Peptidet GHK-Cu: molekylstrukturen, verkningsmekanismer och användningsområden inom vetenskaplig forskning

GHK-Cu är ett naturligt förekommande tripeptidkomplex med koppar som väcker intresse hos forskare på grund av dess roll i cellkommunikation, reglering av extracellulär matrix och biologiska processer som är relaterade till vävnadshållning och reparation. Sedan det identifierades av Lorena Pickart år 1973 har forskare analyserat dess molekylära struktur, kopparbindningsförmåga, påverkan på genuttryck och interaktion med cellvägarna som deltar i inflammatoriska processer, oxidativ stress och vävnadshierarki.

Detta samband identifierades för första gången under studier av komponenter i human serum och dess inverkan på proteinsyntesen i celler. Pickart observerade att en faktor som härrör från serum kan påverka beteendet hos åldrande leverceller genom att aktivera proteinsyntesmönster som är karakteristiska för yngre celler [1]. Senare studier möjliggjorde identifieringen av tripeptidet glycyl-L-histidyl-L-lysin (GHK) och analysen av dess förmåga att bilda en stabil komplex med tvåvärdiga zinkjoner (Cu²⁺).

GHK består av tre aminosyror: glycin, histidin och lyzín. När den binds till en metalljon (II) bildar den en komplex som allmänt kallas GHK-Cu eller GHK-metylpeptid.

Detta peptid har upptäckts i mänskliga biologiska vätskor, inklusive blodplasma, slemhinna och urin. Enligt publicerade data minskar dess koncentration i blodet med åldern – från cirka 200 ng/ml vid 20 års ålder till cirka 80 ng/ml vid 60 års ålder [2–9]. Dessa observationer har bidragit till att forskningen om relationerna mellan GHK, åldrande-relaterade cellförändringar och regleringen av vävnadsprocesser har utvecklats.

I experimentella studier har det visats att GHK-Cu kan påverka kollagenbildningen, omstruktureringen av det extracellulära membranet, angiogen signalering samt aktiviteten hos antioxidativa enzymer. Dessutom har dess påverkan på inflammatoriska mediatorer, cellmigration och genuttryckssignaler relaterade till vävnadstillväxt har analyserats i fibroblastodlingar och djurmodeller.

Vissa analyser kopplade GHK till förändringar i över 4000 gener, vilket tyder på att dess biologiska aktivitet kan inkludera många sammanlänkade cellvägar [9].

Ändringar i genuttryck betyder dock inte automatiskt en förbättring av vävnadens funktion eller kliniska resultat. Många observationer kommer från cellodling, datoranalyser eller djurstudier.

GHK-Cu förblir därför ett viktigt ämne för molekylär och preklinisk forskning, särskilt inom ramen för kopplingen mellan koppar, cytoplasmatisk biologi, oxidativ stress och cellers svar på skador.

Vad är GHK-Cu?

GHK-Cu är ett koordinerande komplex som bildas när glycyl-L-histidyl-L-lysin-tripeptidet binder till en metalljon (II). Kapaciteten att koordinera metallioner utgör en av molekylernas egenskaper som skiljer det från många andra korta peptider [1, 2].

Mangan är ett essentiellt spårämne som deltar i många biologiska processer. Det främjar enzymaktivitet, mitokondriell energiproduktion, antioxidantskydd samt bildningen och upprätthållandet av bindväv.

Samtidigt måste metallernas ekonomi regleras strikt, eftersom orelaterad eller olämpligt kontrollerad metall kan delta i reaktioner som leder till bildning av reaktiva syrgasformer.

GHK skapar ett molekylärt miljö som möjliggör kopplingen av koppar och påverkar dess kemiska egenskaper. Tack vare denna interaktion har GHK-Cu blivit en användbar forskningsmodell för att analysera den roll som små peptider spelar i metallkoordination och cellsignaleringsprocesser.

Forskningen inledningsvis fokuserade på dess effekt på fibroblaster, vilket är cellerna som ansvarar för produktionen och upprätthållandet av många bindvävskomponenter.

Fibroblasterna syntetiserar kollagen, komponenter som är kopplade till elastin, glykoproteinerna och andra extracellulära matrixsubstanser. Dessa substanser ansvarar för de mekaniska egenskaperna, strukturens organisation och den strukturella stabiliteten hos vävnaderna.

Studier utförda av Borela, Maquart och medarbetare visade att GHK-Cu kan påverka metabolismen hos cytoplasmatiska celler i fibroblastkulturer även vid koncentrationer på omkring 1–10 nanomolar per liter (nM) [10–13].

De observerade effekterna omfattade förändringar i produktionen och nedbrytningen av kollagen, sulfatglukosaminoglykanytor och små proteoglikaner såsom dekryna.

Det är viktigt att notera att upprätthållandet av den extracellulära matriksen kräver mer än bara en ökning av produktionen av strukturella proteiner.

En korrekt regenerering av vävnader bygger på en samordnad syntes, modifiering och nedbrytning av materielementen i vävnaden.

Metoproteinaser från vävnadshuvudet (MMP) deltar i nedbrytningen av det extracellulära vävnadshuvudet, medan vävnadshämmande metalloproteinaser (TIMP) hjälper till att reglera deras aktivitet.

I experimentella studier har man noterat att GHK-Cu påverkar MMP-aktivitet och uttrycket av inhibitorer som TIMP-1 och TIMP-2 [11, 12].

Dessa observationer tyder på en koppling mellan exponering för GHK-Cu och förändringar i modermaterialets sammansättning. De visar dock inte att detta samband konsekvent leder till en gynnsam regenerering av vävnader hos människor.

I ytterligare prekliniska studier analyserades GHK-Cu i sårmodeller, inklusive experiment med sårkontraktion, transplanteringsintegration, inflammatorisk signalering och cellmigration [3–5].

Andra studier handlade om fibroblasters reaktioner på strålningsrelaterade skador. Där observerades förändringar i celltillväxt och livslängd samt uttryck av tillväxtfaktorer [14].

I experimenterna analyserades också interaktioner som omfattar immunceller och endotelceller, vilka deltar i vävnadens svar på skador [15].

Studier på djur visade förändringar i den antioxidativa aktiviteten och parametrar relaterade till sår efter exponering för GHK-Cu eller material som innehåller besläktade peptider [16–21].

Dessa resultat har ökat intresset för GHK-Cu som ett forskningsverktyg för att analysera cellåldrande, reglering av cytoplasmatisk matrix och vävnadens svar på oxidativa och mekaniska skador.

Det är dock inte lämpligt att tolka observationer av sårheling, fibroblastaktivitet eller molekylär signalering i experimentella modeller som bevis på terapeutisk effektivitet hos människor.

GHK-Cu: mekanism för verkan: resultat från in vitro- och in vivo-studier

De biologiska mekanismerna kopplade till GHK-Cu omfattar flera interdependenta vägar, och inte enbart ett enskilt bestämt molekylärt mål.

I experimentella studier analyserades dess effekt på genuttryck, signalering av tillväxtfaktorer, metabolismen hos cytoplasmatiska kärl, responsen på oxidativ stress, inflammationsvägar och cellers interaktion med omgivande vävnader.

Disse mekanismer har undersökts med hjälp av cellodling, djurmodeller och datoranalyser.

