Peptid GHK-Cu: molekulární struktura, mechanismy účinku a využití v vědeckých studiích

GHK-Cu je přirozeně se vyskytující komplex tripeptidu s mědí, který přitahuje pozornost vědců kvůli svému účinku na komunikaci buněk, regulaci extracelulární matrice a biologické procesy spojené s udržováním a regenerací tkání. Od jeho identifikace v roce 1973 provádějí výzkumníci jeho molekulární strukturu, schopnost vazby na měď, vliv na expresi genů a interakci s buněčnými dráhami účastnícími se zánětlivých procesů, oxidačního stresu a regenerace tkání.

Tento protein byl poprvé identifikován během studií na složkách lidské sérové plazmy a jejich vlivu na syntézu proteinů v buňkách. Pickart poznamenal, že faktor pocházející ze sérové plazmy může ovlivňovat chování stárnoucích jaterních buněk tím, že stimuluje vzorce syntézy proteinů charakteristické pro mladší buňky [1]. Pozdější studie umožnily identifikaci tripeptidu glicylo-L-histydylo-L-lizinu (GHK) a analýzu jeho schopnosti vytvářet stabilní komplex s dvojitými ionty medi (Cu²⁺).

GHK se skládá ze tří aminokyselin: glycinu, histydinu a lyzinu. Po vazbě na iont měďnatého (II) tvoří komplex, který je obecně označován jako GHK-Cu nebo měďový peptid GHK.

Tento peptid byl zjištěn v lidských biologických tekutinách, včetně plazmy, slin a moči. Podle publikovaných údajů se jeho koncentrace v plazmě snižuje s věkem – z přibližně 200 ng/ml ve věku 20 let na přibližně 80 ng/ml ve věku 60 let [2–9]. Tyto pozorování přispěly k rozvoji výzkumu vztahů mezi GHK, stárnutými buněčnými změnami a regulací tkáňových procesů.

V experimentálních studiích bylo prokázáno, že GHK-Cu může ovlivňovat syntézu kolagenu, regeneraci extracelulární matrice, angiogenní signalizaci a aktivitu antioksidativních enzymů. V kulturách fibroblastů a u zvířecích modelů byl také zkoumán jeho účinek na zánětlivé mediátory, migraci buněk a vzorce exprese genů spojených s regenerací tkání.

Některé studie spojily účinek GHK s změnami v více než 4000 genech, což naznačuje, že jeho biologická aktivita může zahrnovat mnoho vzájemně propojených cévních systémů v buňkách [9].

Změny v expresi genů však neznamenají automaticky zlepšení funkce tkání ani příznivé klinické výsledky. Mnoho pozorování pochází z buněčných kultur, počítačových analýz nebo experimentů na zvířatech.

GHK-Cu tedy zůstává důležitým předmětem molekulárních a předklinických studií, zejména v souvislosti s koordinační funkcí medi, extracelulární biologií, oxidačním stresem a odpovědí buněk na poškození.

Co je to GHK-Cu?

GHK-Cu je koordinační komplex, který vzniká při vazbě glykol-L-histydyl-L-lizynového tripeptidu na ion měďnatého (II). Schopnost koordynovat měď představuje jednu z molekulárních vlastností, která ho odlišuje od mnoha dalších krátkých peptidů [1, 2].

Stříbro je nezbytným stopovým prvkem, který se podílí na řadě biologických procesů. Podporuje aktivitu enzymů, mitochondriální produkci energie, antioxidační ochranu a tvorbu a udržení spojivových tkání.

Současně musí ekonomika medi podléhat přísné regulaci, protože neřízená nebo nevhodně kontrolovaná medi může podílet se na reakcích vedoucích k tvorbě reaktivních forem oxidu uhelnatého.

GHK vytváří molekulární prostředí umožňující vazbu mědi a ovlivňování jejích chemických vlastností. Díky této interakci se GHK-Cu stal užitečným modelovým systémem pro analýzu podílu malých peptidů na koordinaci kovů a buněčné signalizaci.

Rané studie se zaměřovaly na jeho účinek na fibroblasty, tedy buňky zodpovědné za tvorbu a udržování mnoha složek spojivové tkáně.

Fibroblasty syntetizují kolagen, látky spojené s elastinem, glukozaminoglykany a další molekuly z vnějšího obalu buněk. Tyto látky jsou zodpovědné za mechanické vlastnosti, organizaci a strukturu tkání.

Studie provedené Borelem, Maquartem a spolupracovníky prokázaly, že GHK-Cu může ovlivňovat metabolismus extracelulárních matic v kulturách fibroblastů i při koncentracích kolem 1–10 nanomolů na litr (nM) [10–13].

Pozorované účinky zahrnovaly změny v produkci a degradaci kolagenu, sulfátovaných glykozaminoglykanů a malých proteoglikanů, jako je dekryna.

Co je důležité, udržení extracelulární matrice vyžaduje něco víc než jen zvýšení produkce strukturalních proteinů.

Správná regenerace tkání spočívá v koordinovaném syntetizování, modifikaci a rozkladu komponentů matice.

Metoproteinázy matice (MMP) jsou zodpovědné za degradaci vnější matrixové vrstvy, zatímco tkáňové inhibitory metaloproteináz (TIMP) pomáhají regulovat jejich aktivitu.

V experimentálních studiích bylo zaznamenáno, že GHK-Cu ovlivňuje aktivitu MMP a expresi inhibitorů, jako jsou TIMP-1 a TIMP-2 [11, 12].

Tyto pozorování naznačují souvislost mezi expozicí GHK-Cu a změnami v stavebných látek. Nicméně neprokazují, že tento vztah konsekventně vyvolává příznivou regeneraci tkání u lidí.

V dalších předklinických studiích byla GHK-Cu analyzována u ranových modelů, včetně experimentů týkajících se ztluštění ran, integrace transplantátů, zánětlivé signalizace a migraci buněk [3–5].

Jiná studie se zabývala reakcí fibroblastů na poškození způsobené zářením. U nich byly zaznamenány změny v růstu a životnosti buněk a také v expresi růstových faktorů [14].

V experimentech byly také analyzovány interakce zahrnující imunitní buňky a endotelové buňky, které jsou účastníky odpovědi tkání na poškození [15].

Studie na zvířatech prokázaly změny v antioxidační aktivitě a parametrů spojených s poškozením rán v důsledku expozice GHK-Cu nebo materiálům obsahujícím příbuzné peptidy [16–21].

Tyto výsledky zvýšily zájem o GHK-Cu jako nástroj pro výzkum stárnutí buněk, regulace extracelulární matrice a odpovědi tkání na oxidační a mechanické poškození.

Není však třeba interpretovat pozorování týkající se uzavírání rán, zachování fibroblastů ani molekulární signalizace v experimentálních modelích jako důkaz účinnosti léčby u lidí.

Mechanismus účinku GHK-Cu: výsledky in vitro a in vivo studií

Biologické mechanismy spojené s GHK-Cu zahrnují několik vzájemně propojených tras a ne jeden jednoznačně určený molekulární cíl.

V experimentálních studiích byl analyzován jeho vliv na expresi genů, signalizaci růstových faktorů, metabolismus extracelulárních matic, odpověď na oxidační stres, zánětlivé dráhy a interakci buněk s okolními tkáněmi.

Tyto mechanismy byly studovány pomocí buněčné kultury, zvířecích modelů a počítačových analýz.

Exprese genů a regenerace plicní tkáně

Jedním z významných oblastí výzkumu je vztah mezi GHK a vzorcemi expresí genů spojených s chronickou obstrukční plicní nemocí (COPD).

Ve multicentrickém studii, do níž byli zapojeni vědci z Boston University, University of Groningen, University of British Columbia a University of Pennsylvania, byly analyzovány signatáry expresí genů spojených s poškozením plicního tkáně při rozedmě [22].

Bylo identifikováno 127 genů spojených s alveolární astmatem a zkoumalo se, zda GHK může ovlivňovat nesprávné transkripční vzorce.

Vědci zaznamenali, že expozice GHK byla spojena s změnami v signalizaci beta-transformujícího faktoru růstu (TGF-β).

TGF-β je důležitým regulátorem diferencování buněk, tvorby extracelulární matrice, regenerace tkání a fibrilace.

Jeho účinek závisí na biologickém kontextu. Ačkoli TGF-β je zapotřebí pro správnou funkci tkání, narušená signalizace může také přispívat k patologickému hromadění matrixových látek a rozvoji fibrózy.

