GHK-Cu-peptidi: molekyylirakenne, toimintamekanismit ja käyttöaiheet tieteellisissä tutkimuksissa

GHK-Cu on luonnollisesti esiintyvä kupariproteiini-, tripeptidi-kompleksi, joka herättää tutkijoiden mielenkiintoa sen vuoksi, että se on mukana soluviestinnässä, soluseinän säätelössä sekä kudosten säilyttämiseen ja korjaamiseen liittyvissä biologisissa prosesseissa. Vuodesta 1973, jolloin Lorena Pickart tunnistikin sen, tutkijat ovat tutkineet sen molekyylirakennetta, kuparipitoisuuden vaikutusta geenien ilmentymiseen sekä sen vuorovaikutusta tulehdusprosessien, hapetusstressin ja kudosten uudistumisen osallistuvien soluviestintäreiteillä.

Tätä yhdistettä tunnistettiin ensimmäistä kertaa ihmisveren komponenttien ja niiden vaikutuksen tutkimuksissa proteiinien synteesissä soluissa. Pickart havaitsi, että verestä peräisin oleva tekijä voi vaikuttaa vanhenevan maksakudoksen solujen toimintaan herättämällä nuorempien solujen tyypillisiä proteiinien synteesiä koskevia malleja [1]. Myöhemmät tutkimukset mahdollistivat tripeptidi glykoli-L-histidioli-L-lysiini (GHK) -nimisen yhdisteen tunnistamisen ja sen kyvyn muodostaa vakaa kumppanuus kahden metallijonon (Cu²⁺) kanssa.

GHK koostuu kolmesta aminohaposta: glysiinistä, histidiinistä ja lysiinistä. Kun se sitoutuu messi- (II) jodiaan, se muodostaa kompleksin, jota yleisesti kutsutaan GHK-Cu:ksi tai GHK-messiproteiineiksi.

Tätä peptidiä on havaittu ihmisen biologisissa nesteissä, mukaan lukien vereen, sylkeen ja virtsaan. Julkaistujen tietojen mukaan sen pitoisuus vereen pienenee iän myötä — noin 200 ng/ml 20-vuotiaana ja noin 80 ng/ml 60-vuotiaana [2–9]. Nämä havainnot ovat edistäneet tutkimuksia GHK:n, ikääntymiseen liittyvien solumuutosten ja kudostekijöiden säätelyn välisistä yhteyksistä.

Kokeellisissa tutkimuksissa on todettu, että GHK-Cu voi vaikuttaa kollageenin synteesiin, soluseinän uudistumiseen, angiogeeniseen signaalointiin sekä antioksidanttisten entsyymien aktiivisuuteen. Fibroblastien kasvatus- ja eläinmalleissa on myös tutkittu sen vaikutusta tulehduksellisiin medianteihin, solujen siirtymiseen ja kudosten uudistumiseen liittyvien geenien ekspressiotavoihin.

Joissakin analyyseissä GHK:n ja yli 4000 geenin muutosten välillä todettiin yhteyttä, mikä viittaa siihen, että sen biologinen aktiivisuus voi koskea useita toisiinsa liittyviä solurakenteita [9].

Genien ilmentymien muutokset eivät kuitenkaan automaattisesti merkitse kudosten toiminnan parantumista tai hyödyllisiä kliinisiä tuloksia. Monet havainnot perustuvat soluviljelmään, tietokoneanalyyseihin tai eläinkokeisiin.

GHK-Cu pysyy siis tärkeänä molekyylitutkimuksen ja ennaltaehkäisyn kohteena erityisesti kuparin koordinaation, imusolujen biologian, hapetusstressin ja solujen vastauksen vaurioihin osalta.

Mikä on GHK-Cu?

GHK-Cu on koordinaattikompleksi, joka syntyy, kun glysiyli-L-histidiyli-L-lysyynitipeptidi sitoo kuparionia(II). Kuparin koordinaatiokyky on yksi sen molekyylistä ominaisuudesta, joka erottaa sen monista muista lyhyistä peptideistä [1, 2].

Meď on välttämätön jäämämateriaali, joka osallistuu lukuisiin biologisiin prosesseihin. Se tukee entsyymien toimintaa, mitokondrioiden energiaa tuottavaa prosessia, antioksidatiivista suojaa sekä sidekudosten muodostumista ja säilyvyyttä.

Samalla hopean taloutta on säädettävä tiukasti, koska liian paljon tai väärin valvottu hopea voi osallistua reaktioihin, jotka johtavat reaktiivisten hapenmuotojen syntymiseen.

GHK luo molekyylitilan, joka mahdollistaa kuparin sitoutumisen ja vaikuttaa sen kemiallisiin ominaisuuksiin. Tämän vuorovaikutuksen ansiosta GHK-Cu on kehittynyt hyödylliseksi tutkimusmalleiksi metallien koordinointiin ja solun signaalointiin osallistuvien pienien peptiinien analysoimiseksi.

Aikaisemmissa tutkimuksissa keskityttiin sen vaikutukseen fibroblasteihin, eli soluun, joka vastaa lukuisien sidekudoksen komponenttien tuotannosta ja ylläpidosta.

Fibroblasti syntetisoi kollageenia, elastiiniin liittyviä aineita, glykoproteiineja sekä muita soluseinän osia. Nämä aineet ovat vastuussa kudosten mekaanisista ominaisuuksista, organisaatiosta ja rakenteellisesta stabiilisuudesta.

Borelin, Maquartin ja kollegojen tekemät tutkimukset osoittivat, että GHK-Cu voi vaikuttaa soluseinän ulkopuolisen kudoksen metaboliaan fibroblastien kasvatusmenetelmissä jopa noin 1–10 nanomoolia litrassa (nM) [10–13] olevilla pitoisuuksilla.

Tutkitut vaikutukset käsittivät kollageenin tuotannossa ja hajoamisessa tapahtuneita muutoksia sekä rikkihappoisten glykogliinien ja pienien proteoglikaanien, kuten dekorynin, muodostumista.

On tärkeää, että soluseinän säilyttäminen edellyttää enemmän kuin vain rakenteellisten proteiinien tuotannon lisäämistä.

Terveen kudoksen uudelleenrakentuminen perustuu kudosten rakennusaineiden synteesiin, muuntumiseen ja hajoamiseen koordinoituna.

Mato-proteaasiat (MMP) osallistuvat soluseinän hajoamiseen, kun taas soluseinän inhibiittorit (TIMP) auttavat säätämään niiden aktiivisuutta.

Kokeellisissa tutkimuksissa todettiin, että GHK-Cu vaikuttaa MMP-aktiivisuuteen sekä inhibiittoreiden kuten TIMP-1 ja TIMP-2 ekspressioon [11, 12].

Näiden havaintojen mukaan GHK-Cu-altistuksen ja emättimen rakenteiden muutosten välillä on yhteys. Ne eivät kuitenkaan todista, että tämä yhteys aiheuttaa jatkuvasti hyödyllistä kudosten uudistumista ihmisissä.

Lisäklinisiin tutkimuksiin sisältyi GHK-Cu:n analysointi haava-analyysimalleissa, mukaan lukien krampoitumista koskevat kokeet, siirtojen integraatio, tulehduksen signaalointi ja solujen muuttuminen [3–5].

Muissa tutkimuksissa tarkasteltiin fibroblastien reaktioita säteilyyn liittyviin vaurioihin. Siinä havaittiin solujen kasvun ja elinvoiman muutoksia sekä kasvutekijöiden ekspressiota [14].

Kokeissa analysoitiin myös interaktion tapauksia, jotka koskivat immuunisoluja ja verisuonisoluja, jotka osallistuvat kudosten reaktiota vaurioille [15].

Eläinkokeissa havaittiin antioksidatiivisen aktiivisuuden muutoksia sekä vammojen paranemiseen liittyviä parametreja GHK-Cu-altistuksen tai samankaltaisia peptidejä sisältävien materiaalien yhteydessä [16–21].

Nämä tulokset lisäävät kiinnostusta GHK-Cu:ta kohtaan tutkimusvälineenä solujen ikääntymisen, sisäelinten suojaavan kudoksen säätelyn sekä kudosten reaktion hapetus- ja mekaaniset vauriot kohtaan.

Ei kuitenkaan pidä tulkita verenvuodon sulkemista, fibroblastien säilymistä tai molekyylisignaalia koskevia havaintoja kokeellisissa malleissa todisteena ihmisille tarkoitettujen hoitojen tehokkuudesta.

GHK-Cu:n toimintamekanismi: in vitro- ja in vivo-tutkimusten tulokset

GHK-Cu:n kanssa liittyvät biologiset mekanismit sisältävät useita toisiinsa liittyviä reittejä eikä yksinomaan yhtä määrättyä molekyylitavoitetta.

Kokeellisissa tutkimuksissa tutkittiin sen vaikutusta geenien ekspressioon, kasvutekijöiden signaalointiin, emättimen ulkopuolisen kudoksen metaboliaan, hapetusstressin vastaisiin reaktioihin, tulehduksellisiin reitteihin sekä solujen vuorovaikutukseen ympäröiviä kudoksia kohtaan.

Nämä mekanismit on tutkittu hyödyntäen soluviljelmää, eläinmalleja ja tietokoneanalyysejä.

Geneksoittuminen ja keuhkoputkien uudistuminen

Yksi tärkeistä tutkimusaloista on GHK:n ja pitkäaikaisen keuhkosairauden (PCOPD) yhteydet.

Boston Universityn, Groningenin yliopiston, British Columbian yliopiston ja Pennsylvanian yliopiston tutkijoiden osallistumalla monikeskustutkimuksessa analysoitiin signaaleja keuhkopussin tuhoutumiseen liittyvistä geenien ekspressiotasoista keuhkoahtaumassa [22].

127 geenin ryhmä, joka liittyy keuhkoputkentulehdukseen, on tunnistettu ja tutkittu, voidaanko GHK vaikuttaa virheellisiin transkriptio-malleihin.

Tutkijat totesivat, että GHK-altistuminen liittyi beta-transformaatiotoiminnallisen tekijän (TGF-β) signaalivasteen muutoksiin.

TGF-β on tärkeä säätelijä solujen erilaistumisessa, soluseinän muodostumisessa, kudosten uudistumisessa ja kiinnittymisessä.