Genuttryck och rekonstruktion av lungvävnad

En av de viktigaste forskningsområdena är kopplingen mellan GHK och mönster av genuttryck som är relaterade till kronisk obstruktiv lungsjukdom (COPD).

I en multicenterstudie med deltagande av forskare från Boston University, University of Groningen, University of British Columbia och University of Pennsylvania analyserades signaturerna av genuttryck som är kopplade till skador på lungvävnad vid disseminerad skleros [22].

En grupp av 127 gener som är kopplade till lunginflammation har identifierats och undersökts för att se om GHK kan påverka felaktiga transkriptionsmönster.

Forskare konstaterade att exponering för GHK var kopplad till förändringar i signaleringen av den transformerande faktorn för beta-växtfaktor (TGF-β).

TGF-β är en viktig regulator av celldifferentiering, produktion av extracellulär matrix, vävnadsskiftning och fibrillering.

Dess verkan beror på den biologiska kontexten. Även om TGF-β är nödvändigt för att vävnaderna ska hållas i balans, kan en misslyckad signalering också bidra till patologisk ansamling av matrixkomponenter och tillväxt av fibrösa vävnader.

I laboratorieexperiment med lungfibroblast från patienter med PAH var exponeringen för GHK kopplad till en förbättring av förmågan att slappna av och omorganisera kollagen.

Forskarna noterade också en ökad expresion av integrin β1, vilket tyder på en möjlig delaktighet av interaktionsprocesser som är beroende av integrin [22, 23].

Integriner är proteiner som hjälper cellerna att interagera med den omgivande extracellulära matrixen. De deltar i cellers adhesion och migration, signalöverföring och vävnadsorganisation.

Dessa observationer tyder på att GHK kan påverka samband mellan TGF-β-signaler, integrin-ekspression och reglering av cytoplasmatisk matrix.

Experimenter visar dock inte att GHK-Cu kan vända utvecklingen av pulmonell hypertensiv chock eller återställa lungfunktion hos patienter.

Resultaten gäller mönster av genuttryck och cellbeteende under experimentella förhållanden.

Genuttryck kopplat till cancer och cellproliferation

GHK har också analyserats i studier av genvävnader kopplade till cancer.

Hong och hans medarbetare studerade mönster av genuttryck som är kopplade till progressivitet i tjocktarmen och dess spridningsförmåga [7, 24].

Senare tolkningar av dessa data kopplade GHK till en minskning av expressonen för omkring 70% utvalda gener som är kopplade till metastaser.

I detta sammanhang diskuterades bland annat genen MAP3K5, LMNA, APP och NFATC2.

Dessa gener deltar i olika biologiska processer, inklusive intracellulär signalering, organisering av cellkärnan, reglering av celler och transkriptiva svar.

Ändringar i genuttryck som är kopplade till metastaser bör dock inte jämföras med bevisat förebyggande av metastaser.

Genexpressionssignaturer kan hjälpa till att identifiera vägar som är kopplade till sjukdomsprocessen, men ändringen av dem utgör inte ett självständigt kliniskt bevis på anticanceraktivitet.

I andra laboratoriestudier analyserades exponeringen för GHK i humana tumörceller.

I vissa experiment som omfattar neuroblastom- och bröstcancermodeller har förändringar av apoptos och cellproliferation observerats vid nanomolära koncentrationer [25].

Apoptosis är en reglerad form av celldöd som är nödvändig för vävnadens utveckling och för att upprätthålla cellhemostas.

Apoptoesjukdomar är viktiga inom cancerbiologi eftersom maligna celler kan utveckla mekanismer som möjliggör undvikande av normala signaler som leder till celldöd.

Att observera apoptos i tumörceller är dock inte ett bevis på selektiv anticanceraktivitet i människokroppen.

Celllinjer skiljer sig från verkliga tumörer vad gäller struktur, metabolism, mikromiljö, interaktion med immunförsvaret och exponeringsförhållanden.

Därför är dessa resultat fortfarande viktiga för studier av cancermekanismer, men inte för bekräftade användningsområden inom klinisk onkologi.

Fibroblastaktivitet och rekonstruktion av extracellulär matrix

Fibrillostudier utgör ytterligare en viktig del av den vetenskapliga litteraturen om GHK-Cu.

Efter exponering för komplexa tripeptidsammansättningar av koppar observerades förändringar i kollagenproduktionen, degeneration av matrixen och expression av tillväxtfaktorer [9, 26].

Kolagensintegrering är bara en av delarna i regleringen av det extracellulära membranetet.

För att bevara den normala strukturen hos vävnaderna måste masken också vara utsatt för kontrollerad nedbrytning och omorganisering.

GHK-Cu har kopplats till förändringar i aktiviteten hos metalloproteinaser samt i expresion av TIMP-1 och TIMP-2.

Dessa resultat tyder på att föreningen kan påverka både bildningen och nedbrytningen av maternalkomponenterna.

Vägen och betydelsen av dessa förändringar beror på det experimentella modellen och de omgivande biologiska förhållandena.

I modeller av strålning av fibroblastceller analyserade forskarna om koppartripeptider påverkar celltillväxt och uttryck av tillväxtfaktorer efter exponering för strålning [26].

Analyserna av genuttryck i litteraturen visade också förändringar i DNA-reparationrelaterade flöden. Dessa omfattade 47 gener med ökad uttrycksskala och fem gener vars uttryck minskade med minst 50% [9, 26].

Dessa resultat visar på förändringar i cellernas transkriptionsrespons.

De visar dock inte i sig själva någon fullständig reparation av DNA, en omvändning av cellåldrande eller återställandet av normala vävnadsegenskaper.

Angiogenese och tillväxtfaktorer

GHK-Cu studerades också i samband med angiogenesen, processen med att nya blodkärl bildas från redan existerande kärlstrukturer.

Angiogenesen är involverad i vävnadstillväxt, svar på skador och underhåll av blodkärlssystemet.

I experimentella studier analyserades samband mellan material som innehöll GHK och sådana faktorer som VEGF (vascular endothelial growth factor) och bFGF (basal fibroblast growth factor) [27].

VEGF är involverat i signalering hos endotelceller och i utvecklingen av blodkärl.

Basofyl FGF deltar i cellproliferation och -differentiering samt i ett vävnadssvar som omfattar kärlceller och bindväv.

I vissa studier har ökade uttryck eller utsöndring av dessa faktorer observerats efter exponering för material som innehåller GHK.

Som en möjlig faktor i dessa effekter togs även signalering som är beroende av integritet upp.

Ändringar i VEGF- eller bFGF-ekspressionen visar dock inte på att funktionella blodkärl uppstår.

Rätt angiogenese omfattar flera steg, inklusive migration av endotelceller, bildning av kärl, deras stabilisering och integration i det befintliga cirkulationssystemet.

De tillgängliga resultaten ger därför mekanistiska bevis som är viktiga för kärlstudier, men de bekräftar inte de kliniska fördelarna som är kopplade till kärlfunktion.

Strukturen och biokemien hos GHK-Cu

Molekylstrukturen hos GHK-Cu studerades med hjälp av olika analytiska och spektroskopiska metoder.

De omfattade rentografisk kristallografi, elektronresonans med hög magnetisering (EPR), spektroskopi med absorptionsspektroskopi av röntgenstrålning, protonresonans med hög magnetisering samt kemiska mätmetoder [28–30].