V laboratorních experimentech s použitím plicních fibroblastů odebraných od pacientů s POChP byla expozice GHK spojena se zlepšením schopnosti kolagenu se zhutňovat a reorganizovat.

Badatelé také zaznamenali zvýšenou expresi integryny β1, což naznačuje možné účinkování interakcí buněk závislých na integrinách [22, 23].

Integriny jsou proteiny, které pomáhají buňkám komunikovat s okolní extracelulární maticí. Účastní se adhesií a migraci buněk, přenosu mechanických signálů a organizace tkání.

Tyto pozorování naznačují, že GHK může ovlivňovat vazby mezi signalizací TGF-β, expresí integrin a regulací extracelulární matrice.

Experimenty však neprokázaly, že GHK-Cu by zmírňovalo průběh POChP nebo obnovovalo funkci plic u pacientů.

Výsledky se týkají vzorců expresí genů a chování buněk v experimentálních podmínkách.

Exprese genů spojených s nádory a proliferace buněk

GHK byl také analyzován v studiích týkajících se genových sítí spojených s rakovinou.

Hong a jeho spolupracovníci zkoumali vzorce expresí genů spojených s progresí rakoviny tlustého střeva a jeho potenciálem metastáz [7, 24].

Následná interpretace těchto dat spojila GHK se snížením expresí přibližně 70% vybraných genů spojených s metastázami.

V tomto kontextu byly mimo jiné diskutovány geny MAP3K5, LMNA, APP a NFATC2.

Tyto geny se podílejí na různých biologických procesech, včetně intracelulární signalizace, organizace buněčného jádra, regulace buněk a transkripční odpovědi.

Změny v expresi genů spojených s metastázami však nelze chápat jako prokázané prevenci metastáz.

Signatura genových expresí může pomoci identifikovat cesty spojené s průběhem onemocnění, ale jejich modifikace nepředstavuje samostatný klinický důkaz protinádorového účinku.

V dalších laboratorních studiích byla analyzována expozice GHK u lidských buněčných linií rakoviny.

V části experimentů zahrnujících modely neuroblastomu a rakoviny prsu byly zaznamenány změny apoptózy a proliferace buněk při nanomolechních koncentracích [25].

Apoptóza je regulovanou formou buněčné smrti, která je zapojena do vývoje tkání a udržování homeostázy buněk.

Poruchy apoptozy jsou důležité v biologii nádorů, protože maligní buňky mohou vyvinout mechanismy, které umožňují vyhnout se správným signálům vedoucím k buněčné smrti.

Pozorování apoptózy v kulturách nádorových buněk však neprokazuje selektivní protinádorový účinek v lidském těle.

Buňkové linie se od skutečných nádorů liší svou strukturou, metabolizmem, mikrozemírem, interakcí s imunitním systémem a podmínkami expozice.

Proto tyto výsledky zůstávají důležité pro výzkum mechanismů vzniku nádorů, nikoli pro potvrzené aplikace v klinické onkologii.

Activita fibroblastů a rekonstrukce extracelulární matrice

Studie fibroblastů představují další důležitý prvek vědecké literatury týkající se GHK-Cu.

Po expozici komplexům mediových tripeptidů byly pozorovány změny v produkci kolagenu, degradaci matrice a expresi růstových faktorů [9, 26].

Syntéza kolagenu je pouze jedním z prvků regulace extracelulární matrice.

Aby se zachovala správná struktura tkání, musí síťovina také podléhat kontrolované degradaci a reorganizaci.

GHK-Cu bylo spojeno s změnami aktivity metaloproteináz matic a exprese TIMP-1 a TIMP-2.

Tyto výsledky naznačují, že tento sloučenina může ovlivňovat jak tvorbu, tak rozklad komponentů mateřské látky.

Směr a význam těchto změn závisí na experimentálním modelu a okolních biologických podmínkách.

V modelích působení vyzařujících fibroblastů vědci zkoumali, zda mediové tripeptidy ovlivňují růst buněk a expresi růstových faktorů po expozici záření [26].

V analýzách exprese genů popsaných v literatuře byly také pozorovány změny v liniích spojených s opravou DNA. Zahrnovaly je 47 genů s zvýšenou exprese a pět genů, jejichž exprese klesla o nejméně 50% [9, 26].

Tyto výsledky ukazují změny transkripční odpovědi buněk.

Neukazují však samy o sobě úplnou opravu DNA, obrat stárnutí buněk ani obnovení správné funkce tkání.

Angiogenní signalizace a růstové faktory

GHK-Cu byl také studován v souvislosti s angiogenezí, tedy procesem tvorby nových krevních cév z již existujících struktur cévních systémů.

Angiogeneze se podílí na vývoji tkání, reakci na poškození a udržování sítě krevních cév.

V experimentálních studiích byla analyzována závislost mezi látkami obsahujícími GHK a faktory jako VEGF (vaskulární endoteliální růstový faktor) a bFGF (fibroblastový růstový faktor) [27].

VEGF je zapojen do signalizace endotelových buněk a růstu krevních cév.

Bazický FGF je zodpovědný za proliferaci a diferenciací buněk a za odpověď tkání zahrnující cévní buňky a spojivové tkáně.

V některých studiích bylo zaznamenáno zvýšené expresi nebo vylučování těchto faktorů po expozici materiálům obsahujícím GHK.

Jako možné prvky těchto efektů byly také zvažovány signály závislé na integritě.

Změny exprese VEGF nebo bFGF však neprokázaly vznik funkčních krevních cév.

Správná angiogeneze zahrnuje mnoho etap, včetně migrace endoteliálních buněk, tvorby cév, jejich stabilizace a připojení k existujícímu krevnímu systému.

Dostupné výsledky tedy poskytují mechanistické důkazy významné pro krevní studie, ale nepotvrzují klinické výhody spojené s funkcí cév.

Struktura a biochemie GHK-Cu

Molekulární strukturu GHK-Cu bylo studováno pomocí různých analytických a spektroskopických technik.

Zahrnovaly rentgenovou krystalografii, elektronový paramagnetický rezonance (EPR), spektroskopii absorpce rentgenového záření, protonový magnetický rezonance a metody chemického rozdělování [28–30].

Tyto metody pomohly charakterizovat koordinační prostředí medi v peptidovém komplexu.

Koordinace medií a molekulární geometrie

GHK se skládá ze tří aminokyselin uspořádaných v sekvenci glycin–histydin–lysin.

Reszta histydynowa má zvláštní význam, protože její imidazolová skupina může spolupracovat při koordinaci kovových iontů.

Strukturaální studie ukazují, že měď (II) může vytvářet koordinační vazby s třemi atomy dusíku, které plní funkci donorů elektronů v molekule peptidového proteinu.

Patří sem atom dusíku skupiny aminové glycinu, deprotonovaný atom dusíku amidového typu spojený vazbou glycin–histydin a atom dusíku imidazolového kruhu histidinu [28–30].

Čtvrtá koordinační pozice může být obsazena jinou donorovou skupinou v závislosti na chemickém prostředí.

Tento systém se často popisuje jako geometrii kvadratovo-planární nebo blízkou kvadratovo-planární.

Přesná geometrie může záviset na pH, podmínkách rozpouštědla, přítomnosti dalších ligandů a na formě komplexu, kterou se zkoumá.

Koordinace medi ovlivňuje chemické vlastnosti GHK-Cu a odlišuje tento komplex od nezwiązaného peptidu GHK.

Strukturaální závislost mezi peptidem a mědí je důležitá, protože vazba kovu může měnit reaktivitu molekuly a její interakce s ostatními biologickými sloučeninami.

Obraz: molekulární struktura komplexu GHK-Cu

Molekulární struktura GHK-Cu ukazuje, jak glycin-histydin-lysinový peptid poskytuje koordinační místa obsahující dusík, která umožňují vazbu medi (II).

V strukturálních a spektroskopických studiích byl identifikován dusík aminové skupiny, dusík amidového vazebného bodu peptidu a dusík imidazolového kruhu histidiny jako důležité prvky účastnící se vazby na měď.

Koordinující tým pomáhá objasnit, proč se GHK zkoumá jako peptid vazící měď a také model interakcí mezi kovy a peptidy.

Interakce s albuminem a dalšími částicemi vážícími měď

U fyziologického pH může GHK-Cu podílet se na různých koordinačních rovnováhlách s přítomností dalších ligandů.