Sen vaikutus riippuu biologisesta kontekstista. Vaikka TGF-β osallistuu kudosten normaalin säilymisen varmistamiseen, häiriintynyt signaalointi voi myös edistää kudosten matriksin patologista kerääntymistä ja verisuonien kehittymistä.

Silmätulehduksen sairastaneilta potilailta kerättyjen keuhkoputkien fibroblastien avulla tehdyssä laboratoriotutkimuksessa GHK:hen altistuminen liittyi parantuneeseen kykyyn supistaa ja uudelleenjärjestellä kollageenia.

Tutkijat huomasivat myös integriini β1:n lisääntyneen ekspressiota, mikä viittaa integriineistä riippuvaisten solukontaktien mahdolliseen osallisuuteen [22, 23].

Integrinit ovat proteiineja, jotka auttavat soluja vuorovaikuttelemaan ympäröivän soluseinämän kanssa. Ne osallistuvat solujen liittymiseen ja siirtymiseen, mekaanisten signaalien välittämiseen sekä kudosten organisoitumiseen.

Näiden havaintojen perusteella GHK voi vaikuttaa TGF-β-signaaloinnin, integriinin ekspressiolla ja soluseinän reguloinnilla oleviin yhteyksiin.

Kokeet eivät kuitenkaan todista, että GHK-Cu kääntää keuhkoahtaumataudin etenemistä tai palauttaa potilaiden keuhkojen toimintakykyä.

Tulokset koskevat geenien ilmentymämuotoja ja solujen toimintaa kokeellisissa olosuhteissa.

Syöpägeenien ekspressio ja solujen proliferaatio

GHK on myös tutkittu tutkimuksissa, jotka koskevat syöpäperäisiä geeniverkostoja.

Hong ja hänen kollegansa tutkivat paksusuolentulehduksen etenemisen ja sen levinneisyyden yhteydessä esiintyviä geenien ilmenemismuotoja [7, 24].

Myöhemmät tulkinnat näistä tiedoista yhdistivät GHK:n ja noin 70% valitun syöpälevinteen yhteyteen liittyvän geeniryhmän ekspressiolaskun laskuun.

Tässä yhteydessä käsiteltiin muun muassa MAP3K5-, LMNA-, APP- ja NFATC2-geenejä.

Nämä geenit osallistuvat erilaisiin biologisiin prosesseihin, jotka kattavat solun sisäisen signaalitoiminnan, solun ytimen organisoinnin, solujen säätelyn ja transkriptiovasteet.

Mutta metastasoituneiden sairauksien geneettisten muutosten muutosta ei pidä yhdistää todistettuun metastasoitumisen ehkäisyyn.

Genien ekspressiotekniikoiden signaureilla voi olla merkitystä tautitapahtumien kulkua koskevien reittien tunnistamisessa, mutta niiden muuttaminen ei ole itsenäinen kliininen todiste syöpää vastaan toimivasta vaikutuksesta.

Muissa laboratoriotutkimuksissa tutkittiin GHK:n altistumista ihmisisolukannoissa.

Tutkimuksissa, joissa oli mukana neuroblastomien ja rintasyövän malleja, todettiin apoptoosin ja solujen lisääntymisen muutoksia nanomolekyylipitoisuuksilla [25].

Apoptoosi on säädelty muoto solukuolemaa, joka on osallisena kudosten kehityksessä ja soluhämostasien ylläpidossa.

Apoptoosin häiriöt ovat tärkeitä syöpäbiologiassa, koska syöpäsolut voivat kehittää mekanismeja, jotka mahdollistavat sellaisten virheettömien signaalien välttämisen, jotka johtavat solun kuolemaan.

Mutta syöpäsolujen kasvatusaineissa havaitut apoptoosit eivät kuitenkaan viittaa selektiiviseen syöpää vastaan toimivaan vaikutukseen ihmisessä.

Kammioverkot eroavat todellisista kasvaimista niiden rakenteen, metabolian, mikroympäristön, immuunijärjestelmän kanssa tehtävien vuorovaikutusten ja altistumisen olosuhteiden osalta.

Siksi nämä tulokset ovat edelleen tärkeitä syöpämekanismien tutkimuksessa eikä ne ole vahvistettu käyttöä kliinisessä onkologiassa.

Fibroblastien aktiivisuus ja soluseinän uudistuminen

Fibroblastitutkimukset ovat yksi tärkeä osa GHK-Cua koskevaa tieteellistä kirjallisuutta.

Kromiproteiinikompleksien altistuksen jälkeen havaittiin kollageenin tuotannon muutoksia, matriisin hajoamista sekä kasvutekijöiden ekspressiota [9, 26].

Kollageenin synteesi on vain yksi osa soluseinän säätelyä.

Jotta kudosten rakenne säilyy kunnossa, verkkosolujen on myös alistuttava valvotulle hajoamiseen ja uudelleenjärjestelyyn.

GHK-Cu on yhdistettyä munasarjojen metalloproteinaasien aktiivisuuden muutoksiin sekä TIMP-1- ja TIMP-2-aineenvaihdunnan ekspressioon.

Nämä tulokset viittaavat siihen, että yhdiste voi vaikuttaa sekä materian ainesosien tuotantoon että hajotukseen.

Nämä muutokset ovat riippuvaisia kokeellisen mallin ja ympäröivien biologisten olosuhteiden mukaisista suuntauksista ja merkityksistä.

Tutkijat analysoivat valoherkkyyden fibroblastimalleissa, vaikuttavatko kuparitripeptydit solujen kasvua ja kasvutekijöiden ekspressiota säteilyaltistuksen jälkeen [26].

Kirjallisuudessa käsiteltyjen geenien ilmentymien analyyseissä todettiin myös muutoksia DNA-korjauksen yhteydessä olevissa reiteissä. Ne käsittivät 47 lisääntyvää geniä sekä viittä geniä, joiden ilmentyminen väheni vähintään 50 prosentilla [9, 26].

Nämä tulokset osoittavat solujen transkriptio-reaktiossa tapahtuneita muutoksia.

Neuvovat kuitenkaan itsessään täyttä DNA:n korjaamista, solujen vanhenemisen kääntämistä tai kudosten normaalin toiminnan palauttamista.

Angiogeeninen signaalointi ja kasvutekijät

GHK-Cu tutkittiin myös angiogeneesin kannalta eli prosessina, jossa uusia verisuonia muodostuu jo olemassa olevista verisuonistruktuureista.

Angiogeneesi osallistuu kudoskehitykseen, vaurioiden vasteeseen sekä verisuoniverkoston säilyttämiseen.

Kokeellisissa tutkimuksissa on analysoitu GHK:ta sisältäviä aineita ja sellaisia tekijöitä kuin verisuonien kasvutekijä VEGF ja fibroblastien kasvutekijä bFGF [27].

VEGF osallistuu verisuoniväliaineen solujen signalointiin ja verisuonien kehitykseen.

Pohjainen FGF osallistuu solujen proliferointiin ja erilaistumiseen sekä kudosten vasteeseen, joka sisältää verisuonisolut ja sidekudos.

Joissakin tutkimuksissa on todettu näiden tekijöiden lisääntyneen ekspressiota tai erittymistä GHK:hen liittyvien materiaalien altistuksen jälkeen.

Näiden vaikutusten mahdolliseksi osaksi mainittiin myös integriin riippuvaa signaalia.

Muutokset VEGF- tai bFGF-aineenvaihdunnassa eivät kuitenkaan viittaa toimivien verisuonten syntymiseen.

Täydellinen angiogeneesi käsittää useita vaiheita, kuten verisuonten solujen siirtymisen, verisuonien muodostumisen, niiden vakauttamisen ja niiden liittymisen olemassa olevaan verenkiertoon.

Saatavilla olevat tulokset antavat näin ollen mekanistisia todisteita, jotka ovat tärkeitä verisuonitutkimuksille, mutta ne eivät vahvista verisuonten toimintaan liittyviä kliinisiä etuja.

GHK-Cu:n rakenne ja biokemian tutkimus

GHK-Cu:n molekyylirakennetta tutkittiin käyttämällä erilaisia analyyttisiä ja spektroskopisia menetelmiä.

Neihin kuului rentgenilinen krystalografia, elektroninen paramagneettinen resonanssi (EPR), röntgentenkimateriaalin absorptiosekvenssi, protoninen magneettinen resonanssi sekä kemiallisia mittausmenetelmiä [28–30].

Nämä menetelmät auttoivat luokittelemaan kuparin koordinaatiomolekyylin ympäristöä peptidiyhdisteessä.

Kromin koordinaatio ja molekyyligrafiikka

GHK koostuu kolmesta aminohaposta, jotka on järjestetty glysiini–histidiini–lysiini-sekvenssiin.

Restyylihistydi on erityisen tärkeä, koska sen imidazoliryhmä voi osallistua metallijyvämien koordinaatioon.

Rakenneanalyysit osoittavat, että kupari(II) voi muodostaa koordinointiyhteyksiä kolmen elektronien antoreittina toimivan typpiatomin kanssa peptidiyhdisteen molekyylissä.

Näihin kuuluvat glysiinin aminogruppaa edustava typpikiteen atomi, glysiini–histidiini-yhdistymän kanssa sidoksissa oleva deprotoniertunut typpikiteinen amidikiteen atomi sekä histidiinin imidazolikettyn typpikiteen atomi [28–30].

Neljäs koordinaatiopaikka voi tulla toisenäyttelynä toiselle donoijaryhmälle kemiallisen ympäristön mukaan.

Tätä järjestelmää kuvataan usein neliö-planeeraavaksi tai neliö-planeeraavalle lähestymiskäytännölle tyypilliseksi.

Tarkka geometria voi riippua pH-arvosta, liuottimen olosuhteista, lisäligandenien läsnäolosta sekä tutkimuksessa tarkastellusta kompleksimuodosta.

Kromin koordinaatio vaikuttaa GHK-Cu:n kemiallisiin ominaisuuksiin ja erottaa tämän kompleksin irrallisesta GHK-peptidistä.

Peptidin ja messin välinen rakenteellinen riippuvuus on tärkeää, koska metallin sitoutuminen voi muuttaa molekyylin reaktiokykyä ja sen vuorovaikutusta muiden biologisten yhdisteiden kanssa.

Kuva: GHK-Cu-kompleksin molekyylirakenne

GHK-Cu:n molekyylirakenne näyttää, miten glysiini-histidiini-lysiini-peptidi tuottaa typpipaikkoja sisältäviä koordinaatiomalleja, jotka mahdollistavat kuparin (II) sitoutumisen.