Disse metoderna hjälpte till att karakterisera den koherenta miljön för koppar i peptidsammansättningen.

Koppling av metaller och molekylär geometri

GHK består av tre aminosyror som är ordnade i sekvensen glycin–histidin–lysin.

Resten av histidin har särskilt betydelse eftersom dess imidazolgrupp kan delta i koordineringen av metalljoner.

Strukturella studier visar att koppar(II) kan bilda koordinerade bindningar med tre kväveatomer som fungerar som elektrondonatorer i peptidsyran.

De inkluderar azotatomet från glycinamingruppen, den deprotontionerade azotatomet från amidet som är kopplat genom glycin-histidinbindningen samt azotatomet från imidazolringen i histidin [28–30].

Den fjärde koordinationspositionen kan tilldelas en annan donatorgrupp, beroende på den kemiska miljön.

Denna struktur beskrivs ofta som kvadratisk-planär geometri eller nära kvadratisk-planär.

Den exakta geometrin kan bero på pH-värdet, lösningsmedelsförhållandena, förekomsten av ytterligare ligander samt den undersökta formen av komplexet.

Kordynationen av zink påverkar de kemiska egenskaperna hos GHK-Cu och skiljer detta komplex från det oassocierade peptidet GHK.

Den strukturella kopplingen mellan peptidet och zink är viktig eftersom metallbindning kan ändra molekylens reaktivitet och dess interaktioner med andra biologiska föreningar.

Rysning: Molekylstrukturen hos GHK-Cu-komplexet

Molekylstrukturen hos GHK-Cu visar hur glycin-histidin-lysinpeptidet tillhandahåller koordineringsplatser med kväve som möjliggör kopplingen av koppar(II).

I strukturella och spektroskopiska studier identifierades azoföreningen i amingruppen, azidamidens peptidbindning samt imidazolringens azoförening i histidin som viktiga komponenter som deltar i kopplingen av koppar.

Koordineringsmiljön hjälper till att förklara varför GHK studeras som en kopplingspeptid för koppar samt som en modell för interaktioner mellan metaller och peptider.

Interaktioner med albumin och andra metallbindande molekyler

Vid det fysiologiska pH-värdet kan GHK-Cu delta in i olika koordinerade balanser med deltagande av ytterligare ligander.

Lau och Sarkar studerade interaktionerna mellan koppar(II), GHK, histidinhaltiga molekyler och serumalbumin [28–30].

Serumalbumin är ett protein som förekommer i stora mängder i blodet. Det deltar i transporten och bindningen av många substanser, inklusive vissa metalljoner.

I litteraturen beskrivs en hög affinitet mellan både GHK och albuminen för kopplingen av koppar. I de undersökta förhållandena uppmättes värden på omkring log₁₀ 16,44 för GHK och log₁₀ 16,2 för albuminen.

Dessa värden tyder på att GHK kan delta i konkurrerande interaktioner relaterade till kopparbindning.

Dock beror distributionen av koppar i biologiska vätskor på mer än bara bindningskraften mellan de två isolerade molekylerna.

Tillgängligheten av koppar påverkas också av koncentrationerna av olika substanser, konkurrerande ligander, proteininteraktioner och cellers transportsystem.

GHK:s förmåga att binda till koppar utgör alltså grunden för forskningen om överföring av metaller och koordinationstillstånd.

Det bevisar dock inte att GHK-Cu säkert transporterar zink till alla vävnader eller att det förebygger alla oxiderande reaktioner som är relaterade till zink.

Messingberoende enzymer och reglering av redoxprocesser

Mättet är nödvändigt för aktiviteten hos många viktiga enzymer.

Lysisoxidasa deltar i bildningen av tvärbindningar mellan kollagen- och elastinmolekyler.

Dysmutase, en överflödigt kvicksilver- och zink-oxidas som ofta kallas SOD1, främjar den antioxidativa skyddningen genom att katalysera omvandlingen av överflödigt kvicksilver till mindre reaktiva produkter.

Cytochrom c-oxidas är involverad i mitokondriell elektrontransport och cellens energiproduktion.

Eftersom GHK binder koppar analyserade forskarna om GHK-Cu kan påverka tillgången på detta metall och de därmed sammanhängande biokemiska processerna.

Närvaron av kopparbindande peptid betyder dock inte att metallet omedelbart överförs till varje kopparberoende enzym.

Cellerna har specialiserade transportörer, bindande proteiner och reglerande system för den intracellulära distributionen av koppar.

Dessa mekanismer är viktiga eftersom fri eller olämpligt reglerad koppar kan delta i oxideringsreaktioner.

Under vissa förhållanden kan redoxreaktioner kopplade till koppar bidra till bildandet av reaktiva kemiska föreningar.

Av denna anledning undersöktes GHK-Cu med avseende på dess potentiella inverkan på koppars reaktivitet och oxiderande processer [31, 32].

Denna koppling är kemiskt komplex. Kopplingen av koppar kan förändra metallens reaktivitet, men de biologiska konsekvenserna beror på hela den kemiska miljön.

Aldehydbindning och antioxidantforskning

GHK undersöktes också med avseende på dess förmåga att reagera med utvalda aldehyder som bildas vid peroxidering av lipider.

Peroxidation av lipider omfattar oxideringreaktioner som påverkar cellmembranens lipider och andra strukturer som innehåller lipider.

Som en följd av dessa reaktioner kan reaktiva aldehyder bildas, såsom 4-hydroxynonenal och akrolein.

Båda föreningarna är föremål för forskning eftersom de kan interagera med proteiner och andra cellmolekyler.

I kemiska studier har det visats att GHK kan bilda reaktionsprodukter med dessa aldehyder, vilket tyder på deras potentiella förmåga att binda i experimentella förhållanden [31, 32].

Dessa resultat ger information om GHK:s kemiska reaktivitet.

Dock visar inte förmågan att reagera med aldehyder i ett laboratorium att peptidet förebygger oxidativ skada i vävnader hos människor.

Reagenskoncentrationerna, närvaron av konkurrerande biologiska molekyler samt reaktionshastigheten är viktiga när man bedömer de potentiella biologiska konsekvenserna.

Celladhesion och interaktioner med extracellulär matriks

GHK-Cu undersöktes också i samband med cellers anpassning och deras interaktion med extracellulära material.

Celladhesion är nödvändig för att vävnaderna ska kunna organiseras korrekt, eftersom cellerna måste kunna identifiera och reagera på sin omgivning.

I studier som omfattade osteoblasthårceller och modeller av hepatocyttadhesion analyserades effekten av material som innehåller GHK på cellernas spridning, deras adhesion och fenotyp [33, 34].

Denna forskning är viktig för utvecklingen av biomaterial där peptider kan inbyggas i eller fästas vid konstruktioner.

De observerade effekterna beror på peptidens typ, materialets sammansättning, celltyp och experimentella förhållanden.

De ger information om interaktionerna mellan peptiderna och ytorna samt mellan cellerna och vävnaden, och inte direkt bevis på vävnadstillväxt hos människor.

Användningsområdena för GHK-Cu i vetenskapliga studier

GHK-Cu har studerats inom många områden av molekylär och preklinisk forskning.

De omfattar oxidativ stressbiologi, inflammatorisk signalering, fibrillering, lungskador, neuronala svar, reglering av blodkärl, rekonstruktion av cytoplasmatisk matrix och analys av genuttryck.

