi: 10.1016/j.lfs.2006.09.018.
20. Canapp S. O., Jr., Farese J. P., Schultz G. S., et al. Vietinio tripeptido-vario komplekso poveikis ischemicinių atvirų žaizdų gijimui. Veterinary Surgery. 2003;32(6):515–523. doi: 10.1111/j.1532-950X.2003.00515.x.
21. Swaim S. F., Vaughn D. M., Kincaid S. A. ir kt. Vietiškai injekuojamų vaistų poveikis šunų pėdų pagalvėlių žaizdų gijimui. American Journal of Veterinary Research. 1996;57(3):394–399.
22. Campbell J. D., McDonough J. E., Zeskind J. E. ir kt. Emfizemai būdingo plaučių suirimo genų raiškos parašas ir jo atstatymas tripeptidu GHK. Genome Medicine. 2012;4, straipsnis 67 doi: 10.1186/gm367.
23. Boo S., Dagnino L. Integrinai kaip transformuojančio augimo faktoriaus beta signalizacijos moduliatoriai dermaliniuose fibroblastuose odos regeneracijos metu po sužalojimo. Advances in Wound Care. 2013;2(5):238–246. doi: 10.1089/wound.2012.0394.
24. Lubick K., Radke M., Jutila M. Securininas, GABAA receptorių antagonistas, sustiprina makrofagų II fazės C. burnetii pašalinimą: palyginimas su TLR agonistais. Journal of Leukocyte Biology. 2007;82(5):1062–1069. doi: 10.1189/jlb.0407255.
25. Matalka L. E., Ford A., Unlap M. T. Tripeptidas GHK indukuoja programuotą ląstelių žūtį SH-SY5Y neuroblastomos ląstelėse. Journal of Biotechnology & Biomaterials. 2012;2, straipsnis 144 doi: 10.4172/2155-952X.1000144.
26. Pollard J. D., Quan S., Kang T., Koch R. J. Vario tripeptido poveikis normalių ir apšvitintų fibroblastų augimui bei augimo faktorių raiškai. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
27. Jose S., Hughbanks M. L., Binder B. Y. K., Ingavle G. C., Leach J. K. Parandokrininių faktorių sekrecijos skatinimas mezenchiminėse kamieninėse / stroma ląstelėse naudojant glicino-histidino-lizino (GHK) modifikuotus alginato hidrogelius. Acta Biomaterialia. 2014;10(5):1955–1964. doi: 10.1016/j.actbio.2014.01.020.
28. Lau S. J., Sarkar B. Vario(II) ir glicil-L-histidil-L-lizino, augimą moduliuojančio tripeptido iš plazmos, sąveika. Biochemical Journal. 1981;199(3):649–656. doi: 10.1042/bj1990649.
29. Perkins C. M., Rose N. J., Weinstein B., Stenkamp R. E., Jensen L. H., Pickart L. The structure of a copper complex of the growth factor glycyl-L-histidyl-L-lysine at 1.1 Å resolution. Inorganica Chimica Acta. 1984;82(1):93–99. doi: 10.1016/s0020-1693(00)82544-x.
30. Freedman J. H., Pickart L., Weinstein B., Mims W. B., Peisach J. Glicil-L-histidil-L-lizino-vario(II) komplekso struktūra tirpale. Biochemistry. 1982;21(19):4540–4544. doi: 10.1021/bi00262a004.
31. Pickart L., Lovejoy S. Biological activity of human plasma copper-binding growth factor glycyl-l-histidyl-l-lysine. Methods in Enzymology. 1987;147:314–328. doi: 10.1016/0076-6879(87)47121-8.
32. Beretta G., Arlandini E., Artali R., Anton J. M. G., Maffei Facino R. Acrolein sequestering ability of the endogenous tripeptide glycyl-histidyl-lysine (GHK): characterization of conjugation products by ESI-MSn and theoretical calculations. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
33. Godet D., Marie P. J. Tripeptido glicil-L-histidil-L-lizino vario komplekso poveikis osteoblastinių ląstelių plitimui, prisitvirtinimui ir fenotipui. Cellular and Molecular Biology (Noisy-le-Grand, France) 1995;41(8):1081–1091.
34. Kawase M., Miura N., Kurikawa N. ir kt. Tripeptido augimo faktoriaus glicil-L-histidil-L-lizino imobilizavimas ant poli(vinilo alkoholio)-kvaternizuoto stilbazolio (PVA-SbQ) ir jo, kaip ligando, panaudojimas hepatocitų prisijungimui. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 1999;22(9):999–1001. doi: 10.1248/bpb.22.999.