Lau a Sarkar zkoumali interakce mezi mědí(II), GHK, částicemi obsahujícími histydin a albuminem séra [28–30].

Serumalbumin je bílkovina vyskytující se ve vysokých koncentracích v plazmě. Účastní se transportu a vazby mnoha látek, včetně vybraných kovových iontů.

V literatuře bylo popsáno vysoké vazebné schopnosti jak GHK, tak albuminů na měď. V zkoumaných podmínkách byly stanoveny hodnoty přibližně log₁₀ 16,44 pro GHK a log₁₀ 16,2 pro albuminy.

Tyto hodnoty naznačují, že GHK může podílet se na konkurenčních interakcích spojených s vazbou medi.

Avšak distribuce medi v biologických tekutinách ovlivňuje více faktorů než jen síla vazby mezi dvěma izolovanými molekulami.

K dostupnosti mědi také ovlivňují koncentrace jednotlivých látek, konkurenční ligandy, interakce s proteiny a interakce s transportními systémy buněk.

Schopnost GHK vázat se na měď je tedy základem výzkumu přenosu kovu a koordinačních rovnovah.

Nicméně neprokazuje, že GHK-Cu bezpečně dodává měď do všech tkání ani že brání všem oxidačním reakcím spojeným s mědí.

Medzery závislé na medi a regulace redoxních procesů

Stříbro je nezbytné pro činnost mnoha důležitých enzymů.

Lyzová oxidáza se podílí na tvorbě mezichromatických vazeb mezi proteiny kolagenu a elastinu.

Dismutazová encima medičino-zinčitého typu, běžně označovaná jako SOD1, podporuje antioxidační ochranu tím, že katalyzuje přeměnu nadměrných kyslíkových radikálů na méně reaktivní produkty.

Cytochrom C oxidáza se podílí na mitochondriálním transportu elektronů a tvorbě buněčné energie.

Protože GHK váže měď, vědci zkoumali, zda GHK-Cu může ovlivňovat dostupnost tohoto kovu a související biochemické procesy.

Přítomnost měděného vazebného proteinu však neznamená, že by se kov přímo přenášel do každého enzymu závislého na medi.

Buňky mají specializované transportéry, vazebné proteiny a systémy regulující intracelulární distribuci mědi.

Tyto mechanismy jsou důležité, protože volná nebo nesprávně regulovaná měď může být účastníkem oxidačních reakcí.

Za určitých podmínek mohou redoxní reakce spojené s mědí přispívat k vzniku reaktivních chemických látek.

Proto byl GHK-Cu zkoumán z hlediska jeho potenciálního vlivu na reaktivitu mědi a oxidační procesy [31, 32].

Tato závislost je chemicky složitá. Vázání medi může měnit reaktivitu kovu, ale biologické důsledky závisí na celém chemickém prostředí.

Vázání aldehydů a antioxidační chemie

GHK byl také zkoumán z hlediska schopnosti reagovat s vybranými aldehydy vznikajícími při peroxidaci lipidů.

Peroksydeace lipidů zahrnuje oxidační reakce, které ovlivňují lipidy buněčných membrán a další struktury obsahující lipidy.

V důsledku těchto reakcí mohou vznikat reaktivní aldehydy, jako jsou 4-hydroxybenzoan a akrolein.

Oba sloučeniny jsou předmětem výzkumu, protože mohou působit na bílkoviny a další molekuly v buňkách.

V chemických studiích bylo prokázáno, že GHK může vytvářet produkty reakce s těmito aldehydy, což naznačuje jejich potenciální schopnost vazby za experimentálních podmínek [31, 32].

Tyto výsledky poskytují informace o chemické aktivitě GHK.

Nicméně schopnost reagovat s aldehydy v laboratorním prostředí neprokazuje, že peptid brání oxidačním poškození tkání u lidí.

Koncentrace reagenčních látek, přítomnost konkurenčních biologických látek a rychlost reakce jsou důležité při posuzování potenciálních biologických následků.

Adheze buněk a interakce s extracelulární maticí

GHK-Cu byl také studován v souvislosti s přichycováním buněk a jejich interakcí s extracelulárními materiály.

Komórková adheze je nezbytná pro správnou organizaci tkání, protože buňky musí rozpoznávat prostředí, v němž se nacházejí, a reagovat na něj.

V studiích zahrnujících osteoblastní buňky a modely adheze hepatocytů byl analyzován vliv materiálů obsahujících GHK na šíření buněk, jejich přilnavost a fenotyp [33, 34].

Tyto studie jsou důležité pro vývoj biomateriálů, ve kterých mohou být peptidy zabudovány do konstrukčních povrchů nebo k nim připojeny.

Pozorované účinky závisí na druhu peptidu, složení materiálu, typu buněk a podmínkách experimentu.

Poskytují informace o interakcích mezi peptidy a povrchy a mezi buňkami a maticí, nikoli přímých důkazů regenerace tkání u lidí.

Užití GHK-Cu v vědeckých studiích

GHK-Cu bylo testováno v mnoha oblastech molekulárních a předklinických studií.

Patří mezi ně biologie oxidačního stresu, zánětlivou signalizaci, fibrinolýzu, poškození plic, neuronální odpovědi, regulaci krevních cév, regeneraci mezoteliální matrice a analýzu expresí genů.

Předkládané části uvádějí nejvýznamnější experimentální výsledky a jejich omezení.

Studie o antioxidačním účinku a redoxních procesech

Antioxidativní enzymy závislé na medi představují důležitou součást buněčné ochrany před oxidačním stresem.

Jedním z příkladů je SOD1, jehož správné fungování vyžaduje měď a zinek.

Studie týkající se nedostatku medi prokázaly, že její nedostatek může ovlivňovat aktivitu SOD1 a zvyšovat hodnoty parametrů spojených s oxidačním stresem [35–38].

Tyto výsledky potvrzují biologický význam správné regulace mediové ekonomiky.

Nicméně studie týkající se nedostatku medi nebo obnovy jejího přítomnosti v potravě nelze automaticky považovat za důkazy o identickém účinku GHK-Cu.

Rozlišování je důležité, protože biologické chování konkrétního komplexu medi závisí na jeho molekulární struktuře, distribuci a interakci s dráhami regulující účinek tohoto kovu.

V experimentálních studiích zahrnujících biomateriály obsahující GHK a komplexy tripeptidů zinku byly analyzovány antioxidační odpovědi a parametry spojené s tkáněmi.

Část studií se týkala toho, zda GHK-Cu ovlivňuje peroxidaci lipidů spojenou s ferrytynou.

Ferityna je proteinem účastníkem intracelulárního ukládání železa.

Železo může podílet se na oxidačních reakcích, pokud se vyskytuje v reaktivních formách.

V rámci studií bylo prokázáno, že měď v kombinaci s GHK může ovlivňovat peroxidaci lipidů závislou na ferrytyne v určitých experimentálních podmínkách [39, 40].

Tyto pozorování poskytují informace o interakcích mezi komplexy medií, procesech spojených s železem a chemikáliemi oxidačních reakcí.

Další chemické testy analyzovaly reakce GHK s produkty peroxidace lipidů, jako jsou 4-hydroxybenzoan a akrolein [41, 42].

Výsledky odůvodňují další studium GHK jako molekuly schopné podílet se na chemických reakcích s aldehydy.

Avšak antioxidační aktivita prokázaná v chemickém testu nebo v buněčném modelu neprokazuje klinickou ochranu před oxidačním poškozením.

Signální signalizace a regulace cytokinů

Zánětlivý stav zahrnuje koordinované interakce mezi imunitními buňkami, signálními proteiny a tkáňovými reakcemi.

V několika laboratorních studiích bylo analyzováno působení GHK-Cu na zánětlivé cesty.

V molekulárních studiích využívajících makrofágové buňky RAW 264.7 a gastrointestinální epiteliální buňky Caco-2 byly pozorovány změny oxidačních a zánětlivých parametrů po expozici GHK-Cu.

Zahrnovaly to snížení produkce reaktivních forem oxidu uhelnatého, zvýšení hodnot parametrů antioxidačních látek spojených s glutationem a změny mediátorů zánětu, jako jsou TNF-α a IL-6 [43–47].

Badatelé také analyzovali signální dráhy zahrnující nukleární faktor kappa B (NF-κB) a proteinovou kinázu aktivovanou mitogenními proteiny p38 (p38 MAPK).