Nedan beskrivs de viktigaste experimentella resultaten samt deras begränsningar.

Studier av antioxidativ verkan och redoxprocesser

Zinkberoende antioxidativa enzymer utgör en viktig del av cellernas skydd mot oxidativ stress.

En av exemplen är SOD1, som kräver koppar och zink för att fungera korrekt.

Studier av järnbrist har visat att brist på järn kan påverka aktiviteten hos SOD1 och öka värdena för parametrar kopplade till oxidativ stress [35–38].

Dessa resultat bekräftar den biologiska betydelsen av en korrekt reglering av kopparflödet.

Dock kan studier av järnbrist eller återställande av järninnehållet i kosten inte automatiskt betraktas som bevis för samma effekt som GHK-Cu.

Skillnaden är viktig eftersom den biologiska funktionen hos en specifik kopparkomplex beror på dess molekylära struktur, distribution och interaktioner med vägar som reglerar metabolismen av detta metall.

I experimentella studier som omfattade biomaterial innehållande GHK och komplexer av koppartripeptider analyserades antioxidantresponserna samt parametrar relaterade till vävnaderna.

En del av studierna handlade om huruvida GHK-Cu påverkar peroxideringen av lipider som är kopplade till ferrytin.

Ferytyna är ett protein som deltar i järnlagring inom cellen.

Järn kan delta i oxideringsreaktioner när det förekommer i reaktiva former.

Studierna visade att koppar i samverkan med GHK kan påverka ferritindependerad lipidperoxidation under vissa experimentella förhållanden [39, 40].

Dessa observationer ger information om interaktionerna mellan kopparkomplexen, processer som är relaterade till järn samt om kemin i reaktionerna med oxidation.

Ytterligare kemiska analyser undersökte GHK:s reaktioner med lipidperoxideringsprodukter, såsom 4-hydroxynonenal och akrolein [41, 42].

Resultaten motiverar fortsatt forskning kring GHK som en molekyl som kan delta i kemiska reaktioner med aldehyder.

Dock visar den antioxidativa aktiviteten i ett kemiskt test eller i en cellmodell inte någon klinisk skydd mot oxidativa skador.

Signalering och reglering av cytokiner

En inflammatorisk tillstånd omfattar samordnade interaktioner mellan immunceller, signalproteiner och vävnadsspecifika reaktioner.

I flera laboratoriestudier analyserades GHK-Cu:s effekt på inflammatoriska vägar.

I cellforskning med RAW 264.7 makrofagliknande celler och Caco-2 tarmmembranceller observerades förändringar i oxidativa och inflammatoriska parametrar efter exponering för GHK-Cu.

De omfattade en minskning av produktionen av reaktiva syrgasformer, en ökning av parametrarna för antioxidanter relaterade till glutation samt förändringar i inflammatoriska mediatorer såsom TNF-α och IL-6 [43–47].

Forskarna analyserade också signalvägar som omfattar kärnfaktor kappa B (NF-κB) och p38-aktiverad proteinkinas (p38 MAPK).

NF-κB deltar i regleringen av gener som är kopplade till inflammation, immunförsvar, cellöverlevnad och stressrespons.

Signalvägen p38 MAPK är involverad i cellreaktioner relaterade till inflammatoriska mediatorer och miljöstress.

I experimentella studier kopplades GHK-Cu samman med förändringar i signaleringen av NF-κB p65 och p38 MAPK.

Dessa resultat tyder på att föreningen kan påverka vägar som deltar i inflammatorisk respons i laboratorieförhållanden.

Dock bedömer inte alla studier som citeras i den bredare diskussionen GHK-Cu direkt. En del publikationer presenterar allmänna uppgifter om inflammatoriska vägar eller andra experimentella föreningar.

Därför visar inte ens själva förekomsten av studier av NF-κB eller p38 MAPK i sig att GHK-Cu ger en specifik antiinflammatorisk klinisk effekt.

Dessa resultat är mest användbara för att identifiera möjliga molekylära interaktioner och för att identifiera frågor som kräver ytterligare experiment.

Modeller för vävnadsskräckning, lungskador och neuroprotektion

Fiberbildning innebär en felaktig samling eller organisation av komponenterna i det extracellulära vävnadsmaterialet i vävnaderna.

Det kan utvecklas som svar på kvarstående skador, inflammation eller förändrad cellsignalering.

GHK studerades i experimentella lungfibroliseringsmodeller på grund av dess beskrivna effekt på fibroblastaktivitet och TGF-β-relaterade vägar.

I en musmodell av lungfibrolys orsakad av bleomycin, observerade forskarna förändringar i vävnadstykkningen, trycket från inflammatoriska celler och vägar relaterade till den intercellulära övergången [48].

I studien analyserades TGF-β1/Smad-signaleringsmekanismen, som är involverad i cellreaktioner kopplade till materienbildning och fibrillering.

Dessa observationer tyder på att GHK kan påverka vissa vävnadssammanknande banor i djurstudier.

Men effekten som uppnås i en kemiskt inducerad modell av sjukdomen hos musar visar inte på effektivitet vid behandling av lungfibros hos människor.

De biologiska mekanismerna, sjukdomsutvecklingen och de kliniska förutsättningarna kan variera betydligt.

I neurobiologiska studier av GHK analyserades också oxidativ stress, inflammatorisk signalering och möjliga interaktioner med genregleringsbanor.

Vissa studier kopplar dessa mekanismer till deacetylas histon 2 (HDAC2), ett enzym som deltar i regleringen av kromatin och genuttryck.

Dock omfattar den citerade litteraturen om kognitiva förändringar hos åldrande möss och mekanismerna relaterade till HDAC även studier som inte direkt bekräftar effekterna av det specifika för GHK-Cu [49].

Därför kräver påståenden om förbättrad kognitiv funktion, minskad neuroinflammation eller direkt reglering av HDAC2 av GHK-Cu en tydlig åtskillnad från resultat från studier av andra experimentella interventioner.

Tillgängliga bevisar intresset för mekanistiska studier, men de bekräftar inte den etablerade neuroprotektiva effekten hos människor.

Observationer i modeller av angiogenesen och kärlbiologin

Angiogenesen är en nödvändig process vid utveckling och reparation av vävnader.

Det omfattar bildandet av nya blodkärl och kräver samordnade interaktioner mellan endotelceller, tillväxtfaktorer, extracellulära matrikskomponenter och omgivande vävnader.

GHK-Cu studerades i experimentella system relaterade till vaskulär signalering och vävnadsprocession.

I vissa studier har förändringar av angiogenese-relaterade faktorer observerats, inklusive VEGF och bFGF [50, 51].

Dessa vita celler deltar i aktiviteten hos endotelceller, i utvecklingen av blodkärl samt i den cellbaserade responsen på skador.

Forskarna analyserade också relationerna mellan föreningarna relaterade till GHK och strukturella proteiner såsom kollagen och elastin.

Kolagen är ansvarigt för vävnadernas hållbarhet, medan elastin stöder deras förmåga att expandera och återgå till sitt ursprungliga form.

Båda proteinerna är viktiga för strukturen hos blodkärl och för organisationen av den extracellulära kärnan.