35. Lutsenko S, Bhattacharjee A, Hubbard AL. Copper handling machinery of the brain. Metallomics. 2010;2(9):596–608. doi: 10.1039/c0mt00006j.
36. Hawk SN, Lanoue L, Keen CL, Kwik-Uribe CL, Rucker RB, Uriu-Adams JY. Copper-deficient rat embryos are characterized by low superoxide dismutase activity and elevated superoxide anions. Biology of Reproduction. 2003;68(3):896–903. doi: 10.1095/biolreprod.102.009167.
37. Bayer TA, Schäfer S, Simons A ir kt. Dietary Cu stabilizes brain superoxide dismutase 1 activity and reduces amyloid Aβ production in APP23 transgenic mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2003;100(24):14187–14192. doi: 10.1073/pnas.2332818100.
38. Arul V, Gopinath D, Gomathi K, Jayakumar R. GHK peptidas, įterptas į kolageninę matricą: nauja biomedžiaga odos žaizdoms gydyti žiurkėms. Journal of Biomedical Materials Research. 2005;73(2):383–391. doi: 10.1002/jbm.b.30246.
39. Miller DM, DeSilva D, Pickart L, Aust SD. Gliand-histidil-lizil chelatuoto Cu(II) poveikis nuo feritino priklausomai lipidų peroksidacijai. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1990;264:79–84. doi: 10.1007/978-1-4684-5730-8_11.
40. Alberghina M, Lupo G, La Spina G ir kt. Vario(II) kompleksų citoprotekcinis poveikis etanolio sukeltam žiurkių skrandžio gleivinės pažeidimui. Journal of Inorganic Biochemistry. 1992;45(4):245–259. doi: 10.1016/0162-0134(92)84013-d.
41. Beretta G, Artali R, Regazzoni L, Panigati M, Facino RM. Glicil-histidil-lizinas (GHK) yra α,β-4-hidroksi-trans-2-nonenalo gesiklis: palyginimas su karnosinu. Reakcijos mechanizmo įžvalgos naudojant elektropurškimo jonizacijos masės spektrometriją, 1H branduolinio magnetinio rezonanso ir skaičiavimo technikas. Chemical Research in Toxicology. 2007;20(9):1309–1314. doi: 10.1021/tx700185s.
42. Beretta G, Arlandini E, Artali R, Anton JM, Maffei Facino R. Acroleino surišimo geba, būdinga endogeniniam tripeptidui glicil-histidil-lizinui (GHK): konjugacijos produktų charakterizavimas taikant ESI-MSn ir teorinius skaičiavimus. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
43. Park JR, Lee H, Kim SI ir kt. Tripeptido GHK-Cu kompleksas pagerina lipopolisacharidų sukeltą ūminį plaučių pažeidimą pelėms. Oncotarget, 2016, 7(36): 58405.
44. Gao M, Chen L, Yu H ir kt. Diosgeninas slopina NF-κB p65/p50 ir p38MAPK signalinius kelius bei sumažina lipopolisacharidų sukeltą ūminį plaučių pažeidimą pelėms. International immunopharmacology, 2013, 15(2): 240–245.
45. Liu T, Zhang L, Joo D ir kt. NF-κB signalinis kelias uždegime. Signal transduction and targeted therapy, 2017, 2(1): 1–9.
46. Kaminska B MAPK signalling pathways as molecular targets for anti-inflammatory therapy—from molecular mechanisms to therapeutic benefits. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Proteins and Proteomics, 2005, 1754(1–2): 253–262.
47. Yong HY, Koh MS, Moon A. p38 MAPK inhibitoriai uždegiminių ligų ir vėžio gydymui. Expert opinion on investigational drugs, 2009, 18(12): 1893–1905.
48. Zhou XM, Wang GL, Wang XB ir kt. GHK peptidas slopina bleomicino sukeltą plaučių fibrozę pelėms, slopindamas TGFβ1/Smad tarpininkaujamą epitelio-mezenchiminę transliaciją. Frontiers in Pharmacology, 2017, 8: 904.
49. Mukherjee K, Lee A, Zhu L ir kt. Senstančių pelių miego trūkumo sukeltą kognityvinį sutrikimą palengvina rapamicinas. Aging Pathobiology and Therapeutics, 2019, 1(1): 05–09.
50. Kalaria RN. Vascular basis for brain degeneration: Faltering controls and risk factors for dementia. Nutrition Reviews. 2010;68(supplement 2):S74–S87. doi: 10.1111/j.1753-4887.2010.00352.x.