Rakenteellisissa ja spektroskopisissa tutkimuksissa on todettu aminogruppien typpi, peptidiyhdistymien amidiytyppi sekä histidiinin imidazolirenkaan typpi tärkeinä osatekijöinä kuparin sitoutumisessa.

Koordinaatiomalli auttaa selittämään, miksi GHK tutkitaan kupariproteiinin sitoutumisaineena sekä metallien ja proteiinien välisen vuorovaikutuksen mallina.

Interaktionit albumiinin ja muiden kuparista kiinnittyvien molekyylien kanssa

Fysiologisen pH-arvon ollessa samanlaisena GHK-Cu voi osallistua erilaisiin koordinaattisiin tasapainotiloihin lisäligandenien osallistumisen myötä.

Lau ja Sarkar tutkivat messiä (II), GHK:ta, histidiinia sisältäviä molekyylejä sekä verealbuminia [28–30].

Serumalbumiini on proteiini, joka esiintyy runsaasti vereen. Se osallistuu monien aineiden, kuten valittujen metallijyvien, kuljettamiseen ja sitoutumiseen.

Kirjallisuudessa on kuvattu, että sekä GHK että albumiinit ovat erittäin kiinnittyviä kuparia. Tutkituissa olosuhteissa annettiin arvoja noin log₁₀ 16,44 GHK:lle ja log₁₀ 16,2 albuminille.

Nämä arvot viittaavat siihen, että GHK voi osallistua kilpailukykyisiin interaktointeihin, jotka liittyvät kuparivetykationin sitoutumiseen.

Kuitenkin mekaanisen hapen jakautuminen biologisissa nesteissä riippuu muustakin kuin kahden eristetyn molekyylin sitoutumisvoimasta.

Mieden saatavuuteen vaikuttavat myös yksittäisten aineiden pitoisuudet, kilpailevat ligandi, proteiini- ja solutason kuljetusjärjestelmät.

GHK:n kyky sitoa metallia on siis perusta tutkimukselle metallin siirtymistä ja koordinointitasoja koskevien kysymysten osalta.

Se ei kuitenkaan todista, että GHK-Cu toimittaa kuparia turvallisesti kaikkiin kudoksiin eikä estä kaikkia kuparia koskevia hapetusreaktioita.

Mehiläisainekset ja kuparista riippuvat entsyymit ja redoxprosessien säätely

Kulta on välttämätön monien tärkeiden entsyymien toiminnan kannalta.

Lisyylianoksidaasi osallistuu kollageenin ja elastiinin molekyylien välisen sivukiteen muodostumiseen.

Meidinkromi-sinkidioksidi-dismutaasi, yleisesti nimeltään SOD1, tukee antioksidatiivista suojausta katalysoimalla peroksidi- ja peroksidi-oksiditermien muuntumista vähemmän reaktiivisemmiksi tuotteiksi.

Cytochroom c -oksidaasi osallistuu mitokondriumiin kulkevaan elektronien siirtoon ja solun energian tuotantoon.

Koska GHK sitoo kuparia, tutkijat tutkivat, vaikuttaako GHK-Cu tämän metallin saatavuuteen ja siihen liittyviin biokemiallisiin prosesseihin.

Mehiläispeptidin läsnäolo ei kuitenkaan tarkoita sitä, että metalli siirtyy suoraan jokaisen mehiläisestä riippuvaisen entsyymin kautta.

Solut sisältävät erikoistuneita kuljetusmekanismeja, sitovaa proteiinia sekä järjestelmiä, jotka säätelevät kuparin jakautumista solujen sisällä.

Nämä mekanismit ovat tärkeitä, koska vapaa tai epäasianmukaisesti säädetty kupari voi osallistua hapettumiseen liittyviin reaktioihin.

Tietyissä olosuhteissa messinkiin liittyvät redox-reaktiot voivat edistää reaktiivisten kemiallisten muotojen syntymistä.

Siksi GHK-Cu tutkittiin sen mahdollisen vaikutuksen osalta messin reaktiivisuuteen ja hapetusprosesseihin [31, 32].

Tämä riippuvuus on kemiallisesti monimutkainen. Messun sitominen voi muuttaa metallin reaktiokykyä, mutta biologiset seuraukset riippuvat koko kemiallisesta ympäristöstä.

Aldehydien sidottuminen ja antioksidatiivinen kemiikka

GHK:ta tutkittiin myös sen kyvyn suhteen reagoida valittuihin aldehydeihin, jotka syntyvät lipidien peroksidaation yhteydessä.

Lihapersyytys käsittää hapetusreaktioita, jotka vaikuttavat solun kalvojen lipideihin ja muihin lipidejä sisältäviin rakenteisiin.

Näiden reaktioiden seurauksena voi syntyä reaktiivisia aldehydejä, kuten 4-hydroksynonenali ja akroleeni.

Molemmat yhdisteet ovat tutkimuksen kohteena, koska ne voivat vaikuttaa proteiineihin ja muihin solukuituihin.

Kemiallisissa tutkimuksissa on todettu, että GHK voi muodostaa reaktiotuotteita näiden aldehydien kanssa, mikä viittaa niiden mahdolliseen sitoutumiskykyyn kokeellisissa olosuhteissa [31, 32].

Nämä tulokset antavat tietoa GHK:n kemiallisesta reaktiivisuudesta.

Kuitenkin laboratorio-olosuhteissa aldehydeihin reagoivan kyvyn puute ei todista, että peptidi estäisi ihmisissä hapetusvaurioita kudoksissa.

Reagenssipitoisuudet, kilpailevien biologisten molekyylien läsnäolo sekä reaktion nopeutta on tärkeää arvioitaessa mahdollisia biologisia seurauksia.

Solujen liitos ja interaktion solun ulkopuolisen matriisin kanssa

GHK-Cu tutkittiin myös solujen kiinnittymisen ja niiden interaktion solun ulkopuolisten materiaalien kanssa kontekstissa.

Kolloidinen sidonta on välttämätöntä kudosten oikean organisoinnin kannalta, koska solujen on tunnistettava ympäröivä ympäristö ja reagoida siihen.

Osteoblastisolujen sekä hepatosyyttien liitoustilojen tutkimuksissa on analysoitu GHK:hen liittyvien aineiden vaikutusta solujen leviämiseen, niiden kiinnittymiseen ja fenotyypiin [33, 34].

Nämä tutkimukset ovat tärkeitä biomateriaalien kehitykselle, joissa peptiitit voidaan kiinnittää tai integroida niiden pinnoille.

Havaitut vaikutukset riippuvat peptidityypistä, materiaalin koostumuksesta, solutyypistä ja koeolosuhteista.

Ne tuottavat tietoa peptiinien ja pinnan välisistä ja solujen ja matriisin välisistä vuorovaikutuksista, eivätkä ne ole suoraa näyttöä ihmisen kudosten uudistumisesta.

GHK-Cu:n käyttö tieteellisissä tutkimuksissa

GHK-Cu on tutkittu monilla molekyylitutkimuksen ja ennallekkulääketieteen aloilla.

Niihin kuuluvat hapetusstressin biologia, tulehdussignaalit, kudosrakenteen muutokset, keuhkojen vauriot, neuronien reaktiot, verisuonten säätely, soluseinämän uudistuminen sekä geenien ekspressiotutkimus.

Alla olevat osat esittävät tärkeimmät kokeelliset tulokset ja niiden rajoitukset.

Tutkimukset antioksidatiivisen vaikutuksen ja redox-prosessien tutkimiseksi

Messinkiä sisältävät antioksidanttiset entsyymit ovat tärkeä osa solujen suojausta oksidatiiviselta stressiltä.

Yksi esimerkki on SOD1, joka tarvitsee messiä ja sinkkiä toimintansa kannalta.

Miedestä puutosta koskevat tutkimukset ovat osoittaneet, että sen riittämätön saatavuus voi vaikuttaa SOD1:n aktiivisuuteen ja lisätä oksidatiivisen stressin mukaisia parametrien arvoja [35–38].

Nämä tulokset vahvistavat kuparimarkkinoiden moitteettoman hallinnan biologista merkitystä.

Kuitenkin kuparipuutoksen tai sen ravintoaineena olevan tarjonnan palauttamisen tutkimuksia ei voida automaattisesti pitää todisteina samanlaisesta GHK-Cu-aineen vaikutuksesta.

Rajat eroittaminen on tärkeää, koska tietyn kuparikompleksin biologinen toiminta riippuu sen molekyylirakenteesta, jakautumisesta sekä vuorovaikutuksesta metallin taloutta säätelevien reittien kanssa.

Biomateriaaleja sisältäviä GHK-aineita ja kupariproteiiniyhdistelmiä koskevissa kokeellisissa tutkimuksissa analysoitiin antioksidatiivisia vasteita sekä kudoksia koskevia parametrejä.

Osassa tutkimuksista tarkasteltiin sitä, vaikuttaako GHK-Cu ferrytyyniin liittyvään lipidiperkysymykseen.

Ferytyna on proteiini, joka osallistuu raudan varastointiin solujen sisällä.

Rauta voi osallistua hapetusreaktioihin, kun se esiintyy reaktiivisessa muodossa.

Tutkimuksissa on todettu, että kupari yhdessä GHK:n kanssa voi vaikuttaa ferrytyynistä riippuvaan lipidipersytykseen tietyissä koeolosuhteissa [39, 40].

Näiden havaintojen avulla saadaan tietoa kuparikompleksien ja raudan kanssa tapahtuvista vuorovaikutuksista sekä hapetusreaktioiden kemiasta.

Lisäkemialliset tutkimukset analysoivat GHK:n reaktioita lipidipersyytysaineiden, kuten 4-hydroksynonalen ja akroleiinin, kanssa [41, 42].

Tulokset oikeuttavat jatkotutkimusten tekemisen GHK:sta, joka on molekyyli, joka osallistuu aldehydien kanssa tapahtuvaan kemialliseen reaktiotaan.

Kuitenkin kemiallisessa testissä tai solumuodossa todettu antioksidatiivinen aktiivisuus ei kuitenkaan todista kliinistä suojaa hapetusvahinkoja vastaan.