NF-κB se podílí na regulaci genů spojených s zánětlivým stavem, odolností, přežitím buněk a reakcí na stres.

Skladačka MAPK p38 se podílí na buněčných reakcích spojených s zánětlivými mediátory a environmentálním stresem.

V experimentálních studiích byl GHK-Cu spojován se změnami v signalizaci NF-κB p65 a p38 MAPK.

Tyto výsledky naznačují, že tento lék může ovlivňovat cesty účastnící se zánětlivé odpovědi v laboratorních podmínkách.

Všechna studie citovaná v širší diskusi však nepodrobně hodnotí GHK-Cu. Některé publikace uvádějí obecné informace o zánětlivých cestách nebo jiné experimentální spojení.

Proto samotné existenci studií týkajících se NF-κB nebo p38 MAPK neprokazuje, že GHK-Cu vyvolává konkrétní protizánětlivý klinický účinek.

Tyto výsledky jsou nejvhodnější pro poznávání možných molekulárních interakcí a identifikaci témat vyžadujících další experimenty.

Modely vlnění, poškození plic a neuroprotekce

Vlnění spočívá v nesprávném shromažďování nebo organizaci komponent extracelulární matrice v tkáních.

Může se vyvíjet v reakci na přetrvávající poškození, zánět nebo změněnou signální signalizaci buněk.

GHK byl studován v experimentálních modelových tkáních plic kvůli jeho popisovanému vlivu na aktivitu fibroblastů a na cesty spojené s TGF-β.

V myším modelu plicního zhrubnutí vyvolaném bleomycinem vědci zaznamenali změny tloušťky tkání, ztluštění způsobené zánětlivými buňkami a cesty spojené s transmembránovým přechodem [48].

V rámci studie byla analyzována signalizace TGF-β1/Smad, která je zapojena do buněčných odpovědí spojených s tvorbou matric a fibrilaci.

Tyto pozorování naznačují, že GHK může ovlivňovat vybrané cesty spojené s fibrilací v experimentech na zvířatech.

Avšak účinek dosažený v chemicky vyvolaném myším modelu onemocnění neprokazuje účinnost při léčbě zardění plic u lidí.

Biologické mechanismy, průběh onemocnění a klinické okolnosti se mohou výrazně lišit.

V neurobiologických studiích týkajících se GHK byly také analyzovány oxidační stres, zánětlivá signalizace a možné interakce se stezkami regulace genů.

Některé studie tyto mechanismy spojují s deacetylázou histonovou 2 (HDAC2), enzymem účastníkem regulace chromatinu a expresi genů.

Avšak citovaná literatura týkající se poznávacích změn u stárnoucích myší a mechanismů spojených s HDAC zahrnuje také studie, které přímo nepotvrzují účinek specifický pro GHK-Cu [49].

Proto tvrzení o zlepšení kognitivních funkcí, snížení neurozánětu nebo přímé regulaci HDAC2 pomocí GHK-Cu vyžadují jasné oddělení od výsledků studií s jinými experimentálními intervencemi.

K dispozici údaje podporují zájem o mechanistické studie, ale nepotvrzují zjištěné neuroprotektivní účinky u lidí.

Pozorování v oblasti angiogeneze a biologie cév

Angiogeneze je nezbytným procesem při vývoji a regeneraci tkání.

Zahrnuje tvorbu nových krevních cév a vyžaduje koordinované interakce mezi endotelovými buňkami, růstovými faktory, komponenty extracelulární matrice a okolními tkáněmi.

GHK-Cu bylo testováno v experimentálních systémech spojených s vaskulární signalizací a regenerací tkání.

V některých studiích byly zaznamenány změny faktorů spojených s angiogenezí, včetně VEGF a bFGF [50, 51].

Tyto bílkoviny jsou zapojeny do činnosti endotelových buněk, vývoje krevních cév a do imunitní odpovědi na poškození.

Vědci také analyzovali vztahy mezi vazbami spojenými s GHK a strukturálními proteiny, jako jsou kolagen a elastin.

Kolagén zajišťuje pevnost tkání, zatímco elastin podporuje jejich schopnost se roztačit a vrátit se do původního tvaru.

Oba proteiny jsou důležité pro strukturu krevních cév a organizaci extracelulární matice.

Změny v expresi růstových faktorů nebo syntéze materských proteinů nemusí však znamenat zlepšení průtoku krve.

Funkční regenerace cév zahrnuje další procesy, včetně tvorby cév, jejich zralosti, integrace a fyziologické regulace.

V některých širších studiích týkajících se regenerace cév se také zmiňuje o protinadrcňovacím účinku a rozšiřování cév.

Jedná se o samostatné fyziologické procesy a nelze předpokládat, že by vznikaly přímo v důsledku expozice GHK-Cu bez odpovídajících důkazů týkajících se tohoto konkrétního sloučeniny.

Současné výsledky jsou tedy důležité především pro experimentální výzkum angiogeneze a biologie cév.

Důkazy z neuronálních a neurotrofických modelů

Rozvoj a obnova neuronů zahrnují účast růstových faktorů, interakci s extracelulární maticí, migrací buněk a prodloužením neuronálních výstupků.

Nárůst neuritů je jedním z experimentálních parametrů používaných k studiu diferencování a vývoje neuronů.

V předběžných studiích s využitím tkáňové kultury nervových buněk byl analyzován vliv peptidů a kondicionovaných živin na diferencování neuronů [52, 53].

Tyto studie přispěly k většímu zájmu o krátké peptidy jako potenciální regulátory chování buněk.

Materiály související s GHK byly také analyzovány v experimentálních systémech regenerace nervů.

V jednom z výzkumů byl použit peptid podporující adhezi buněk k kolagenovým drátech používaným k spojování přerušovaných částí nervů [54].

Vědci zaznamenali změny růstových faktorů a mediátorů zánětu, včetně neurotropinu NGF a neurotrofních faktorů NT-3 a NT-4.

Doplňkové pozorování zahrnovala parametry axonů a reakce Schwannových buněk.

Schwannovy buňky jsou důležitou součástí periferního nervového systému. Podporují aksony a účastní se reakcí na poškození periferních nervů.

Nicméně výsledky získané pomocí kolagenových ciev obsahujúcich peptidy nelze automaticky pripisovať voľne cirkulujúcemu GHK-Cu.

Na pozorované účinky mohou působit biomateriál, lokální prostředí, způsob prezentace peptidu a použitý experimentální model.

Stejně tak zvýšení exprese růstových faktorů nebo počtu axonů v experimentálním systému neprokazuje funkční neurologickou regeneraci u lidí.

Tyto studie lze nejlépe interpretovat jako analýzy biomateriálů obsahujících peptidy a neurotrofickou signalizaci.

Regulace genů a rekonstrukce matky

Studie expresí genů se stala důležitou součástí vědecké debaty o GHK a GHK-Cu.

Rané experimenty se zaměřovaly na odpovědi buněk spojené s rány, včetně chování fibroblastů, produkce kolagenu a organizace extracelulární matrice [55, 56].

Následující studie Maquartova a jeho spolupracovníků analyzovala vliv GHK-Cu na syntézu kolagenu a molekul spojených s maticí [57–59].

V experimentech využívajících kultury fibroblastů byly pozorovány změny v produkci kolagenu při nízkých koncentracích.

V dalších studiích byly analyzovány sulfatované glukozaminoglykany a malé proteoglikany.

Tyto molekuly jsou zapojeny do organizace vnějšího sliznice, udržování hydratace, formování mechanických vlastností a interakcí mezi buňkami a okolními tkáněmi.

GHK-Cu bylo také spojeno s změnami expresí metaloproteináz v materské tkáni, včetně MMP-2 [59].

To je důležité, protože udržení extracelulární matice vyžaduje jak kontrolovanou degradaci, tak i syntézu.

Samotné zvýšení produkce kolagenu neprokazuje zlepšení organizace tkání.

Stejně tak zvýšená aktivita MMP může vést k různým následkům v závislosti na typu tkáně a biologickém kontextu.

Výzkum tedy naznačuje, že GHK-Cu může ovlivňovat procesy v děloze prostřednictvím několika vzájemně působících cévních dráh.

Tyto pozorování však neprokazují hojení bez vzniku jizev ani předvídatelnou regeneraci tkání u lidí.

V dalších experimentech byly zaznamenány změny u látek jako dekryna, síran dermatanu a síran chondroityny [60].