51. Pollard JD, Quan S, Kang T, Koch RJ. Vario tricopeptido poveikis normalių ir apšvitintų fibroblastų augimui bei augimo faktorių raiškai. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
52. Sensenbrenner M, Jaros GG, Moonen G, Meyer BJ. Effect of conditioned media on nerve cell differentiation. Experientia. 1980;36(6):660–662. doi: 10.1007/BF01970123.
53. Lindner G, Grosse G, Halle W, Henklein P. Sintetinio tripeptido poveikis in vitro kultivuotam nerviniam audiniui. Zeitschrift für Mikroskopisch-Anatomische Forschung. 1979;93(5):820–828. (Vok.).
54. Ahmed MR, Basha SH, Gopinath D, Muthusamy R, Jayakumar R. Initial upregulation of growth factors and inflammatory mediators during nerve regeneration in the presence of cell adhesive peptide-incorporated collagen tubes. Journal of the Peripheral Nervous System. 2005;10(1):17–30. doi: 10.1111/j.1085-9489.2005.10105.x.
55. Pickart L. GHL-Cu kaip žaizdų gijimo ir priešuždegiminio agento naudojimas. JAV patentas 4,760,051, 1988 m. liepos mėn.
56. Downey D, Larrabee WF, Voci V, Pickart L. Žaizdų gijimo paspartinimas naudojant glicil-histidil-lizil-vario(II) kompleksą. Surgical Forum. 1985;36:573–575.
57. Maquart FX, Pickart L, Laurent M, Gillery P, Monboisse JC, Borel JP. Tripeptido ir vario komplekso glicil-L-histidil-L-lizino-Cu2+ sukeltas kolageno sintezės stimuliavimas fibroblastų kultūrose. FEBS Letters. 1988;238(2):343–346. doi: 10.1016/0014-5793(88)80509-x.
58. Wegrowski Y, Maquart FX, Borel JP. Sulfuotų glikozaminoglikanų sintezės stimuliavimas tripeptido-vario komplekciu glicil-L-histidil-L-lizinu-Cu2+ . Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
59. Siméon A, Emonard H, Hornebeck W, Maquart FX. Tripeptido-vario kompleksas glicil-L-histidil-L-lizinas-Cu2+ skatina matrikso metaloproteinazės-2 raišką fibroblastų kultūrose. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
60. Siméon A, Wegrowski Y, Bontemps Y, Maquart FX. Glikozaminoglikanų ir mažų proteoglikanų raiška žaizdose: moduliacija tripeptido-vario komplekso glicil-L-histidil-L-lizino-Cu2+ . Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
61. Kang YA, Choi HR, Na JI ir kt. Vario-GHK padidina keratinocitų integrino raišką ir p63 teigiamumą. Archives of Dermatological Research. 2009;301(4):301–306. doi: 10.1007/s00403-009-0942-x.
62. Lamb J. The Connectivity Map: a new tool for biomedical research. Nature Reviews Cancer. 2007;7(1):54–60. doi: 10.1038/nrc2044.
63. Iorio F, Bosotti R, Scacheri E, et al. Vaistų veikimo mechanizmo atradimas ir vaistų pritaikymas naujai paskirčiai pagal transkripcijos atsakus. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2010;107(33):14621–14626. doi: 10.1073/pnas.1000138107.
64. Hong Y, Downey T, Eu KW, Koh PK, Cheah PY. Metastazei jautrus paražas ankstyvos stadijos sporadiniu storosios žarnos vėžiu sergantiems pacientams, turintiems nepakitusią DNR neatitikties taisymo sistemą, ir jo reikšmė galimam gydymui. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
65. Huang P, Kishida S, Cao D ir kt. Neuronalinės diferenciacijos faktorius neuroD1 slopina neuroninio atstūmimo faktoriaus Slit2 raišką ir skatina neuroblastomos ląstelių judrumą bei naviko formavimąsi. Cancer Research. 2011;71(8):2938–2948. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-10-3524.
66. Fischer A, Sananbenesi F, Mungenast A, Tsai LH. Targeting the correct HDAC(s) to treat cognitive disorders. Trends in Pharmacological Sciences. 2010;31(12):605–617. doi: 10.1016/j.tips.2010.09.003.
67. Koch CM, Wagner W. Epigenetic-aging-signature to determine age in different tissues. Aging. 2011;3(10):1018–1027. doi: 10.18632/aging.100395.