Varoitusmerkinnät ja cytokinien säätö

Viremia käsittää koordinoidut vuorovaikutukset immuniteettisolujen, signaaliproteiinien ja kudostuotteiden välillä.

Useissa laboratoriokokeissa tutkittiin GHK-Cu:n vaikutusta tulehduksellisiin reitteihin.

Makrofagimäisten RAW 264.7 -solujen ja Caco-2 -haimokarsinoidisolujen käyttöön perustuvissa tutkimuksissa todettiin hapetus- ja tulehdusparametrien muutoksia GHK-Cu-altistuksen jälkeen.

Ne sisälsivät reaktiivisten hapenmuodostumien tuotannon vähenemistä, glutationiin liittyvien antioksidatiivisten parametrien arvojen paranemista sekä tulehdusmediatoreiden, kuten TNF-α ja IL-6:n, muutoksia [43–47].

Tutkijat analysoivat myös signaalireittejä, jotka sisältävät ydinaineen kappa B -toksin (NF-κB) sekä p38-mytogeeneillä aktivoitunutta proteiinikinaasi p38 (p38 MAPK).

NF-κB osallistuu tulehdus-, vastustuskyky-, solujen eloonjäämisen ja stressireaktion yhteydessä olevien geenien säätelyyn.

P38 MAPK-reitti on mukana tulehdusmediatoreihin ja ympäristöstressiin liittyvissä soluherkkyysreaktioissa.

Kokeellisissa tutkimuksissa GHK-Cu on yhdistetty NF-κB p65- ja p38 MAPK-signaalointimuutoksiin.

Nämä tulokset viittaavat siihen, että yhdiste voi vaikuttaa laboratorioolosuhteissa tulehdukselliseen vasteeseen osallistuvia reittejä.

Kaikkia laajemmassa keskustelussa mainittuja tutkimuksia ei kuitenkaan arvioida suoraan GHK-Cu:ta. Osassa julkaisuista esitetään yleisiä tietoja tulehduksellisista reiteistä tai muista kokeellisista yhdisteistä.

Siksi pelkkä NF-κB:tä tai p38 MAPK:tä koskevien tutkimusten olemassaolo ei todista, että GHK-Cu aiheuttaa tiettyä anti-inflammatorista kliinistä vaikutusta.

Nämä tulokset ovat hyödyllisinä ymmärtääksemme mahdollista molekyyliyhtymää sekä tunnistamaan asioita, jotka vaativat lisätestauksia.

Kuituuntumismalleja, keuhkovaurioita ja neuroprotektiota

Kudoksen soluseinän ainesosien virheellinen kerääntyminen tai järjestäytyminen kudoksissa on kudostyviö.

Se voi kehittyä vastauksena jatkuviin vaurioihin, tulehdukseen tai muutettuun solusignaaliin.

GHK:ta tutkittiin hapenpoistumisen aiheuttavissa kudosmalleissa, koska se vaikuttaa fibroblastien aktiivisuuteen ja TGF-β:hen liittyviin reitteihin.

Blimeysiinin aiheuttaman keuhkoputkien verenvuodon mallissa tutkijat havaitsivat muutoksia kudospaksuudessa, tulehdussolujen aiheuttamaa painetta sekä epiteelimuodostelmien ja mezenhimaaliset rakenteet [48].

Tutkimuksessa analysoitiin TGF-β1/Smad-signaalia, joka on mukana solujen reaktioissa, jotka liittyvät kudosten muodostumiseen ja kiinnittymiseen.

Näiden havaintojen perusteella GHK voi vaikuttaa eläinkokeissa valittuihin lujuudenmuodostusreitteihin.

Kuitenkin kemiallisesti aiheutetulla koiran mallilla saatu vaikutus ei kuitenkaan todista tehokkuutta ihmisten keuhkoputkien tukkeutumisen hoidossa.

Biologiset mekanismeet, sairauden kulku ja kliiniset olosuhteet voivat vaihdella merkittävästi.

GHK:hen liittyvissä neurobiologisissa tutkimuksissa analysoitiin myös hapetusstressiä, tulehduksellista signaalia sekä mahdollisia vuorovaikutuksia geenien säätelyreiteillä.

Joissakin tutkimuksissa nämä mekanismit yhdistetään histoni-deacetylaasia 2:een (HDAC2), entsyymiin, joka osallistuu kromatinin säätelyyn ja geenien ekspressioon.

Kuitenkin mainittu kirjallisuus iäkkäiden hiirien muistimuutoksista ja HDAC:hen liittyvistä mekanismeista kattaa myös tutkimukset, jotka eivät vahvista suoraa vaikutusta GHK-Cu:hen [49].

Siksi väitteet, jotka koskevat kognitiivisten toimintojen parantamista, neurosyndroomien vähenemistä tai HDAC2:n suoraa säätämistä GHK-Cu:n avulla, edellyttävät selkeää eriyttämistä muiden kokeellisten interventioiden tutkimustulosten ulkopuolelle.

Saatavilla olevat todisteet oikeuttavat mekanistisiin tutkimuksiin, mutta ne eivät vahvista ihmisillä todettua neuroprotektiota.

Tutkimukset angiogeneesin ja verisuonien biologian malleissa

Angiogeneesi on välttämätön prosessi kudosten kehityksessä ja korjaamisessa.

Se sisältää uusien verisuonten muodostumisen ja edellyttää koordinoituja vuorovaikutuksia verisuonivälilevykudoksen solujen, kasvutekijöiden, epiteelisolujen ja ympäröivien kudosten välillä.

GHK-Cu tutkittiin verisuonien toimintaa ja kudosten uudistumista koskevissa kokeellisissa järjestelmissä.

Joissakin tutkimuksissa on todettu angiogeneesin yhteydessä olevien tekijöiden muutoksia, mukaan lukien VEGF ja bFGF [50, 51].

Nämä valkuaiset osallistuvat verisuonten solujen aktiivisuuteen, verisuonten kasvamiseen sekä solujen vasteeseen vaurioille.

Tutkijat analysoivat myös yhteyksiä GHK:hen liittyvien yhdisteiden ja rakenteellisten proteiinien, kuten kollageenin ja elastiinin, välillä.

Kollageeni vastaa kudosten lujuudesta, kun taas elastaani tukee niiden kykyä venyä ja palata alkuperäiseen muotoonsa.

Molemmilla proteiinilla on merkitystä verisuonten rakenteelle ja imusolmukkeiden organisoinnille.

Muutokset kasvutekijöiden ekspressiossa tai kantasolujen proteiinien synteesissä eivät kuitenkaan välttämättä merkitse verenkierron paranemista.

Funkcionalinen verisuonien kunnostus sisältää lisäprosesseja, kuten verisuonten muodostumista, kypsymistä, integraatiota ja fysiologista säätelyä.

Joissakin laajempissa verisuonien uudistamista koskevissa tutkimuksissa mainitaan myös anti-tromboottinen vaikutus ja verisuonten laajeneminen.

Nämä ovat erillisiä fysiologisia prosesseja, eikä voida olettaa, että ne johtuisivat suoraan GHK-Cu-altistuksesta ilman asianmukaista näyttöä tästä tietystä yhdisteestä.

Nykyiset tulokset ovat siis erityisen tärkeitä ensisijaisesti angiogeneesin ja verisuontojen biologian kokeelliseen tutkimukseen liittyen.

Tutkimustiedot neuronisista ja neurotrofisista malleista

Neuroneiden kehitys ja korjaaminen sisältävät kasvutekijöiden osallistumista, interaktioita solun ulkopuolisessa matriksissa, solujen siirtymistä ja neuronien poikkileikkauksen pidentymistä.

Neuritusten kasvu on yksi näytteidenäytteiden parametreistä, joita käytetään neuronien eriyttämisen ja kehityksen tutkimiseen.

Varhaisissa tutkimuksissa hermosolujen kasvuteknologian avulla tutkittiin peptiinien ja konditionoitujen ravintoaineiden vaikutusta neuronien erilaistumiseen [52, 53].

Nämä tutkimukset ovat lisänneet kiinnostusta lyhyitä peptidejä kohtaan potentiaalisina solujen toimintaa säätelevinä tekijöinä.

GHK:hen liittyviä materiaaleja on tutkittu myös kokeellisissa hermoverenkiertoa parantavissa järjestelmissä.

Yhdellä tutkimuksella otettiin käyttöön peptidi, joka tukee solujen kiinnittymistä kollageenisiin johtimiin, joita käytetään katkeavien hermien osien yhdistämiseen [54].

Tutkijat havaitsivat kasvutekijöiden ja tulehduksellisten välittäjien muutoksia, mukaan lukien hermorakenteen kasvutekijä (NGF) sekä neurotrofiinit NT-3 ja NT-4.

Lisähavaintoihin kuului aksoniemääriä ja Schwanna-solujen reaktioita.

Schwanna-solut ovat tärkeä osa hermostollista hermoverkostoa. Ne tukevat aksoneja ja osallistuvat vastauksiin hermosolujen vaurioita vastaan.

Kuitenkin kollageenisia peptidejä sisältävien johdojen avulla saatujen tulosten ei pidä automaattisesti viitata vapaasti liikkuvaan GHK-Cu-aineeseen.

Tutkittaviin vaikutuksiin voivat vaikuttaa biomateriaali, paikallinen ympäristö, peptidin esitystapa sekä käytetty kokeellinen malli.

Samoin kasvutekijöiden tai aksoneiden määrän lisääminen kokeellisessa järjestelmässä ei todista ihmisillä toiminnallista neurologista paranemista.

Näitä tutkimuksia on parasta tulkita peptidejä ja neurotrofista signaalointia sisältävien biomateriaalien analyyseinä.

Geneettinen säätely ja emättimen uudelleenrakentaminen

Geneksen tutkimukset ovat tulleet tärkeäksi osaksi tieteellistä keskustelua GHK:sta ja GHK-Cu:sta.

Varhaiset kokeilut keskittyivät haavaumien aiheuttamiin soluherkkyyksiin, mukaan lukien fibroblastien toimintaan, kollageenin tuotantoon ja soluseinän rakenteeseen [55, 56].

Myöhemmät Maquarten ja kollegoiden tutkimukset analysoivat GHK-Cu:n vaikutusta kollageenin synteesiin sekä munasarjan kanssa liitettyihin molekyyleihin [57–59].

Kokeissa, joissa käytettiin fibroblastien kasvuteknologiaa, todettiin kollageenituotannon muutoksia pieninä pitoisuuksina.