Dekoryna je malým proteoglikánem spojeným s organizací kolagenu a regulací extracelulární matrice.

Dermatan sulfát a chondroitin sulfát patří mezi glykozaminoglykany, které ovlivňují strukturu a vlastnosti kloubních tkání.

Změny jejich exprese nebo syntézy poskytují informace o metabolizmu mateřského organismu.

Nicméně samy neprokazují zlepšení pevnosti tkání, jejich vzhledu ani klinických výsledků hojení.

Expression of integrin and study of stratum corneum cells

Keratocyty jsou dominantním typem buněk povrchové vrstvy kůže.

Účastní se tvorby kožní bariéry, buněčného diferencování a reakce na poškození tkání.

Vědci z Seoul National University zkoumali vliv mediového peptidu GHK na expresi integrinů a přítomnost buněk vykazujících pozitivní expresi p63 v keratocytách [61].

Integriny jsou zapojeny do přichycování buněk a komunikace s extracelulární maticí.

Proteín p63 je spojen s vývojem sliznice a udržováním určitých populací slizkových buněk.

V rámci studie byla zaznamenána zvýšená expresí integrin a vyšší míra pozitivních buněk v souvislosti s p63 po expozici peptidu medičitého GHK.

Tyto pozorování naznačují možné vlivy na buněčné vlastnosti spojené s udržováním epidermy.

Avšak změny těchto markerů samy o sobě neprokazují zvýšenou regeneraci kůže u lidí.

Výsledky zůstávají omezeny na použité mobilní modely a analyzované parametry.

Velkoobjemové profilování genů

Kompilátory umožnily rozšířit možnosti analýzy vlivu různých látek na expresi genů v sítích.

Mapka konektivity, často označovaná zkratkou cMap, je výzkumným nástrojem používaným k porovnávání vzorců expresí genů spojených s biologickými stavy a expozicí chemikáliím.

Související počítačové přístupy, včetně MANTRA, byly využívány k zkoumání vztahů mezi vazbami a transkripčními odpověďmi [62, 63].

GHK byl v tomto kontextu zkoumán kvůli jeho vazbám na rozsáhlé změny vzorců expresí genů.

V jedné z analýz bylo zaznamenáno 268 genů s zvýšenou expresí a 167 genů s sníženou expresí.

V jiných studiích byla spojena účinnost GHK s změnami zahrnujícími větší počet genů a cévních tras [9, 62–64].

Tyto výsledky naznačují, že odpovědi spojené s GHK mohou zahrnovat mnoho biologických systémů a ne pouze jeden molekulární cíl.

Avšak shromážděné údaje o expresi genů vyžadují opatrnou interpretaci.

Změna množství informací v RNA (mRNA) nemusí vést k odpovídající změně koncentrace bílkoviny ani biologické funkce.

Morfologie genové exprese závisí také na typu buněk, podmínkách expozice, měřicích metodách a analytických prahových hodnotách.

Proto nelze čísla genů spojených s daným látkou považovat za přímý ukazatel její terapeutické účinnosti.

Výpočtové prognózy jsou užitečné při formulování hypotéz, ale vyžadují experimentální potvrzení.

Genové sítě spojené s neuroprotekcí

Analýzy exprese genů popsaných v literatuře týkajících se GHK identifikovaly změny zahrnující geny spojené s funkcí neuronů, přežitím buněk a vývojovou signalizací.

Příklady zahrnují SIGMAR1, EPM2A, NAIP, FGFR2 a SLIT2 [65].

Tyto geny se podílejí na různých biologických procesech.

SIGMAR1 koduje receptor sigma-1, což je protein zapojený do buněčné signalizace a procesů spojených se stresem.

EPM2A je spojen s laforinou, proteinem důležitým pro metabolismus glykogenu.

NAIP se podílí na liniích buněk a imunitní odpovědi.

FGFR2 kóduje receptor účastnící se signálu růstového faktoru fibroblastů.

SLIT2 se podílí na vývojových procesech spojených s řízením a migrací buněk.

Účast těchto genů v biologii nervového systému vyvolala zájem o jejich možný vztah s transkrypčními odpověďmi vyvolávanými GHK.

Avšak přítomnost genu v souboru dat souvisejícím s GHK neprokazuje, že GHK přímo kontroluje tento gen v každém biologickém prostředí.

Není také prokázáno, že GHK předchází demenci ani nevede ke zlepšení neurologických funkcí.

Citované studie týkající se částí těchto genů poskytují širší biologický kontext a ne přímo potvrzují účinek GHK-Cu.

Proto je třeba tyto výsledky chápat jako pozorování sloužící k formulování hypotéz týkajících se regulace genů a neurobiologie.

Výsledky epigenetických studií a tras spojených s HDAC

Epigenetická regulace zahrnuje změny v aktivitě genů, které nevyžadují modifikaci základní sekvence DNA.

Jedním z důležitých mechanismů je modifikace histonů.

Histony jsou bílkoviny, kolem kterých je organizováno DNA. Jejich chemické modifikace mohou ovlivnit dostupnost určitých oblastí DNA pro transkripční systém.

Histonová deacetyláza (HDAC) odstraňuje acetylové skupiny z histonů a dalších bílkovinových substrátů.

Jejich aktivita může ovlivňovat strukturu chromatinu a expresi genů.

GHK byla diskutována v kontextu tras spojených s HDAC v souvislosti s širšími pozorováními regulace genů a transkripčních změn spojených s věkem [66, 67].

Avšak citované studie o HDAC a epigenetickém stárnutí poskytují především obecné informace o těchto biologických procesech.

Samy o sobě neprokazují, že GHK-Cu je klinicky potvrzeným inhibitorem HDAC.

Stejně tak změny v vzorcích expresí genů nelze automaticky označit jako odvrácení epigenetického stárnutí.

Přímé tvrzení o inhibici HDAC vyžaduje experimenty, které prokázaly vliv na aktivitu těchto enzymů za určitých podmínek.

Argumenty týkající se zastavení stárnutí vyžadují další důkazy spojující molekulární měření s významnými biologickými výsledky.

Vztahy mezi GHK, regulací chromatinu a expresí genů spojených s stárnutím tedy zůstávají oblastí pro další mechanistické studie.

Kvalita a studie materiálů GHK-Cu určených k vědeckým účelům

Analytická charakteristika GHK-Cu je důležitá, protože výsledky testů závisí na identitě, složení a kvalitě zkoumaného materiálu.

Lék označovaný jako GHK-Cu by měl být hodnocen metodami umožňujícími charakterizaci peptidového složka a poskytnutí důkazů o jeho mediatochované podobě.

Kvalitativní analýza může zahrnovat chromatografii, hmotnostní spektrometrii, analýzu obsahu kovů a další techniky zvolené podle konkrétního analytického účelu.

Žádný individuální rutinní test však neprokáže všechny relevantní kvalitativní parametry.

Kromatografie kapalné fáze v kombinaci se spektrometrií hmotnosti

Kromatografie kapalina v kombinaci se spektrometrií hmotnosti (LC-MS) spojuje chromatografický rozdělovací proces s detekcí založenou na měření hmotnosti iontů.

Chromatografická část umožňuje rozdělení látek přítomných v vzorku.

Masový spektrometr poskytuje informace o iontech na základě jejich poměru hmotnosti k náboji.

LC-MS může podporovat identifikaci peptidu pomocí detekce molekulárních iontů odpovídajících očekávanému spojení.

V závislosti na použité metodě mohou další informace o fragmentaci pomoci při charakterizaci peptidové sekvence.

Avšak pozorování molekulární hmotnosti odpovídající GHK samo o sobě nepotvrzuje všechny aspekty struktury molekuly.

Stejně tak odhalení signálů odpovídajících přítomnosti formy spojené s mědí nemusí znamenat plnou geometrickou koordinaci ani vyloučit všechny alternativní komplexy.

Charakteristika vazby medi může vyžadovat další studie s využitím vhodných spektroskopických metod nebo analýzy obsahu kovu.

LC-MS je tedy cenným analytickým nástrojem, ale spolehlivost získaných závěrů závisí na metodě, vzorcích srovnání, přípravě vzorků a doplňujících důkazech.

Vysoce výkonná kapalinová chromatografie a čistota

Vysokosprawná kapalinová chromatografie (HPLC) je běžně používána k oddělení látek v peptidových přípravcích.