Ändringar i uttrycket för tillväxtfaktorer eller i proteinbildningen hos moderceller behöver dock inte betyda en förbättring av blodflödet.

Funktional rekonstruktion av kärl omfattar ytterligare processer, inklusive bildning av kärl, deras mognad, integration och fysiologisk reglering.

I vissa bredare studier om återanpassning av kärl nämns också antikoagulationsaktivitet och förlängning av kärl.

Detta är separata fysiologiska processer och man bör inte utgå från att de uppstår direkt som en följd av exponering för GHK-Cu utan relevanta bevis för detta specifika ämne.

De aktuella resultaten är därför av avgörande betydelse framför allt för experimentella studier av angiogenesen och kärlbiologin.

Bevis från neuronala och neurotrofiska modeller

Nervcellernas utveckling och reparation omfattar deltagande av tillväxtfaktorer, interaktioner med extracellulär matriks, cellmigration och förlängning av neuronfibrer.

Ökningen av neuriter är en av de experimentella parametrar som används för att studera neuroners differentiering och utveckling.

I tidiga studier med användning av nervvävnadshöjning analyserades effekten av konditionerade peptider och kosttillskott på neuronernas differentiering [52, 53].

Denna forskning bidrog till en bredare intresse för korta peptider som potentiella regulatorer av cellers beteende.

Material relaterat till GHK har också analyserats i experimentella system för nervregenerering.

I en av studierna infördes ett peptid som främjar cellers adhesion till kollagenstrådarna som används för att sammanföra avbrott i nervbanorna [54].

Forskare observerade förändringar i tillväxtfaktorer och inflammatoriska mediatorer, inklusive nervtillväxtfaktor (NGF) samt neurotroferna NT-3 och NT-4.

Ytterligare observationer omfattade axonnparametrar och reaktioner från Schwann-celler.

Schwanna-cellerna är en viktig del av det centrala nervsystemet. De stödjer axoner och deltar i responsen på skador i de centrala nervbanorna.

Dock bör resultaten som erhålls med hjälp av kollagenledningar som innehåller peptider inte automatiskt hänföras till den fritt cirkulerande GHK-Cu.

De observerade effekterna kan påverkas av biomaterialet, den lokala miljön, sättet att presentera peptidet samt den experimentella modell som används.

På samma sätt visar en ökning av uttrycket av tillväxtfaktorer eller antalet axoner i det experimentella systemet inte på funktionell neurologisk regenerering hos människor.

Det är bäst att tolka dessa studier som analyser av biomaterial som innehåller peptider och neurotrofisk signalering.

Genreglering och moderskapets rekonstruktion

Studier av genuttryck har blivit en viktig del av den vetenskapliga diskussionen om GHK och GHK-Cu.

De tidiga experimenten fokuserade på cellers svar på såren, inklusive fibroblasternas beteende, kollagenproduktionen och organiseringen av extracellulära membraner [55, 56].

Senare studier av Maquart och medarbetare analyserade effekten av GHK-Cu på kollagenbildningen samt celler som är kopplade till vävnad [57–59].

I experimenter som använde fibroblastkulturer observerades förändringar i kollagenproduktionen vid låga koncentrationer.

I andra studier analyserades sulfatglukosaminoglikaner och små proteoglikaner.

Disa-partiklar deltar i organiseringen av det extracellulära membranet, bibehållandet av fuktbalansen, formgivningen av mekaniska egenskaper samt interaktionerna mellan cellerna och omgivande vävnader.

GHK-Cu har också kopplats till förändringar i expresion av metalloproteinaser i mammor, inklusive MMP-2 [59].

Detta är viktigt eftersom upprätthållandet av cytoplasmatisk matrix kräver både kontrollerad nedbrytning och syntes.

Enbart en ökning av kollagenproduktionen visar inte att vävnadernas struktur förbättras.

På samma sätt kan ökad MMP-aktivitet leda till olika effekter beroende på typ av vävnad och biologisk miljö.

Forskningen tyder alltså på att GHK-Cu kan påverka fosterutvecklingen genom flera samverkande vägar.

Disse observationerna visar dock inte på läkning utan uppkomsten av ärr eller en förutsägbar regenerering av vävnad hos människor.

I ytterligare experiment noterades förändringar av sådana molekyler som dekryna, dermatan-sulfat och kondroitinsulfat [60].

Dekoryna är ett litet proteoglikan som är kopplat till kollagenets struktur och regleringen av det extracellulära vävnadsmaterialet.

Dermatan- och chondroitin-sulfat är glykosaminoglykanyter som påverkar strukturen och egenskaperna hos bindväv.

Ändringar i deras expressionsmönster eller syntes ger information om modernens metabolism.

De visar dock inte ensamständigt förbättringar av vävnadens hållbarhet, utseende eller kliniska resultat av läkning.

Integrity expression and skin cell research

Keratinocyter är den dominerande typen av hudceller.

De deltar i bildandet av hudbarriären, celldifferentieringen och reaktionen på vävnadsskador.

Forskare från Seoul National University undersökte effekten av kopparpeptidet GHK på expresion av integriner och förekomsten av celler som visar positiv expresion av p63 i keratocyter [61].

Integriner deltar i cellers tillväxt och kommunikation med den extracellulära membranen.

Protein p63 är kopplat till utvecklingen av epitelet och upprätthållandet av vissa populationer av epitelceller.

I studien noterades en ökad expresion av integryn och en högre andel positiva celler med p63 efter exponering för kopparpeptidet GHK.

Dessa observationer tyder på en möjlig påverkan på cellfunktioner som är kopplade till hudens återhämtning.

Men förändringar av dessa markörer i sig visar inte på ökad hudregenerering hos människor.

Resultaten är fortfarande begränsade till de cellmodeller som används och de parametrar som analyseras.

Storskalig profilering av genuttryck

Datormetoder har ökat möjligheterna att analysera effekterna av olika molekyler på genuttrycksnätverken.

Connectivity Map, ofta känd som cMap, är en forskningsresurs som används för att jämföra mönster av genuttryck kopplade till biologiska tillstånd och exponering för kemiska ämnen.

Sammanhängande datoranalysmetoder, inklusive MANTRA, har använts för att undersöka sambanden mellan samband och transkriptionella svar [62, 63].

GHK diskuterades i detta sammanhang på grund av dess samband med omfattande förändringar i genuttrycksmönstren.

I en av analyserna noterades 268 gener med ökad expresion och 167 gener med minskad expresion.

I andra studier har GHK kopplats till förändringar som omfattar fler gener och vägar [9, 62–64].

Dessa resultat tyder på att svar relaterade till GHK kan inkludera många biologiska system och inte enbart en enda molekylär målnivå.

Dock kräver datainsamling av genuttryck en noggrann tolkning.

En förändring av RNA-informationens mängd (mRNA) behöver inte leda till en motsvarande förändring av proteinets koncentration eller biologiska funktion.

Mönstren för genuttryck beror också på celltyp, exponeringsförhållanden, mätmetoder och analytiska gränsvärden.

Av den anledningen bör genantalen som är kopplade till ett visst ämne inte betraktas som en direkt mätning av dess terapeutiska verkan.

Datormodeller är värdefulla när man formulerar hypoteser, men de kräver bekräftelse genom experiment.