Muissa tutkimuksissa analysoitiin sakkaroosin glukosamiiniglykoideja ja pieniä proteoglikaneja.

Nämä hiukkaset osallistuvat solun ulkopuolisen kudoksen organisointiin, nesteen säilyttämiseen, mekaanisten ominaisuuksien muokkaamiseen sekä solujen ja ympäröivien kudosten välisiin vuorovaikutuksiin.

GHK-Cu on myös yhdistetty munasolujen metalloproteinaasien ekspressiotapahtumiin, mukaan lukien MMP-2 [59].

Tämä on tärkeää, koska soluseinän säilyttäminen edellyttää sekä kontrolloitua hajoamista että synteesiä.

Pelkkä kollageenin tuotannon lisääminen ei todista kudosten järjestymisen parantumista.

Samoin MMP:n lisääntyneen aktiivisuuden vuoksi voi esiintyä erilaisia seurauksia riippuen kudoksen tyypistä ja biologisesta kontekstista.

Tutkimukset siis viittaavat siihen, että GHK-Cu voi vaikuttaa munasarjojen muutoksiin useiden yhteisvaikutuksessa olevien reittien kautta.

Näiden havaintojen mukaan ei kuitenkaan ole todisteita paranemisesta ilman arpeutumista eikä ennakoitavasta kudosten uudistumisesta ihmisissä.

Lisäelämissä todettiin muutoksia sellaisissa molekyyleissä kuin dekoryna, dermatanin siirakki ja kondroitiinisiirakki [60].

Dekoryna on pieni proteoglikani, joka liittyy kollageenin organisointiin ja soluseinän säätelyyn.

Dermatan- ja kondroitiinisuolaiset glukosamiiniglikanoidit vaikuttavat nivelten rakenteeseen ja ominaisuuksiin.

Heidän ekspressiokykynsä tai synteesiensä muutokset antavat tietoa emon metabolismista.

Neuvottavat kuitenkaan itsenäisesti kudosten lujuuden, ulkonäön tai hoitotulosten paranemista.

Integrityn ilmentäminen ja ihonpohjan solujen tutkimus

Keratocyytit ovat ihohuokosten hallitsevana solutyypinä.

Ne ovat mukana kehittämässä ihoestettä, solun erilaistumista sekä vastauksia kudosvahinkoihin.

Seoul National Universityn tutkijat tutkivat kupariproteiini GHK:n vaikutusta integriinin ilmentymään sekä positiivista p63-ilmentymää osoittavien solujen esiintymiseen keratinoideissa [61].

Integrinit osallistuvat solujen kiinnittymiseen ja solun ulkopuolisen verkon kanssa käytävään kommunikaatioon.

P63-proteiini on yhteydessä limakalvon kehittymiseen ja tiettyjen limakalvon solukantojen säilymiseen.

Tutkimuksessa todettiin integriinin ekspressiota lisääntyneenä ja p63-arvoltaan positiivisten solujen osuuden suurempana kuparipeptidi GHK:lle altistumisen jälkeen.

Nämä havainnot viittaavat mahdolliseen vaikutukseen ihon suojaavan kerroksen säilyttämiseen liittyvissä soluominaisuuksissa.

Tätä merkkiaineiden muutoksia ei kuitenkaan yksinään osoita lisääntyneestä ihon uudistumisesta ihmisillä.

Tulokset pysyvät rajoittuneina käytettyihin soluversioihin ja analysoituihin parametreihin.

Suurimittainen geenipohjaisen profiloinnin kehittäminen

Koneelliset menetelmät ovat parantaneet mahdollisuuksia analysoida eri yhdisteiden vaikutusta geenien ilmentymisverkkoihin.

Connectivity Map, usein lyhennetään cMapiksi, on tutkimusaineisto, jota käytetään vertaamaan geneettisiä ekspressio-malleja, jotka liittyvät biologisiin tilaan ja kemikaaliresistenttiin.

MANTRA mukaan lukien liittyvät tietokoneohjelmat on käytetty tutkimaan yhteyttä suhteiden ja transkriptioiden vastausten välillä [62, 63].

GHK käsiteltiin tässä yhteydessä sen vuoksi, että sillä on yhteys laajoihin muutoksiin geenien ilmentymämuodoissa.

Yhdellä analyysistä todettiin 268 geenin lisääntyvää ekspressiota ja 167 geenin vähentävää ekspressiota.

Muissa tutkimuksissa GHK:ta on yhdistetty muutoksiin, jotka koskevat useampia geenien ja reittien määrää [9, 62–64].

Nämä tulokset viittaavat siihen, että GHK:hen liittyvät vastaukset voivat koskea useita biologisia järjestelmiä eikä pelkästään yhtä molekyylitarkoitusta.

Tietojen kerääminen geenien ilmentymistä koskien edellyttää kuitenkin varovaisuutta tulkinnassa.

RNA-aineen (mRNA) tietomäärän muutos ei välttämättä johda vastaavaan proteiinipitoisuuden tai biologisen toiminnan muutokseen.

Geenien ilmentymismuodot riippuvat myös solutyypistä, altistusolosuhteista, mittausmenetelmistä ja analyysipuitteista.

Siksi tiettyyn yhdisteen kanssa yhdistettyjen geenien lukumääriä ei pidä pitää suoranaisenä mittana sen terapeuttisesta vaikutuksesta.

Koneelliset ennusteet ovat arvokkaita hypoteesien muotoilussa, mutta ne vaativat todentamista kokeellisesti.

Neuroprotektion yhteydessä olevat geeniverkostoja

Kirjallisuudessa GHK:sta käsitellyissä geenien ilmentymän analyyseissä on tunnistettu muutoksia, jotka koskevat neuronien toimintaa, solujen eloonjäämistä ja kehityssignaaleja.

Esimerkkejä ovat SIGMAR1, EPM2A, NAIP, FGFR2 ja SLIT2 [65].

Nämä geenit osallistuvat erilaisiin biologisiin prosesseihin.

SIGMAR1 koodaa sigma-1-reseptoria, proteiinia, joka osallistuu solun signaalointiin ja stressireaktioihin.

EPM2A on sidottu laforiinille, proteiiniin, joka on tärkeä glukoogeenin metaboliaa varten.

NAIP osallistuu solujen eloonjäämiseen ja immuniteettiin liittyviin reiteihin.

FGFR2 koodaa fibroblastien kasvutekijän signaalointiin osallistuvaa reseptoria.

SLIT2 osallistuu solujen suuntautumisen ja siirtymisen yhteydessä tapahtuvaan kehitysprosessiin.

Näiden geenien merkitys hermostojärjestelmän biologiassa herätti mielenkiintoa niiden mahdollisen yhteyden vuoksi GHK:n aiheuttamiin transkriptiovasteisiin.

Tuttavien GHK:n kanssa liittyvän datasarjan geenin läsnäolo ei kuitenkaan todista, että GHK hallitsee tätä geenin toimintaa suoraan kaikissa biologisissa ympäristöissä.

Se ei myöskään todista, että GHK estää dementian tai parantaa neurologisia toimintoja.

Mainitut tutkimukset näiden geenien osista tarjoavat laajemman biologisen kontekstin eikä suoria todisteita GHK-Cu:n vaikutuksesta.

Siksi näitä tuloksia on ymmärrettävä havaintoina, jotka palvelevat geenien regulointia ja neurobiologiaa koskevien hypoteesien laatimista varten.

Epigenetisten tutkimusten ja HDAC-reiteillä tapahtuvien tapahtumien tulokset

Epigenetinen säätely käsittää geenien aktiivisuuden muutoksia, jotka eivät edellytä perus-DNA-sekvenssin muuttamista.

Yksi tärkeistä mekanismeista on histonien muuttaminen.

Histonit ovat proteiineja, joihin DNA on järjestetty. Heidän kemialliset muunnelmansa voivat vaikuttaa tiettyjen DNA-alueiden saatavuuteen transkriptiojärjestelmässä.

Histon deacetylases (HDAC) poistavat aktiiviset ryhmät histonien ja muiden proteiinisubstraattien sisältä.

Heidän aktiivisuutensa voi vaikuttaa kromosomien rakenteeseen ja geenien ilmentymiseen.

GHK käsiteltiin HDAC-yhteyksissä olevien reittien kontekstissa laajempien havaintojen vuoksi, jotka koskivat geeniregulaatiota ja ikään liittyviä transkriptio-muutoksia [66, 67].

Kuitenkin mainitut tutkimukset HDAC:sta ja epigenemisesta vanhenemisesta tarjoavat ennen kaikkea yleisiä tietoja näistä biologisista prosesseista.

Neuvovat itsessään, että GHK-Cu on kliinisesti todistettu HDAC-inhibiittori.

Samoin geenien ilmentymismuotojen muutoksia ei pidä automaattisesti pitää epigenetisen vanhenemisen käänteinä.

HDAC-inhiboitavasta vaikutuksesta kertova suora väite edellyttää kokeita, jotka osoittavat vaikutuksen näiden entsyymien aktiivisuuteen tiettyjen olosuhteiden mukaisesti.

Aikuistumisen hidastamista koskevat väitteet edellyttävät lisäesineitä, jotka yhdistävät molekyylitestit olennaisiin biologisiin tuloksiin.

Liitokset GHK:n ja kromosomireagenssin säätelyn sekä ikääntymiseen liittyvän geenien ekspressiolla jäävät siis jatkotutkimuksen kohteeksi.

GHK-Cu -aineiden laatu ja tutkimusmateriaalien analysointi tieteellisiin tarkoituksiin

GHK-Cu:n analyyttinen kuvaus on tärkeä, koska tutkimustulokset riippuvat analysoitavan materiaalin identiteetistä, koostumuksesta ja laadusta.

Valmistetta, jota kutsutaan nimellä GHK-Cu, olisi arvioitava menetelmillä, jotka mahdollistavat peptidiyhdisteen luonteen määrittämisen ja todisteiden tuottamisen sen messiläisestä muodosta.

Laadun tutkimus voi sisältää kromatografiaa, massaspektrometriä, metallipitoisuuden analysointia sekä muita analyysitapoja, jotka valitaan tietyn analyysitarkoituksen mukaan.

Mikään yksittäinen rutiinitesti ei kuitenkaan vahvista kaikkia olennaisia laadullisia parametrejä.