Může pomoci při identifikaci znečištění spojeného s syntézou, degradací nebo jinými výrobními procesy.

Výsledek chromatografické čistoty se obvykle zakládá na relativních signálech detekovaných za určitých analytických podmínek.

Nicméně chromatografická čistota není totéž co chemická identita, obsah peptidu, stechiometrie mediového komplexu ani obecná kvalita materiálu.

Například deklarovaná čistota 98% nemusí znamenat, že 98% celkové hmotnosti vzorku představuje správně vytvořený komplex GHK-Cu.

Interpretace závisí na použité analytické metodě a způsobu výpočtu výsledku.

Chromatogram také nepotvrzuje sterilnost, obsah endotoxinů ani nepřítomnost všech možných znečištění.

Zdrojový materiál popisuje deklarovanou specifikaci čistoty ve výši nejméně 98% pro určité testovací přípravky.

Takové specifikace je třeba považovat za prohlášení dodavatele, pokud není podloženo dostupnou analytickou dokumentací týkající se konkrétní partie.

Filtrace, sterilita a kontrola znečištění částicemi

Průvodní materiál popisuje filtraci membrán s póry o velikosti 0,22 mikrometrů jako součást procesu přípravy materiálu.

Membránová filtrace může být použita k omezení určitých mikrobiologických znečišťujících látek, pokud je použita vhodná metoda a podmínky.

Avšak průchod roztoku přes filtr o velikosti póru 0,22 mikrometra sám o sobě nepotvrzuje sterilnost konečného produktu.

Zajištění sterilnosti závisí na celém procesu, včetně zařízení, prostředí, integrity filtru, způsobu nakládání s materiálem a validovaných kontrolních postupů.

Filtrace nemusí také odstraňovat endotoxiny, rozpustné chemické znečištění ani všechny druhy znečištění pevnými částicemi.

Proto tvrzení týkající se sterilnosti nebo vhodnosti pro konkrétní výzkumné použití vyžadují odpovídající testy a dokumentaci, a nikoli pouze odvozování z velikosti por filtrů.

Dobrá laboratorní praxe a dokumentace

Laboratoryjna dobrá praxe (GLP) je systém kvality spojený s organizací, prováděním, monitorováním, dokumentací a podáváním zpráv o určitých neklinických studiích.

Uvádění, že postupy jsou v souladu s principy GLP, nemusí znamenat formální shodu s požadavky GLP ani mít platný certifikát.

Význam takové deklarace závisí na konkrétních postupech, dokumentaci a použitém systému kvality.

Výzkumným materiálům může také doprovázet certifikát analýzy (Certificate of Analysis, COA).

COA obvykle obsahuje vybrané výsledky analýz týkajících se konkrétní partie.

Důležité informace mohou zahrnovat testy totožnosti, měření čistoty, označení obsahu látek, použité analytické metody, identifikační značky jednotlivých šarží a další parametry specifikace.

Avšak informační hodnota COA závisí na metodách a údajích, na kterých je založena.

Samotný certifikát neprokazuje, že materiál je vhodný k podávání lidem, k použití v kosmetice nebo k léčebným účelům.

Stejně tak analytická čistota nepotvrzuje biologickou účinnost ani klinickou bezpečnost.

V vědeckých studiích by měla být nejvíce užitečná kvalitativní dokumentace podrobná, identifikovatelná a dostatečně kompletní, aby umožnila správnou interpretaci analytických výsledků.

Další informace o rozlišování mezi výrobci, dodavateli, deklaracích o jakosti a dokumentaci jednotlivých zásilek naleznete v článku Výrobcové a dodavatelé peptidů.

Souhrn

GHK-Cu je přirozeně se vyskytující komplex tripeptidu s mědí, který je studován již více než pět desetiletí.

Jeho molekulární struktura, vlastnosti vazby na měď a interakce s buněčnými systémy z něj učinily důležitou oblast výzkumu v oblasti biochemii peptidů, biologii extracelulární matrice, oxidačního stresu a regulace genů.

Komplex se skládá z glicylo-L-histydylo-L-lysinu a medi(II). Strukturaální studie umožnila identifikaci koordinačních míst obsahujících dusík, které jsou účastníky vazby medi a ovlivňují chemické vlastnosti molekuly.

Tyto vlastnosti tvoří základ pro analýzu účinků krátkých peptidů na ionty kovů a vlivu koordinační chemie na biologické procesy.

V experimentálních studiích byly zaznamenány změny syntézy kolagenu, produkce glukozaminoglykanů, expresi matrixových metaloproteináz, signalizace integrin, zánětlivých mediatorů a parametrů spojených s antioxidační ochranou.

Další studie zahrnovaly odpovědi na GHK v kulturách fibroblastů, modelích popálenin, experimentech s poškozením plic, neuronálních systémech a biomateriálech obsahujících peptidy.

Výpočetní analýzy také spojily GHK s rozsáhlými změnami v sítích expresí genů.

Vědecké významy těchto pozorování však závisí na experimentálním kontextu.

Změny v expresi genů nemusí vést k změnám v aktivitě proteinů.

Zvýšená produkce kolagenu nemusí znamenat zlepšení struktury tkání.

Změny zánětlivých markerů nejsou samostatným klinickým důkazem protizánětlivé účinnosti.

Podobně výsledky studií zahrnujících rakovinné buňky, modely zhrubnutí plic nebo kultury neuronů neodhalují účinnost vůči příslušným lidským onemocněním.

V literatuře existují také významné rozdíly mezi GHK a GHK-Cu a mezi experimenty přímo týkajícími se daného sloučeniny a studiemi poskytujícími pouze obecný biologický kontext.

Tyto rozdíly je třeba respektovat při interpretaci mechanismů účinku a navrhovaných aplikací.

Další důležitou otázkou je analytická kvalita. Techniky jako LC-MS a HPLC mohou poskytovat cenné informace o identitě a čistotě, ale samy o sobě nepotvrzují všechny strukturalní, mikrobiologické a biologické vlastnosti preparátu.

Celkově lze konstatovat, že GHK-Cu zůstává užitečným nástrojem molekulárních studií týkajících se koordinace medií, buněčné signalizace, metabolismu extracelulární matrice a reakce na oxidační stres.

Jeho známé chemické vlastnosti a rozsáhlá předklinická literatura tvoří základ pro další vědecké výzkumy. Vzhledem k tomu však tvrzení týkající se klinické účinnosti a bezpečnosti vyžadují samostatné, odpovídajícím způsobem kontrolované studie s lidskou účastí.

Zastrzeżenie

Tento článek má výhradně vzdělávací a vědecko-informativní charakter. Způsobuje pozornost studiem molekulární struktury GHK-Cu, koordinace medií, biologických mechanismů, analytických vlastností a experimentálních aplikací.

Nepředstavuje lékařské rady, nedoporučuje použití GHK-Cu u lidí ani zvířat, neuvádí schéma léčby ani nepodporuje žádné diagnostické, terapeutické ani kosmetické použití.

Výsledky získané z buněčných kultur, experimentů na zvířatech, počítačových analýz a biochemických studií nesmí být interpretovány jako důkaz klinické účinnosti nebo bezpečnosti u lidí.

Informace o analytické čistotě, materiálech pro výzkumné účely, certifikátech analýz nebo laboratorních testů neprokazují, že daný přípravek je vhodný k podávání lidem nebo k jakémukoli jinému použití podle příslušných právních předpisů.

Všechny lékařské rozhodnutí by měla přijímat příslušně kvalifikovaná zdravotnická pracovníci na základě relevantních klinických důkazů a platných předpisů.