Genomtrådsnätverk kopplade till neuroprotektion

Analyser av genuttryck i litteraturen om GHK har identifierat förändringar som omfattar gener som är relaterade till neuronfunktion, cellöverlevnad och utvecklingssignalering.

Exempel inkluderar SIGMAR1, EPM2A, NAIP, FGFR2 och SLIT2 [65].

Dessa gener deltar i olika biologiska processer.

SIGMAR1 kodar för receptorn sigma-1, ett protein som är involverat i cellsignaleringsprocesser och stressrelaterade processer.

EPM2A är kopplat till laforin, ett protein som är viktigt för metabolismen av glykogen.

NAIP deltar i banor relaterade till cellernas överlevnad och immunrespons.

FFRG2 kodar en receptor som är involverad i signalering genom fibroblastvekstfaktor.

SLIT2 deltar i utvecklingsprocesser som är kopplade till cellernas riktning och migration.

Delningen av dessa gener i nervsystemets biologi har väckt intresse för deras möjliga samband med transkriptionella svar som orsakas av GHK.

Men närvaron av genen i datamängden kopplad till GHK bevisar inte att GHK direkt kontrollerar detta gen i varje biologisk miljö.

Det bevisar inte heller att GHK förebygger demens eller leder till förbättrad neurologisk funktion.

De citerade studierna av delar av dessa gener ger en bredare biologisk kontext och inte direkta bevis för GHK-Cu:s verkan.

Därför bör dessa resultat tolkas som observationer som används för att formulera hypoteser om genreglering och neurobiologi.

Resultat från epigenetiska studier och HDAC-relaterade vägar

Epigenetisk reglering omfattar förändringar i genaktiviteten som inte kräver modifiering av den grundläggande DNA-sekvensen.

En av de viktigaste mekanismerna är modifiering av histoner.

Histoner är proteiner runt vilka DNA är organiserat. De kemiska modifieringarna kan påverka tillgången av vissa DNA-regioner till transkriptionsapparaten.

Histon deacetylases (HDAC) remove acetyl groups from histones and other protein substrates.

Deras aktivitet kan påverka kromatinens struktur och genuttryck.

GHK har behandlats i samband med HDAC-relaterade vägar på grund av bredare observationer av genreglering och åldersrelaterade transkriptionsförändringar [66, 67].

Men de citerade studierna om HDAC och epigenetisk åldrande ger främst allmän information om dessa biologiska processer.

De i sig själva inte bevisa att GHK-Cu är ett kliniskt bekräftat HDAC-hämmare.

På samma sätt bör förändringar i genuttrycksmönster inte automatiskt beskrivas som en omvänd epigenetisk åldrande.

En direkt påstående om hämmande effekt av HDAC kräver experiment som visar effekterna på aktiviteten hos dessa enzymer under vissa förhållanden.

Påståenden om att åldrande kan vändas kräver ytterligare bevis som kopplar molekylära mätningar till betydande biologiska resultat.

Avstånden mellan GHK, kromatinreglering och åldersrelaterad genuttryck förblir alltså ett område för ytterligare mekanistiska studier.

Kvalitet och analys av GHK-Cu-material för vetenskapliga studier

Analytisk karakterisering av GHK-Cu är viktig eftersom undersökningsresultaten beror på identiteten, sammansättningen och kvaliteten på det analyserade materialet.

Läkemedlet, som kallas GHK-Cu, bör utvärderas med metoder som möjliggör karakterisering av peptidhärtalet och tillhandahållande av bevis för dess form med koppar.

En kvalitetsanalys kan omfatta kromatografi, masspektrometri, analys av metallsammansättning samt ytterligare tekniker som väljs ut beroende på det specifika analytiska syftet.

Ingen enskild rutinmässig testning bekräftar dock alla viktiga kvalitativa parametrar.

Kromatografi med vätskekromatografi och massspectrometri

Kromatografisk vätskekromatografi kombinerad med masspektrometri (LC-MS) kombinerar den kromatografiska separationsmetoden med en massdetekteringsmetod som bygger på mätning av jonernas massa.

En del av den kromatografiska delen möjliggör separering av föreningar som finns i provet.

Massspektrometern ger information om jonerna baserat på deras massa-till-antal-förhållande.

LC-MS kan stödja identifieringen av ett peptid genom att detektera molekylära joner som är förenliga med det förväntade ämnet.

Enligt den använda metoden kan ytterligare information om fragmentering hjälpa till att karakterisera peptidskedjan.

Dock bekräftar observationen av en molekylmassa som överensstämmer med GHK inte automatiskt alla aspekter av molekylstrukturen.

På samma sätt behöver detektering av signaler som är förenliga med närvaron av en form kopplad till koppar inte bevisa en fullständig koordineringsgeometri eller utesluta alla alternativa komplex.

Charakteristiken för kopparbindning kan kräva ytterligare undersökningar med hjälp av lämpliga spektroskopiska metoder eller genom analys av metallsammansättningen.

LC-MS är därför ett värdefullt analytiskt verktyg, men tillförlitligheten i de resultat som erhålls beror på metoden, referensmönstren, provberedningen och kompletterande bevis.

Höghastighets vätskekromatografi och renhet

Höghastighets vätskekromatografi (HPLC) används ofta för att separera komponenterna i peptidspräpar.

Det kan hjälpa till att identifiera föroreningar som är relaterade till syntes, nedbrytning eller andra produktionsprocesser.

Resultatet av den kromatografiska renheten bygger vanligtvis på relativa signaler som upptäcks under vissa analytiska förhållanden.

Men kromatografisk renhet är inte detsamma som kemisk identitet, innehåll av peptid, stechiometri för kopparmetallkomplexet eller den övergripande kvaliteten på materialet.

Till exempel behöver deklarerad renhet på 98% % inte betyda att den totala massan av provet utgör en korrekt bildad GHK-Cu-komplex.

Tolkningen beror på den analysmetod som används och hur resultatet beräknas.

Kromatogrammet bekräftar inte heller steriliteten, innehållet av endotoxiner eller frånvaron av alla möjliga föroreningar.

Källmaterialet beskriver den deklarerade renhetsspecifikationen på minst 98% för vissa undersökningspreparat.

Sådan specifikation bör betraktas som en deklaration från leverantören, såvida den inte stöds av tillgänglig analytisk dokumentation för en specifik partikel.

Filtrering, sterilitet och kontroll av föroreningar med fasta partiklar

Källmaterialet beskriver filtrering genom membraner med en porstorlek på 0,22 mikrometer som en del av processen för att bereda materialet.

Membranfiltrering kan användas för att minska vissa mikrobiologiska föroreningar, om metoden och förhållandena är lämpliga.

Dock bekräftar inte själva genomgången av lösningen genom ett filter med en porstorlek på 0,22 mikrometer den slutliga produkts sterilitet.

Att säkerställa steriliteten beror på hela processen, inklusive utrustning, miljö, filterintegritet, hanteringen av materialet samt godkända kontrollrutiner.

Filtreringen behöver inte heller ta bort endotoxiner, lösta kemiska föroreningar eller alla typer av föroreningar genom fasta partiklar.

Därför kräver påståenden om sterilitet eller användbarhet för en viss forskningsanvändning lämpliga tester och dokumentation, och inte enbart enbart beroende av filterets porstorlek.