Kromatografia nestekemikaalilla yhdistettynä massaspektrometriaksi

Kromatografia nestemäinen yhdistetty massaspektrometriaksi (LC-MS) yhdistää kromatografisen erottelun massamittauksen perusteella tapahtuvaan tunnistamiseen.

Chromatografinen osa mahdollistaa näytteen sisältämien yhdisteiden erottelun.

Massaspektrometri antaa tietoja joneista niiden massa- ja pulssikulma-suhteen perusteella.

LC-MS voi tukea peptidin tunnistamista havainnoimalla molekyylijyviä, jotka vastaavat odotettua yhdistettä.

Käytetyn menetelmän mukaan lisätiedot fragmentoinnista voivat auttaa peptidiperäisen sekvenssin määrittelyssä.

Kuitenkin GHK:n mukaisten molekyylimassojen havainto ei yksinään vahvista kaikkia hiukkasten rakennetta koskevia näkökohtia.

Samoin hopean kanssa sidoksissa olevaan muodon läsnäolon mukaisia signaaleja ei tarvitse osoittaa täydelliseen koordinointigrafiikkaan eikä kaikkia vaihtoehtoisia komplekseja voi sulkea pois.

Meidän on mahdollista, että kuparipitoisuuden määrittämiseen tarvitaan lisätutkimuksia sopivien spektroskopisten menetelmien tai metallipitoisuuden analyysin avulla.

LC-MS on siis arvokas analyysimenetelmä, mutta saatujen päätelmien luotettavuus riippuu menetelmästä, vertailumalleista, näytteen valmistelusta sekä täydentävistä todisteista.

Erittäin tehokas nestekromatografia ja puhtaus

Nopea nestekromatografia (PLHPLC) on yleisesti käytetty menetelmä peptidiliuosten komponenttien erottamiseen.

Se voi auttaa tunnistamaan synteesiin, hajoamiseen tai muihin tuotantoprosesseihin liittyviä epäpuhtauksia.

Kromatografisen puhdistustuloksen perustana on yleensä suhteelliset signaalit, jotka todetaan tiettyjen analyysiolosuhteiden mukaisesti.

Kuitenkin kromatografinen puhtaus ei ole sama asia kuin kemiallinen identiteetti, peptidipitoisuus, messinkikompleksin stoehimiometri tai materiaalin yleinen laatu.

Esimerkiksi 98 prosentin ilmoitettu puhtaus ei kuitenkaan tarkoita, että näytteen kokonaismassasta 98 prosenttia muodostaa oikein muodostunutta GHK-Cu-kompleksia.

Tulkinta riippuu käytetystä analyysimenetelmästä ja tuloksen laskutavasta.

Kromatogrammi ei myöskään vahvista steriiliyttä, endotoksiinien pitoisuutta tai kaikkien mahdollisten epäpuhtauksien puuttumista.

Lähdeaineistossa kuvataan vähintään 98 prosentin puhdistustasoa koskevaksi ilmoitettu spesifikaatio tietyille tutkimusvalmisteille.

Tällaisen eritelmän on pidettävä toimittajan ilmoituksenä, ellei se tue käytettävissä olevaa analyyttistä dokumentaatiota tietystä erästä varten.

Suodatus, steriiliys ja kiinteiden hiukkasten kontrollointi

Lähteetartikkelissa kuvataan 0,22 mikrometriä olevien vuorauskuitumateriaalien suodatus 0,22 mikrometriä olevien vuorauskuitumateriaalien suodatusmenetelmänä materiaalin valmistusprosessin osana.

Membrantäytteen suodatus voi olla hyödyllistä tiettyjen mikrobiologisten epäpuhtauksien rajoittamiseen, jos käytettävä menetelmä ja olosuhteet ovat sopivat.

Tuttavien 0,22 mikrometrien suodattimen läpi kulkeva liuotin ei kuitenkaan itsessään vahvista lopputuotteen steriilisuutta.

Sterilisyys varmistetaan koko prosessin kautta, mukaan lukien laitteet, ympäristö, suodattimen kunto, materiaalin käsittelymenetelmät ja validoidut valvontamenettelyt.

Suodatus ei myöskään tarvitse poistaa endotoksiineja, liuenneita kemiallisia epäpuhtauksia tai kaikkia muotoja olevia epäpuhtauksia kiinteiden hiukkasten muodossa.

Siksi väitteet steriilitävyydestä tai tarkoitukseen soveltuvuudesta tietyille tutkimustarkoituksille edellyttävät asianmukaisia testejä ja dokumentaatiota, eikä niitä voida perustella pelkästään suodatinhiukkasten määrällä.

Hyvä laboratoriotyöskentely ja dokumentointi

Hyvä laboratoriotutkimustapa (GLP) on laadunhallintajärjestelmä, joka liittyy tiettyjen ei-kliinisten tutkimusten organisointiin, suorittamiseen, seurantaan, dokumentointiin ja raportointiin.

Vakuutus siitä, että menettelyt ovat GLP-periaatteiden mukaisia, ei välttämättä tarkoita GLP-vaatimusten täyttymistä tai asianmukaista sertifiointia.

Tämän ilmoituksen merkitys riippuu konkreettisista menettelyistä, dokumentaatiosta ja käytössä olevasta laadunhallintajärjestelmästä.

Tutkimusaineistoon voi liittää myös analyysisertifikaatin (Certificate of Analysis, COA).

COA sisältää yleensä valitut analyysitulokset tietystä erästä.

Tärkeä tieto voi sisältää henkilöllisyyden tarkastelua, puhtausmittauksia, aineiden pitoisuuden määritystä, käytettyjä analyysimenetelmiä, osien tunnistimia sekä muita eritelmien parametreja.

COA:n informaatiomäärä riippuu kuitenkin sen laatimisen perusteena olevista menetelmistä ja tiedoista.

Itsessään sertifikaatti ei todista, että aine sopii ihmisten antamiseen, kosmeettiseen tai terapeuttiseen käyttöön.

Myös analyyttinen puhtaus ei vahvista biologista tehoa eikä kliinistä turvallisuutta.

Tutkimuksissa laadullisen dokumentoinnin on oltava erityisen hyödyllistä, yksityiskohtainen, tunnistettavissa ja riittävän täydellinen, jotta analyysitulosten oikea tulkinta on mahdollista.

Lisätietoja tuottajien, toimittajien, laatuselostusten ja eräasiakirjojen erottelusta on artikkelissa Peptidi-tuottajat ja -toimittajat.

Yhteenveto

GHK-Cu on luonnossa esiintyvä kupariproteiini-, tripeptidikompleksi, jota tutkitaan yli viiden vuosikymmenen ajan.

Sen molekyylirakenteensa, messinkiin sitoutumiskykyynsä ja vuorovaikutukseensa solujärjestelmien kanssa ansiosta se on tullut tärkeäksi aiheen peptidibiologian, epiteelin biologian, hapetusstressin ja geenien reguloinnin tutkimuksessa.

Kokonaisuus muodostuu glykoli-L-histidioli-L-lysyneistä ja kuparista (II). Struktuuritutkimukset auttoivat tunnistamaan typpipaikkoja, jotka osallistuvat kuparin sitoutumiseen ja vaikuttavat molekyylin kemiallisiin ominaisuuksiin.

Nämä ominaisuudet ovat perusta analysoida metallijyväiden lyhyiden peptiinien vaikutuksia sekä koordinointikemian vaikutusta biologisiin prosesseihin.

Kokeellisissa tutkimuksissa todettiin kollageenin synteesin muutoksia, glykoproteiinien tuotantoa, kudosproteiinien ekspressiota, integraasin signaalointia, tulehdusmediatoreita sekä antioksidatiivista suojaa koskevia parametreja.

Lisätutkimuksiin sisältyivät vastaukset GHK:hen fibroblastien kasvatusmenetelmissä, haavamalleissa, keuhkojen vaurioita koskevissa kokeissa, hermosoluissa sekä peptidejä sisältävissä biomateriaaleissa.

Käyttötekniikan analyysit yhdistivät myös GHK:n laajaviivoituneisiin muutoksiin geenien ekspressiotietokannassa.

Näiden havaintojen tieteellinen merkitys riippuu kuitenkin kokeellisen kontekstin mukaan.

Genien ilmentymien muutokset eivät välttämättä johda proteiinien aktiivisuuden muutoksiin.

Kasvaneen kollageenin tuotanto ei välttämättä tarkoita kudosten rakenteen parantumista.

Vakavien tulehdusmerkkiaineiden muutokset eivät ole itsenäinen kliininen näyttö tulehdusta ehkäisevästä vaikutuksesta.

Samoin tutkimustulokset, jotka kattavat syöpäsolulajeja, keuhkoputkien kiinnitysmalleja ja neuronien kasvatusmenetelmiä, eivät osoita tehokkuutta ihmisissä vastaavien sairauksien hoidossa.

Kirjallisuudessa on myös merkittäviä eroja GHK:n ja GHK-Cu:n välillä sekä välittömästi kyseistä yhdistettä koskevien kokeiden ja tutkimusten välillä, jotka tarjoavat vain yleistä biologista kontekstia.

Nämä erot on säilytettävä mekanismien toimintaa ja ehdotettuja käyttökohteita koskevassa tulkinnassa.

Toinen tärkeä asia on analyyttinen laatu. LC-MS- ja HPLC-tekniikat voivat tuottaa arvokasta tietoa identiteetistä ja puhtaudesta, mutta ne eivät itsessään vahvista kaikkia valmisteen rakenteellisia, mikrobiologisia ja biologisia ominaisuuksia.

Yleisesti ottaen GHK-Cu on hyödyllinen työkalu kuparin koordinaatiota, solun signaalointia, solun ulkoporeaalisen metabolian sekä hapetusstressin vastauksia koskevissa molekyylitutkimuksissa.

Sen tunnetut kemialliset ominaisuudet ja laajennettu ennakkotutkimustieto muodostavat perustan jatkotutkimuksille. Toisaalta kliinisen tehokkuuden ja turvallisuuden osalta vaaditaan erillisiä, asianmukaisesti valvottuja ihmishenkilöitä koskevia tutkimuksia.

Vastuuvapauslauseke

Tämä artikkeli on tarkoitettu yksinomaan koulutukseen ja tieteelliseen tiedottamiseen. Siinä esitetään tutkimuksia GHK-Cu:n molekyylirakenteesta, kuparin koordinaatiosta, biologisista mekanismeista, analyyttisista ominaisuuksista ja kokeellisista sovelluksista.