Odkazy

1. Pickart L. A Tripeptid z lidského séra, který zlepšuje růst neoplastických hepatocytů a přežití normálních hepatocytů. San Francisco, Kalifornie, USA: University of California; 1973.
2. Pickart L., Freedman J. H., Loker W. J., et al. Rastem modulující plazmatický tripeptid může působit tím, že usnadňuje vstřebávání mědi do buněk. Nature. 1980;288(5792):715–717. doi: 10.1038/288715a0.
3. Pickart L. Použití GHL-Cu jako prostředku k hojení ran a proti zánětu. 1988, http://www.freepatentsonline.com/4760051.html.
4. Downey D., Larrabee W. F., Jr., Voci V., Pickart L. Zrychlení hojení ran pomocí glycyl-histidyl-lysinového mědi (II) Surgical Forum. 1985;25:573–575.
5. Pickart L. Iamin: lidský růstový faktor s více vlastnostmi uzdravování ran. V: Sorenson J., ed. Biologie kovyho komplexů. Clifton, NJ, USA: Humana Press; 1987. s. 273–285.
6. Meiners S., Eickelberg O. Nová generace personalizovaného objevu léků: tripeptid GHK zaujímá střední pozici v léčbě chronické obstrukční plicní nemoci. Genome Medicine. 2012;4(8, článek 70) doi: 10.1186/gm371.
7. Hong Y., Downey T., Eu K. W., Koh P. K., Cheah P. Y. ‘Metastázou náchylná’ signatura u sporadických pacientů s kolorektálním karcinomem s vysokou mírou mutace mismatch repair v raném stadiu a její implikace pro možné terapeutické postupy. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
8. Gruchlik A., Jurzak M., Chodurek E. W., Dzierzewicz Z. Účinek gly-gly-his, gly-his-lys a jejich měděných komplexů na sekreci IL-6 závislé na TNF-α u normálních lidských dermálních fibroblastů. Acta Poloniae Pharmaceutica. 2012;69(6):1303–1306.
9. Pickart L., Vasquez-Soltero J. M., Margolina A. GHK a DNA: obnovení zdraví lidského genomu. BioMed Research International. 2014;2014:10. doi: 10.1155/2014/151479.151479
10. Wegrowski Y., Maquart F. X., Borel J. P. Stimulace syntézy sulfatovaných glykosaminoglykanů pomocí tripeptidového-železnatého komplexu Glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+. Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
11. Siméon A., Emonard H., Hornebeck W., Maquart F.-X. Tripeptidový-železo komplex glycyl-L-histidyl-L-lysin-Cu2+ stimuluje expresií matrix metaloproteinázy-2 u kultur fibroblastů. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
12. Ehrlich H. Stimulace hojení kůže u imunodeprimovaných potkanů. Proceedings of the Symposium on Collagen and Skin Repair; září 1991; Reims, Francie.
13. Siméon A., Wegrowski Y., Bontemps Y., Maquart F.-X. Expression glykosaminoglykanů a malých proteoglikanů v ranech: modulace pomocí tripeptidového-železného komplexu glycyl-L-histidyl-L-lysin-Cu2+. Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
14. McCormack M. C., Nowak K. C., Koch R. J. Účinek třípeptidu zinku a tretinoinu na produkci růstových faktorů u fibroblastů bez přítomnosti séra. Archives of Facial Plastic Surgery. 2001;3(1):28–32.
15. Buffoni F., Pino R., Dal Pozzo A. Účinek tripeptidových-železných komplexů na proces hojení rán na kůži a na kulturované fibroblasty. Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie. 1995;330(3):345–360.
16. Gul N. Y., Topal A., Cangul I. T., Yanik K. Účinky topického komplexu zinku s tripeptidy a laseru helium-neon na hojení ran u králíků. Veterinary Dermatology. 2008;19(1):7–14. doi: 10.1111/j.1365-3164.2007.00647.x.
17. Cangul I. T., Gul N. Y., Topal A., Yilmaz R. Hodnocení účinků topického komplexu tripeptidu a mědi a oxidu zinečnatého na hojení otevřených ran u králíků. Veterinary Dermatology. 2006;17(6):417–423. doi: 10.1111/j.1365-3164.2006.00551.x.
18. Pickart L. Metoda použití sloučenin obsahujících měď (II) k urychlení hojení ran. 1992, http://www.freepatentsonline.com/5164367.html.
19. Arul V., Kartha R., Jayakumar R. Léčebný přístup k hojení diabetických ran s použitím kolagenních matric obsahujících biotinované GHK. Life Sciences. 2007;80(4):275–284. doi: 10.1016/j.lfs.2006.09.018.
20. Canapp S. O., Jr., Farese J. P., Schultz G. S., et al. Účinek topického komplexu tripeptidu a mědi na hojení ischemických otevřených ran. Veterinary Surgery. 2003;32(6):515–523. doi: 10.1111/j.1532-950X.2003.00515.x.
21. Swaim S. F., Vaughn D. M., Kincaid S. A., et al. Účinek lokálně injikovaných léků na hojení rán na podpaží u psů. American Journal of Veterinary Research. 1996;57(3):394–399.
22. Campbell J. D., McDonough J. E., Zeskind J. E., et al. Signatura expresí genů spojených s destrukcí plic v důsledku emfyzému a její reverzní účinek díky tripeptidu GHK. Genome Medicine. 2012;4, článek 67, doi: 10.1186/gm367.
23. Boo S., Dagnino L. Integriny jako modulátory signalizace transformujícího faktoru beta během regenerace kůže po poranění u dermálních fibroblastů. Advances in Wound Care. 2013;2(5):238–246. doi: 10.1089/wound.2012.0394.
24. Lubick K., Radke M., Jutila M. Securinin, antagonista receptoru GABAA, zvyšuje clearance makrofágů fáze II C. burnetii: srovnání s agonisty TLR. Journal of Leukocyte Biology. 2007;82(5):1062–1069. doi: 10.1189/jlb.0407255.
25. Matalka L. E., Ford A., Unlap M. T. Tripeptid GHK indukuje programovanou buněčnou smrt u buněk neuroblastomu SH-SY5Y. Journal of Biotechnology & Biomaterials. 2012;2, článek 144, doi: 10.4172/2155-952X.1000144.
26. Pollard J. D., Quan S., Kang T., Koch R. J. Účinky kobaltového tripeptidu na růst a expresi růstových faktorů u normálních a ozářených fibroblastů. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
27. Jose S., Hughbanks M. L., Binder B. Y. K., Ingavle G. C., Leach J. K. Zvýšená sekrece trofických faktorů mezodermálními kmenovými/stromálními buňkami s alginatovými hydrogély modifikovanými glycin-histidín-lysinem (GHK). Acta Biomaterialia. 2014;10(5):1955–1964. doi: 10.1016/j.actbio.2014.01.020.
28. Lau S. J., Sarkar B. Interakce mezi mědí (II) a glycyl-L-histidyl-L-lysinou, tripeptidem modulujícím růst v plazmě. Biochemical Journal. 1981;199(3):649–656. doi: 10.1042/bj1990649.
29. Perkins C. M., Rose N. J., Weinstein B., Stenkamp R. E., Jensen L. H., Pickart L. Struktura měděného komplexu růstového faktoru glycyl-L-histidyl-L-lysinu s rozlišením 1,1 Å. Inorganica Chimica Acta. 1984;82(1):93–99. doi: 10.1016/s0020-1693(00)82544-x.
30. Freedman J. H., Pickart L., Weinstein B., Mims W. B., Peisach J. Struktura glycyl-L-histydyl-L-lizyn-miedziowego kompleksu w roztworze. Biochemistry. 1982;21(19):4540–4544. doi: 10.1021/bi00262a004.
31. Pickart L., Lovejoy S. Biologická aktivita glycyl-l-histidyl-l-lyzinového faktoru růstu vázajícího měď v lidské plazmě. Methods in Enzymology. 1987;147:314–328. doi: 10.1016/0076-6879(87)47121-8.
32. Beretta G., Arlandini E., Artali R., Anton J. M. G., Maffei Facino R. Abilita sekvestrace akroleinu endogenním tripeptidem glycyl-histidyl-lysine (GHK): charakterizace konjugovaných produktů pomocí ESI-MSn a teoretických výpočtů. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
33. Godet D., Marie P. J. Účinky tritiového komplexu glycyl-L-histidyl-L-lysinu na šíření osteoblastických buněk, jejich přichycení a fenotyp. Cellular and Molecular Biology (Noisy-le-Grand, Francie) 1995;41(8):1081–1091.
34. Kawase M., Miura N., Kurikawa N., et al. Imobilizace růstového faktoru tripeprid glycyl-L-histidyl-L-lysine na poly(vinylalkohol)-kvartinovaném stilbazolu (PVA-SbQ) a jeho využití jako ligandy pro přichycení hepatocytů. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 1999;22(9):999–1001. doi: 10.1248/bpb.22.999.