Bra laboratoriepraxis och dokumentation

Good Laboratory Practice (GLP) är ett kvalitetssystem som gäller för organisationen, genomförandet, övervakningen, dokumentationen och rapporteringen av specifika icke-kliniska studier.

Att påstå att procedurerna är förenliga med GLP-reglerna behöver inte betyda formell överensstämmelse med GLP-kraven eller innehav av ett lämpligt certifikat.

Betydelsen av en sådan deklaration beror på de specifika procedurerna, dokumentationen och den tillämpliga kvalitetsstyrningen.

Forskningsmaterialet kan också åtföljas av en analyscertifikat (Certificate of Analysis, COA).

COA innehåller vanligtvis utvalda resultat från analyserna av en specifik partikel.

Viktiga uppgifter kan omfatta identitetsanalyser, renhetsmätningar, identifiering av substansinnehåll, tillämpliga analytiska metoder, partiidentifierare samt andra specifikationer.

Men den informativa värdet hos COA beror på metoderna och data som ligger till grund för dess presentation.

Det certifikatet i sig visar inte att materialet är lämpligt för att ge till människor, för kosmetisk eller terapeutisk användning.

På samma sätt bekräftar analytisk renhet inte biologisk effektivitet eller klinisk säkerhet.

I vetenskapliga studier bör den mest användbara kvalitativa dokumentationen vara detaljerad, identifierbar och tillräckligt komplett för att möjliggöra en korrekt tolkning av analysresultaten.

Mer information om skillnaden mellan tillverkare, leverantörer, kvalitetsdeklarationer och partiarkiv finns i artikeln Tillverkare och leverantörer av peptider.

Sammanfattning

GHK-Cu är ett naturligt förekommande komplex av tripeptid med koppar, som studerats under mer än fem decennier.

Dess molekylära struktur, kopplingsegenskaper för koppar och interaktioner med celler har gjort den till ett viktigt ämne inom studiet av peptidbiokemi, cytoplasmatisk mattediologi, oxidativ stress och genreglering.

Komplexet består av glykyl-L-histydyl-L-lysin och koppar(II). Strukturella studier har möjliggjort identifieringen av koordinační platser som innehåller kväve och som deltar i kopparsammansättningen och påverkar molekylens kemiska egenskaper.

Disse egenskaperna utgör grunden för analysen av effekterna av korta peptider med metallsalter samt av påverkan av koordinationskemikalier på biologiska processer.

I experimentella studier har förändringar i kollagensyntesen, produktionen av glykoprotein glykaminoglykaner, expresion av matrixmetaklopaseraser, signalering av integriner, inflammatoriska mediatorer och parametrar relaterade till antioxidantskydd noterats.

Ytterligare studier omfattade svar relaterade till GHK i fibroblastkulturer, skadormodellerna för sår, experiment om lungskador, nervsystemet samt biomaterial som innehåller peptider.

Datamodeller kopplade också GHK till omfattande förändringar i nätverket av genuttryck.

Den vetenskapliga betydelsen av dessa observationer beror dock på den experimentella kontexten.

Ändringar i genuttryck behöver inte leda till förändringar i proteinaktivitet.

Ökad kollagenproduktion behöver inte betyda en förbättring av vävnadens struktur.

Förändringar i inflammatoriska markörer utgör inte självständigt kliniskt bevis på antiinflammatorisk effekt.

På samma sätt visar resultaten från studier som omfattar cancerceller, lungfibromodeller och neuronodlingar inte att de är effektiva mot de sjukdomar de motsvarar hos människor.

I litteraturen finns det också betydande skillnader mellan GHK och GHK-Cu samt mellan experiment som direkt handlar om det specifika ämnet och studier som endast ger en allmän biologisk sammanhang.

Dessa skillnader bör beaktas vid tolkningen av verkningsmekanismerna och de föreslagna användningsområdena.

En annan viktig aspekt är analytisk kvalitet. Metoder som LC-MS och HPLC kan ge värdefull information om identitet och renhet, men de kan inte själva bekräfta alla strukturella, mikrobiologiska och biologiska egenskaper hos preparatet.

Generellt sett förblir GHK-Cu ett användbart verktyg för molekylär forskning kring kopparkoordinering, cellsignaleringsmekanismer, cytoplasmatisk metabolism och stressreaktioner orsakade av oxidativ stress.

Dess kända kemiska egenskaper och den omfattande prekliniska litteraturen utgör grunden för ytterligare vetenskapliga studier. Begreppen om klinisk effektivitet och säkerhet kräver däremot separata, kontrollerade studier med deltagande av människor.

Varning

Denna artikel är enbart av pedagogisk och vetenskaplig karaktär. Den presenterar studier om GHK-Cu:s molekylära struktur, kopplingen mellan koppar och biologiska mekanismer, analytisk karaktärsanalys samt experimentella tillämpningar.

Det utgör inte medicinsk rådgivning, rekommenderar inte användning av GHK-Cu hos människor eller djur, fastslår inte behandlingsscheman och stöder inte någon diagnostisk, terapeutisk eller kosmetisk användning.

Resultaten från cellodlingar, djurförsök, datoranalyser och biokemiska analyser får inte tolkas som bevis på klinisk effektivitet eller säkerhet för människor.

Information om analytisk renhet, material av forskningsklass, analysintyg eller laboratorieundersökningar visar inte att den aktuella preparaten är lämplig för att ges till människor eller för någon annan användning som regleras av lagstiftningen.

Alla medicinska beslut bör fattas av lämpligt kvalificerad hälso- och sjukvårdspersonal på grundval av relevanta kliniska bevis och gällande bestämmelser.