Se ei ole lääketieteellistä neuvoa eikä suosittele GHK-Cu:n käyttöä ihmisillä tai eläimillä, eikä se määrää hoitosuunnitelmia eikä tue mitään diagnostista, terapeuttista tai kosmeettista käyttöä.

Kuitukudoksissa saatuja tuloksia, eläinkokeita, tietokoneanalyysejä ja biokemiallisia tutkimuksia ei pidä tulkita kliinisen tehokkuuden tai ihmisille turvallisuuden todisteeksi.

Analyyttisen puhtauden, tutkimusluokan materiaalien, analyysitodistusten tai laboratoriokokeiden tiedot eivät todista, että kyseinen valmiste soveltuu ihmisten käyttöön tai mihin tahansa muuhun säädöksillä säädettyyn käyttöön.

Kaikki lääketieteelliset päätökset olisi tehtävä asianmukaisesti koulutetun terveydenhuollon ammattilaisen toimesta asianmukaisten kliinisten todisteiden ja voimassa olevien sääntöjen perusteella.

Viitteet

1. Pickart L. A Tripeptidi ihmisveren seerumista, joka parantaa kasvutekijöiden tuotantoa ja normalisoi hepatosyyttien eloonjäämistä. San Francisco, Kalifornia, Yhdysvallat: Kalifornian yliopisto; 1973.
2. Pickart L., Freedman J. H., Loker W. J., et al. Kasvua moduleva plasma-tripeptidi saattaa toimia helpottamalla kuparin ottumista soluissa. Nature. 1980;288(5792):715–717. doi: 10.1038/288715a0.
3. Pickart L. GHL-Cu:n käyttö haavan paranemiseen ja tulehdusta ehkäisevänä aineena. 1988, http://www.freepatentsonline.com/4760051.html.
4. Downey D., Larrabee W. F., Jr., Voci V., Pickart L. Haavan paranemisen nopeutuminen glysylihistidiinikuplivetyyli-lyysiinikuplivetyylillä (II) Surgical Forum. 1985;25:573–575.
5. Pickart L. Iamin: ihmisen kasvutekijä, jolla on useita haavojen paranemista edistäviä ominaisuuksia. Toim. Sorenson J.: Copper Complexes Biology. Clifton, NJ, USA: Humana Press; 1987. s. 273–285.
6. Meiners S., Eickelberg O. Uuden sukupolven henkilökohtainen lääketutkimus: tripeptidi GHK nousee esiin kroonisen obstruktiivisen keuhkosairauden yhteydessä. Genome Medicine. 2012;4(8, artikkeli 70) doi: 10.1186/gm371.
7. Hong Y., Downey T., Eu K. W., Koh P. K., Cheah P. Y. ‘Metastasis-prone’ -merkki varhaisvaiheen epätasapainon korjausta osaavan sporadickolorektaalikarsinomaattisen potilaan kohdalla ja sen merkitykset mahdolliselle hoitokeinolle. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
8. Gruchlik A., Jurzak M., Chodurek E. W., Dzierzewicz Z. Gly-Gly-His-, Gly-His-Lys- ja niiden kuparikompleksien vaikutus TNF-α-riippuvaiseen IL-6-erittymään normaaleissa ihmisen ihon fibroblasteissa. Acta Poloniae Pharmaceutica. 2012;69(6):1303–1306.
9. Pickart L., Vasquez-Soltero J. M., Margolina A. GHK ja DNA: ihmisen genomin palauttaminen terveyteen. BioMed Research International. 2014;2014:10. doi: 10.1155/2014/151479.151479
10. Wegrowski Y., Maquart F. X., Borel J. P. Sulfaattisidoksin glykosaminoglykaanin synteesin stimulaatio tripeptidi-kuparikompleksillä Glycyl-L-histidyl-L-lysin-Cu2+. Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
11. Siméon A., Emonard H., Hornebeck W., Maquart F.-X. Tripeptidi-kuparikompleksi glycyl-L-histidyl-L-lysin-Cu2+ stimuloi matriksimetallo-proteinaasi-2-aineenvaihduntaa fibroblastikulttuureissa. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
12. Ehrlich H. Ihon parantumisen stimulaatio immunosuppressioalttiissa rotissa. Proceedings of the Symposium on Collagen and Skin Repair; syyskuu 1991; Reims, Ranska.
13. Siméon A., Wegrowski Y., Bontemps Y., Maquart F.-X. Glykosaminoglykaaneja ja pieniä proteoglikaanijohdannaisia haavissa: tripeptidi-kuparikompleksin glycyl-L-histidiini-L-lysiini-Cu2+-komponentin modulaatio . Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
14. McCormack M. C., Nowak K. C., Koch R. J. Kuprikitripepidiinin ja tretinoiinin vaikutus kasvutekijän tuotantoon seerumivapaassa fibroblastimallissa. Archives of Facial Plastic Surgery. 2001;3(1):28–32.
15. Buffoni F., Pino R., Dal Pozzo A. Tripeptidit-kupukompleksien vaikutus ihon haavauden paranemisprosessiin ja viljellyille fibroblasteille. Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie. 1995;330(3):345–360.
16. Gul N. Y., Topal A., Cangul I. T., Yanik K. Topiakiinteen kuparikompleksin ja helium-neonilaserin vaikutukset haavan paranemiseen kaneissa. Veterinary Dermatology. 2008;19(1):7–14. doi: 10.1111/j.1365-3164.2007.00647.x.
17. Cangul I. T., Gul N. Y., Topal A., Yilmaz R. Topical tripeptide-copper complex ja sinkkioksidin vaikutusten arviointi avonaisen haavan paranemisessa kaneissa. Veterinary Dermatology. 2006;17(6):417–423. doi: 10.1111/j.1365-3164.2006.00551.x.
18. Pickart L. Kupari(II) -yhdisteitä sisältävän liuoksen käyttö tapa on nopeuttaa haavan paranemista. 1992, http://www.freepatentsonline.com/5164367.html.
19. Arul V., Kartha R., Jayakumar R. Diabeettisen haavan paranemista parantava terapeuttinen lähestymistapa biotiinilasiertynnyksillä varustettujen kollageenimatriisien avulla. Life Sciences. 2007;80(4):275–284. doi: 10.1016/j.lfs.2006.09.018.
20. Canapp S. O., Jr., Farese J. P., Schultz G. S. ym. Topical tripeptide-copper-kompleksin vaikutus iskeemisten avoimien haavojen paranemiseen. Veterinary Surgery. 2003;32(6):515–523. doi: 10.1111/j.1532-950X.2003.00515.x.
21. Swaim S. F., Vaughn D. M., Kincaid S. A., ym. Paikallisesti injisoitujen lääkkeiden vaikutus tassuhoidon haavojen paranemiseen koirilla. American Journal of Veterinary Research. 1996;57(3):394–399.
22. Campbell J. D., McDonough J. E., Zeskind J. E. ym. Emfyemian aiheuttaman keuhkohäviön geenitekijä ja sen palautuminen tripeptidi GHK:n vaikutuksesta. Genome Medicine. 2012;4, artikkeli 67 doi: 10.1186/gm367.
23. Boo S., Dagnino L. Integrins beta-muuntelutekijän modulaattoreina ihon fibroblastien toiminnassa ihohaavan paranemisen aikana. Advances in Wound Care. 2013;2(5):238–246. doi: 10.1089/wound.2012.0394.
24. Lubick K., Radke M., Jutila M. Securinine, a GABAA-reseptorin estäjä parantaa fasa II C. burnetii -infektion haploosin hävittymistä makrofagien välityksellä: vertailu TLR-agonisteihin. Journal of Leukocyte Biology. 2007;82(5):1062–1069. doi: 10.1189/jlb.0407255.
25. Matalka L. E., Ford A., Unlap M. T. Tripeptidi GHK aiheuttaa SH-SY5Y-neuroblastoma-solujen ohjattuja solukuolemia. Journal of Biotechnology & Biomaterials. 2012;2, artikkeli 144 doi: 10.4172/2155-952X.1000144.
26. Pollard J. D., Quan S., Kang T., Koch R. J. Kuprikitripeptidin vaikutus kasvutekijöiden kasvukäyttäytymiseen ja ilmentymiseen normaaleilla ja säteilytyneillä fibroideilla. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
27. Jose S., Hughbanks M. L., Binder B. Y. K., Ingavle G. C., Leach J. K. Hyödyntäminen trofisten tekijöiden erittymisessä meesenkymfasolujen ja -stratosolujen avulla glysiini-histidiini-lysiiniä (GHK)-modifioidulla alginaattihydrogelillä. Acta Biomaterialia. 2014;10(5):1955–1964. doi: 10.1016/j.actbio.2014.01.020.
28. Lau S. J., Sarkar B. Kupari(II) ja glysyl-L-histidiyl-L-lyysiinien vuorovaikutus, kasvua moduleva polttimolekyyli plasmasta. Biochemical Journal. 1981;199(3):649–656. doi: 10.1042/bj1990649.
29. Perkins C. M., Rose N. J., Weinstein B., Stenkamp R. E., Jensen L. H., Pickart L. Kuparikompleksin rakenne kasvutekijäglycyl-L-histidiini-L-lyysiinissä resoluutiolla 1,1 Å:ssa. Inorganica Chimica Acta. 1984;82(1):93–99. doi: 10.1016/s0020-1693(00)82544-x.
30. Freedman J. H., Pickart L., Weinstein B., Mims W. B., Peisach J. Glycyl-L-histidyl-L-lysine-kupari(II)-kompleksin rakenne liuoksessa. Biochemistry. 1982;21(19):4540–4544. doi: 10.1021/bi00262a004.
31. Pickart L., Lovejoy S. Ihmisen plasmassa olevan kuparin sitova kasvutekijä glycyl-l-histidiiniin liittyvä biologinen aktiivisuus. Methods in Enzymology. 1987;147:314–328. doi: 10.1016/0076-6879(87)47121-8.
32. Beretta G., Arlandini E., Artali R., Anton J. M. G., Maffei Facino R. Endogeenisen tripeptidin glycyl-histidyl-lyysini (GHK) -molekyylin akroleiinin erottelukyky: konjugaattien luokittelu ESI-MSn-menetelmällä ja teoreettisilla laskelmillä. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