35. Lutsenko S, Bhattacharjee A, Hubbard AL. Stroje na manipulaci s mědí v mozku. Metallomics. 2010;2(9):596–608. doi: 10.1039/c0mt00006j.
36. Hawk SN, Lanoue L, Keen CL, Kwik-Uribe CL, Rucker RB, Uriu-Adams JY. Embriáři potkanů s nedostatkem mědi jsou charakterizováni nízkou aktivitou dismutázy peroxidu vodíku a zvýšenými anionty peroxidu vodíku. Biology of Reproduction. 2003;68(3):896–903. doi: 10.1095/biolreprod.102.009167.
37. Bayer TA, Schäfer S, Simons A, et al. Diabetická cukrovka stabilizuje aktivitu mozkové superoxiddismutázy 1 a snižuje produkci amyloidového Aβ u transgenních myší APP23. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2003;100(24):14187–14192. doi: 10.1073/pnas.2332818100.
38. Arul V, Gopinath D, Gomathi K, Jayakumar R. GHK peptid vkládaný do kolagenózní matrixy: nový biomateriál pro hojení rán v kůře u potkanů. Journal of Biomedical Materials Research. 2005;73(2):383–391. doi: 10.1002/jbm.b.30246.
39. Miller DM, DeSilva D, Pickart L, Aust SD. Účinky glycyl-histidyl-lysylu chelatovaného Cu(II) na lipidovou peroxidaci závislou na feritinu. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1990;264:79–84. doi: 10.1007/978-1-4684-5730-8_11.
40. Alberghina M, Lupo G, La Spina G, et al. Cytoprotektivní účinek měďnatých (II) komplexů proti ethanolovým poškozením žaludeční sliznice potkanů. Journal of Inorganic Biochemistry. 1992;45(4):245–259. doi: 10.1016/0162-0134(92)84013-d.
41. Beretta G, Artali R, Regazzoni L, Panigati M, Facino RM. Glycyl-histidyl-lysine (GHK) je inhibítor α,β-4-hydroxy-trans-2-nonenal: srovnání s karnozinem. Úvahy o mechanismu reakce pomocí hmotnostní spektrometrie elektroenzyklopetrie, 1H NMR a výpočetních technik. Chemical Research in Toxicology. 2007;20(9):1309–1314. doi: 10.1021/tx700185s.
42. Beretta G, Arlandini E, Artali R, Anton JM, Maffei Facino R. Schopnost endogenního tripeptidu glycyl-histidyl-lysine (GHK) ke sekvestraci akroleinu: charakterizace konjugovaných produktů pomocí ESI-MSn a teoretických výpočtů. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
43. Park JR, Lee H, Kim SI, et al. Tripeptidový komplex GHK-Cu zmírňuje akutní plicní poškození způsobené lipopolysacharidem u myší. Oncotarget, 2016, 7(36): 58405.
44. Gao M, Chen L, Yu H, et al. Diosgenin snižuje aktivitu NF-κB p65/p50 a p38MAPK a zmírňuje akutní plicní poškození způsobené lipopolysacharidem u myší. International immunopharmacology, 2013, 15(2): 240–245.
45. Liu T, Zhang L, Joo D, et al. Signální signalizace NF-κB při zánětu. Signální transdukce a cílená terapie, 2017, 2(1): 1–9.
46. Kaminska B. MAPK signální dráhy jako molekulární cíle pro protizánětlivou terapii – od molekulárních mechanismů až k terapeutickým výhodám. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Proteins and Proteomics, 2005, 1754(1–2): 253–262.
47. Yong HY, Koh MS, Moon A. Inhibitory MAPK p38 pro léčbu zánětlivých onemocnění a rakoviny. Expertní posudek o léčivých přípravcích ve fázi výzkumu, 2009, 18(12): 1893–1905.
48. Zhou XM, Wang GL, Wang XB, et al. Peptid GHK inhibuje plicní fibrózu indukovanou bleomycinem u myší pomocí potlačení epiteliové-mezenchymální transpozice spouštěné TGFβ1/Smad. Frontiers in Pharmacology, 2017, 8: 904.
49. Mukherjee K, Lee A, Zhu L, et al. Spánkem postižená kognitivní dysfunkce u stárnoucích myší je zmírněna pomocí rapamycínu. Aging Pathobiology and Therapeutics, 2019, 1(1): 05–09.
50. Kalaria RN. Vaskulární základ degenerace mozku: Zhoršující se kontrola a rizikové faktory demence. Nutrition Reviews. 2010;68(supplement 2):S74–S87. doi: 10.1111/j.1753-4887.2010.00352.x.
51. Pollard JD, Quan S, Kang T, Koch RJ. Vliv měděného tripeptidu na růst a expresi růstových faktorů u normálních a ozářených fibroblastů. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
52. Sensenbrenner M, Jaros GG, Moonen G, Meyer BJ. Vliv podmíněných médií na diferenciací nervových buněk. Experientia. 1980;36(6):660–662. doi: 10.1007/BF01970123.
53. Lindner G, Grosse G, Halle W, Henklein P. Vliv syntetického tripeptidu na nervovou tkáň kultivovanou in vitro. Zeitschrift für Mikroskopisch-Anatomische Forschung. 1979;93(5):820–828. (Ger).
54. Ahmed MR, Basha SH, Gopinath D, Muthusamy R, Jayakumar R. Počáteční zvýšení produkce růstových faktorů a zánětlivých mediátorů během regenerace nervů v přítomnosti kolagenových trubiček s vloženým adhezivním peptidem. Journal of the Peripheral Nervous System. 2005;10(1):17–30. doi: 10.1111/j.1085-9489.2005.10105.x.
55. Pickart L. Použití GHL-Cu jako prostředku na hojení ran a proti zánětu. Patent Spojených států 4 760 051, červenec 1988.
56. Downey D, Larrabee WF, Voci V, Pickart L. Zrychlení hojení ran pomocí glycyl-histidyl-lysyl Cu(II) Surgical Forum. 1985;36:573–575.
57. Maquart FX, Pickart L, Laurent M, Gillery P, Monboisse JC, Borel JP. Stimulace syntézy kolagenu v kulturách fibroblastů pomocí tripeptid-cínového komplexu glycl-L-histydyl-L-lysin-Cu2+. FEBS Letters. 1988;238(2):343–346. doi: 10.1016/0014-5793(88)80509-x.
58. Wegrowski Y, Maquart FX, Borel JP. Stimulace syntézy sulfatovaných glykosaminoglykanů pomocí tripeptidovo-železného komplexu glycyl-L-histidyl-L-lysin-Cu2+. Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
59. Siméon A, Emonard H, Hornebeck W, Maquart FX. Tripeptidový-kobaltový komplex glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+ stimuluje expresií matrix metaloproteinázy-2 u fibroblastních kultur. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
60. Siméon A, Wegrowski Y, Bontemps Y, Maquart FX. Expression glykosaminoglykanů a malých proteoglikanů v ranech: modulace pomocí tripeptidu-mědiového komplexu glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+. Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
61. Kang YA, Choi HR, Na JI, et al. Kov-GHK zvyšuje expresi integrinů a pozitivitu p63 u keratinocytů. Archives of Dermatological Research. 2009;301(4):301–306. doi: 10.1007/s00403-009-0942-x.
62. Lamb J. The Connectivity Map: nový nástroj pro biomedicínský výzkum. Nature Reviews Cancer. 2007;7(1):54–60. doi: 10.1038/nrc2044.
63. Iorio F, Bosotti R, Scacheri E, et al. Objev mechanismu účinku léků a jejich přesměrování pomocí transkripčních odpovědí. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2010;107(33):14621–14626. doi: 10.1073/pnas.1000138107.
64. Hong Y, Downey T, Eu KW, Koh PK, Cheah PY. ‘Metastázou náchylná’ signatura u pacientů s sporadickým kolorektálním karcinomem s vysokou mírou neshod v poškození DNA v raném stadiu léčby a její implikace pro možné terapeutické postupy. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
65. Huang P, Kishida S, Cao D, et al. Faktor neuronální diferenciace neuroD1 snižuje expresi neuronálního repelentního faktoru Slit2 a podporuje motilitu buněk a tvorbu nádoru u neuroblastomu. Cancer Research. 2011;71(8):2938–2948. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-10-3524.
66. Fischer A, Sananbenesi F, Mungenast A, Tsai LH. Účelová léčba kognitivních poruch cílením na správné HDAC (y). Trends in Pharmacological Sciences. 2010;31(12):605–617. doi: 10.1016/j.tips.2010.09.003.
67. Koch CM, Wagner W. Epigenetická stopa stárnutí k určení věku v různých tkáních. Aging. 2011;3(10):1018–1027. doi: 10.18632/aging.100395.