33. Godet D., Marie P. J. Tripeptidi glycyl-L-histidyl-L-lysine copper complexin vaikutukset osteoblastisten solujen leviämiseen, kiinnittymiseen ja fenotyyppiin. Cellular and Molecular Biology (Noisy-le-Grand, Ranska) 1995;41(8):1081–1091.
34. Kawase M., Miura N., Kurikawa N., ym. Tripepridiin liittyvän kasvutekijän glycyl-L-histidiini-L-lyysiinimuodostumisen immobilisointi poly(vinylalkoholilla) -kvartarisoituneessa stilbaaloksella (PVA-SbQ) ja sen käyttö hepatosyyttien kiinnittymisen ligandina. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 1999;22(9):999–1001. doi: 10.1248/bpb.22.999.
35. Lutsenko S, Bhattacharjee A, Hubbard AL. Aivojen kuparinkäsittelylaitteet. Metallomics. 2010;2(9):596–608. doi: 10.1039/c0mt00006j.
36. Hawk SN, Lanoue L, Keen CL, Kwik-Uribe CL, Rucker RB, Uriu-Adams JY. Kuparipuutuneiden rotan alkioiden ominaisuuksiin kuuluu matala superoksidi-dismutaasi-aktiivisuus ja kohonneet superoksidi-anionit. Biology of Reproduction. 2003;68(3):896–903. doi: 10.1095/biolreprod.102.009167.
37. Bayer TA, Schäfer S, Simons A, ym. Ravintolisä Cu stabiloi aivojen superoksididisfosforylaasi 1 -aktiivisuutta ja vähentää APP23-transgeniä käyttävillä hiirillä amyloid Aβ-tuotantoa. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2003;100(24):14187–14192. doi: 10.1073/pnas.2332818100.
38. Arul V, Gopinath D, Gomathi K, Jayakumar R. GHK-peptidi yhdistettynä kollageeniseen matriisiin: uusi biomateriaali ihon haavojen paranemiseen rotilla. Journal of Biomedical Materials Research. 2005;73(2):383–391. doi: 10.1002/jbm.b.30246.
39. Miller DM, DeSilva D, Pickart L, Aust SD. Glycyl-histidyl-lysylin keltarutettu C(II)-ionien vaikutus ferritiinille riippuvaan lipidipöhöilyyn. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1990;264:79–84. doi: 10.1007/978-1-4684-5730-8_11.
40. Alberghina M, Lupo G, La Spina G, ym. Kupari(II)-kompleksien suojaava vaikutus etanolin aiheuttamaan vaurioon rotan mahahaavan seinämässä. Journal of Inorganic Biochemistry. 1992;45(4):245–259. doi: 10.1016/0162-0134(92)84013-d.
41. Beretta G, Artali R, Regazzoni L, Panigati M, Facino RM. Glycyl-histidyl-lysine (GHK) on α,β-4-hydroksy-trans-2-nonenalin estäjä: vertailu karnosiinille. Insights into the mechanism of reaction by electrospray ionization mass spectrometry, 1H NMR, and computational techniques. Chemical Research in Toxicology. 2007;20(9):1309–1314. doi: 10.1021/tx700185s.
42. Beretta G, Arlandini E, Artali R, Anton JM, Maffei Facino R. Akroleiinin sitoutumiskyky endogeenisellä tripeptidi glycyl-histidyl-lyysinä (GHK): konjugaattien luonne tutkimalla ESI-MSn-menetelmällä ja teoreettisilla laskelmillä. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
43. Park JR, Lee H, Kim SI, et al. Tripeptidit GHK-Cu-kompleksi parantaa hiirissä lipopolysakkaridiin perustuvaa akuuttia keuhkotapahtumaa. Oncotarget, 2016, 7(36): 58405.
44. Gao M, Chen L, Yu H, et al. Diosgenin alentaa NF-κB p65/p50- ja p38MAPK-reittejä ja lieventää lipopolysakkaridilla aiheutunutta akuuttia keuhkoverkkoa vaurioitunutta koirarodun rotua. International immunopharmacology, 2013, 15(2): 240–245.
45. Liu T, Zhang L, Joo D, et al. NF-κB-signaalointi tulehduksessa. Signaalinkäsittely ja kohdistettu hoito, 2017, 2(1): 1–9.
46. Kaminska B. MAPK-signaaliteitä anti-inflammatorisen hoidon molekyylitavoitteina – molekyylimekanismeista terapeuttisiin hyötyihin. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Proteins and Proteomics, 2005, 1754(1–2): 253–262.
47. Yong HY, Koh MS, Moon A. P38 MAPK-estäjät tulehduksellisten sairauksien ja syövän hoidossa. Asiantuntijatutkimus tutkimuslääkkeistä, 2009, 18(12): 1893–1905.
48. Zhou XM, Wang GL, Wang XB, et al. GHK-peptidi estää bleomyybiinia aiheuttamaa keuhkopussin fibroosia hiirissä estämällä TGFβ1/Smad-välitteistä epiteeli-myelooma-muutosta. Frontiers in Pharmacology, 2017, 8: 904.
49. Mukherjee K, Lee A, Zhu L ym. Vanhenevien hiirien unenpuute aiheuttama kognitiivinen heikkeneminen lievittyy rapamysiinin vaikutuksella. Aging Pathobiology and Therapeutics, 2019, 1(1): 05–09.
50. Kalaria RN. Aivoveritulon perusta: heikentyneet hallintajärjestelmät ja dementian riskitekijät. Nutrition Reviews. 2010;68(supplement 2):S74–S87. doi: 10.1111/j.1753-4887.2010.00352.x.
51. Pollard JD, Quan S, Kang T, Koch RJ. Kuprikitripeptidin vaikutus kasvutekijöiden kasvukuntoon ja ilmentymiseen normaaleilla ja säteilytyneillä fibroideilla. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
52. Sensenbrenner M, Jaros GG, Moonen G, Meyer BJ. Eteerillä varustetun median vaikutus hermosolujen erilaistumiseen. Experientia. 1980;36(6):660–662. doi: 10.1007/BF01970123.
53. Lindner G, Grosse G, Halle W, Henklein P. Syntetisen tripeptidin vaikutus hermosoluihin, jotka on kasvatettu in vitro. Zeitschrift für Mikroskopisch-Anatomische Forschung. 1979;93(5):820–828. (Ger).
54. Ahmed MR, Basha SH, Gopinath D, Muthusamy R, Jayakumar R. Kasvutekijöiden ja tulehdusmediatoreiden alkuvaiheellinen lisääntyvä tuotanto hermosolujen uudistumisen aikana solujen liimaavaan peptideen sisältämien kollageeniputkien yhteydessä. Journal of the Peripheral Nervous System. 2005;10(1):17–30. doi: 10.1111/j.1085-9489.2005.10105.x.
55. Pickart L. GHL-Cu:n käyttö haavan paranemiseen ja tulehdusta ehkäiseviin tarkoituksiin. Yhdysvaltain patentti nro 4 760 051, heinäkuu 1988.
56. Downey D, Larrabee WF, Voci V, Pickart L. Haavan paranemisen nopeutuminen glysylihistidiyli-lysyylikuionin (II) avulla Surgical Forum. 1985;36:573–575.
57. Maquart FX, Pickart L, Laurent M, Gillery P, Monboisse JC, Borel JP. Tripeptidikuparikompleksin stimuloima kollageenisynteesi fibroblasteilla glycl-L-histidiini-L-lyysini-Cu2+-yhdistelmän avulla. FEBS Letters. 1988;238(2):343–346. doi: 10.1016/0014-5793(88)80509-x.
58. Wegrowski Y, Maquart FX, Borel JP. Tripeptidikuparikompleksin sulfatiivisen glykosaminoglykaanin synteesin stimulaatio glycyl-L-histidiini-L-lyysini-Cu2+-kompleksilla. Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
59. Siméon A, Emonard H, Hornebeck W, Maquart FX. Tripeptidit-kupari-kompleksi glycyl-L-histidiini-L-lyysini-Cu2+-aine stimuloi matriksin metalloproteiinien 2-aineenvaihduntaa fibroblastien kasvuteknologioissa. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
60. Siméon A, Wegrowski Y, Bontemps Y, Maquart FX. Glukoamiinoglikanien ja pienten proteoglikanien ilmentyminen haavissa: modulaatio tripeptidi-kupari-kompleksin glycyl-L-histidiini-L-lyysini-Cu2+-yhdistelmän vaikutuksella. Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
61. Kang YA, Choi HR, Na JI, et al. Kupari-GHK lisää keratinosyyttien integraasin ja p63-positiivisuutta. Archives of Dermatological Research. 2009;301(4):301–306. doi: 10.1007/s00403-009-0942-x.
62. Lamb J. Connectivity Map: uusi työkalu biolääketieteellisessä tutkimuksessa. Nature Reviews Cancer. 2007;7(1):54–60. doi: 10.1038/nrc2044.
63. Iorio F, Bosotti R, Scacheri E, ym. Lääkkeen toimintatapa ja lääkkeen uudelleen sijoittaminen transkriptiovasteiden perusteella. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2010;107(33):14621–14626. doi: 10.1073/pnas.1000138107.
64. Hong Y, Downey T, Eu KW, Koh PK, Cheah PY. ‘Metastasissalherkkä’ allekirjoitus varhaisvaiheen epätasapainon korjausta osaavan sporadickolorektaalikarsinoomaa sairastavilla potilailla ja sen merkitykset mahdollisten hoitovaihtoehtojen kannalta. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
65. Huang P, Kishida S, Cao D, et al. Neuronal differentiation factor neuroD1 alentaa neuronien torjunta-aine Slit2:n ekspressiota ja edistää neuroblastoma-solujen liikettä ja kasvaimen syntymistä. Cancer Research. 2011;71(8):2938–2948. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-10-3524.
66. Fischer A, Sananbenesi F, Mungenast A, Tsai LH. Kognitiivisten häiriöiden hoitoon tarkkojen HDAC-entsyymien kohdistaminen. Trends in Pharmacological Sciences. 2010;31(12):605–617. doi: 10.1016/j.tips.2010.09.003.
67. Koch CM, Wagner W. Epigenetinen ikääntymisen tunnusmerkki ikäarvioimiseksi eri kudoksissa. Aging. 2011;3(10):1018–1027. doi: 10.18632/aging.100395.