Referenser

1. Pickart L. A Tripeptid från humant serum som förbättrar tillväxten av neoplastiska hepatocyter och överlevnaden av normala hepatocyter. San Francisco, Kalifornien, USA: University of California; 1973.
2. Pickart L., Freedman J. H., Loker W. J., et al. Tillväxtmodulerande plasma-tripeptid kan fungera genom att underlätta kopparupptagning i celler. Nature. 1980;288(5792):715–717. doi: 10.1038/288715a0.
3. Pickart L. Användning av GHL-Cu som läkemedel för sårheling och antiinflammatoriskt medel. 1988, http://www.freepatentsonline.com/4760051.html.
4. Downey D., Larrabee W. F., Jr., Voci V., Pickart L. Acceleration av sårheling med glycylhistidyllysine-koppar (II) Surgical Forum. 1985;25:573–575.
5. Pickart L. Iamin: en humant tillväxthormon med flera egenskaper för sårheling. I: Sorenson J., redaktör. Biologi av kopparkomplex. Clifton, NJ, USA: Humana Press; 1987. s. 273–285.
6. Meiners S., Eickelberg O. Personanpassad läkemedelsforskning av nästa generation: tripeptidet GHK får en central plats vid kronisk obstruktiv lungsjukdom. Genome Medicine. 2012;4(8, artikel 70) doi: 10.1186/gm371.
7. Hong Y., Downey T., Eu K. W., Koh P. K., Cheah P. Y. En ‘metastasspreventionsbenägen’ signatur för sporadisk kolorektalcancerpatienter med god förmåga att reparera misstag i tidig fas och dess implikationer för möjliga terapier. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
8. Gruchlik A., Jurzak M., Chodurek E. W., Dzierzewicz Z. Effekten av Gly-Gly-His, Gly-His-Lys och deras kopparkomplex på TNF-α-beroende IL-6-sekretion i normala humana dermala fibroblaster. Acta Poloniae Pharmaceutica. 2012;69(6):1303–1306.
9. Pickart L., Vasquez-Soltero J. M., Margolina A. GHK och DNA: återställa den mänskliga genomen till sin hälsosamma form. BioMed Research International. 2014;2014:10. doi: 10.1155/2014/151479.151479
10. Wegrowski Y., Maquart F. X., Borel J. P. Stimulering av sulfaterad glykosaminoglycan-syntes genom tripeptid-kopplingen av koppar och glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+. Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
11. Siméon A., Emonard H., Hornebeck W., Maquart F.-X. Tripeptid-kopplingskomplexet glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+ stimulerar expresion av matrixmetallo-proteas-2 hos fibroblastkulturer. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
12. Ehrlich H. Stimulering av hudheling hos immunosupprimerade råttor. Redogörelse från symposiet om kollagen och hudreparation; September 1991; Reims, Frankrike.
13. Siméon A., Wegrowski Y., Bontemps Y., Maquart F.-X. Expression av glykosaminoglykanser och små proteoglykanser i sår: Modulation genom tripeptid-kopparkomplexet glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+. Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
14. McCormack M. C., Nowak K. C., Koch R. J. Effekten av koppertripeptid och tretinoin på tillväxtfaktorproduktion i en serumfri fibroblastmodell. Archives of Facial Plastic Surgery. 2001;3(1):28–32.
15. Buffoni F., Pino R., Dal Pozzo A. Effekten av tripeptid-kopparkomplex på processen av hudskador och på odlade fibroblaster. Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie. 1995;330(3):345–360.
16. Gul N. Y., Topal A., Cangul I. T., Yanik K. Effekterna av topikal tripeptid-kopparkomplex och helium-neonlaser på sårheling hos kaniner. Veterinary Dermatology. 2008;19(1):7–14. doi: 10.1111/j.1365-3164.2007.00647.x.
17. Cangul I. T., Gul N. Y., Topal A., Yilmaz R. Utvärdering av effekterna av den topiska tripeptid-kopparkomplexen och zinkoxid på läkningsprocessen vid öppna sår hos kaniner. Veterinary Dermatology. 2006;17(6):417–423. doi: 10.1111/j.1365-3164.2006.00551.x.
18. Pickart L. Metod för att använda koppar(II)-haltiga föreningar för att påskynda sårheling. 1992, http://www.freepatentsonline.com/5164367.html.
19. Arul V., Kartha R., Jayakumar R. En terapeutisk metod för läkning av diabetiska sår med hjälp av biotinylerade GHK-inlagda kollagenmatriser. Life Sciences. 2007;80(4):275–284. doi: 10.1016/j.lfs.2006.09.018.
20. Canapp S. O., Jr., Farese J. P., Schultz G. S., et al. Effekten av det topiska tripeptid-kopparkomplexet på läkning av ischemiska öppna sår. Veterinary Surgery. 2003;32(6):515–523. doi: 10.1111/j.1532-950X.2003.00515.x.
21. Swaim S. F., Vaughn D. M., Kincaid S. A., et al. Effekten av lokalt injicerade läkemedel på läkning av sår på benskydd i hundar. American Journal of Veterinary Research. 1996;57(3):394–399.
22. Campbell J. D., McDonough J. E., Zeskind J. E., et al. En genuttryckssignatur för emfysemrelaterad lungskada och dess reversering genom tripeptidet GHK. Genome Medicine. 2012;4, artikel 67 doi: 10.1186/gm367.
23. Boo S., Dagnino L. Integriner som modulatorer av signalering av transformerande tillväxtfaktor beta i dermala fibroblaster under hudregenerering efter skada. Advances in Wound Care. 2013;2(5):238–246. doi: 10.1089/wound.2012.0394.
24. Lubick K., Radke M., Jutila M. Securinin, en GABAA-receptorantagonist, förbättrar makrofagernas clearance av fas II-viruset C. burnetii: en jämförelse med TLR-agonister. Journal of Leukocyte Biology. 2007;82(5):1062–1069. doi: 10.1189/jlb.0407255.
25. Matalka L. E., Ford A., Unlap M. T. Tripeptidet GHK inducerar programmerad celldöd i SH-SY5Y-neuroblastomceller. Journal of Biotechnology & Biomaterials. 2012;2, artikel 144 doi: 10.4172/2155-952X.1000144.
26. Pollard J. D., Quan S., Kang T., Koch R. J. Effekter av koppertripeptid på tillväxt och uttryck av tillväxtfaktorer hos normala och bestrålade fibroblaster. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
27. Jose S., Hughbanks M. L., Binder B. Y. K., Ingavle G. C., Leach J. K. Förbättrad sekretion av trofiska faktorer genom mesenchymal stam- och stromceller med glycin-histidin-lysin (GHK)-modifierade alginathydrogeler. Acta Biomaterialia. 2014;10(5):1955–1964. doi: 10.1016/j.actbio.2014.01.020.
28. Lau S. J., Sarkar B. Interaktionen mellan koppar(II) och glycyl-L-histidyl-L-lysine, ett tillväxtmodulerande tripeptid från plasma. Biochemical Journal. 1981;199(3):649–656. doi: 10.1042/bj1990649.
29. Perkins C. M., Rose N. J., Weinstein B., Stenkamp R. E., Jensen L. H., Pickart L. Strukturen hos ett kopparkomplex av tillväxtfaktorn glycyl-L-histidyl-L-lysine med en upplösning på 1,1 Å. Inorganica Chimica Acta. 1984;82(1):93–99. doi: 10.1016/s0020-1693(00)82544-x.
30. Freedman J. H., Pickart L., Weinstein B., Mims W. B., Peisach J. Struktur av glycyl-L-histidyl-L-lysine-kopplingen med koppar(II) i lösning. Biochemistry. 1982;21(19):4540–4544. doi: 10.1021/bi00262a004.
31. Pickart L., Lovejoy S. Biologisk aktivitet hos humant plasma-kopperbindande tillväxtfaktor glycyl-l-histidyl-l-lysin. Methods in Enzymology. 1987;147:314–328. doi: 10.1016/0076-6879(87)47121-8.
32. Beretta G., Arlandini E., Artali R., Anton J. M. G., Maffei Facino R. Acroleins sekvestreringsförmåga hos det endogena tripeptidet glycyl-histidyl-lysine (GHK): karakterisering av konjugeringsprodukter genom ESI-MSn och teoretiska beräkningar. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
33. Godet D., Marie P. J. Effekter av tripeptidet glycyl-L-histidyl-L-lysine-kopplingen av koppar på osteoblastcellers spridning, anslutning och fenotyp. Cellular and Molecular Biology (Noisy-le-Grand, Frankrike) 1995;41(8):1081–1091.
34. Kawase M., Miura N., Kurikawa N., et al. Immobilisering av tripeprid-tillväxtfaktorglycyl-L-histidyl-L-lysine på poly(vinylalkohol)-kvartnerad stilbazol (PVA-SbQ) och dess användning som en ligand för hepatocyttanknytning. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 1999;22(9):999–1001. doi: 10.1248/bpb.22.999.
35. Lutsenko S, Bhattacharjee A, Hubbard AL. Maskiner för hantering av koppar i hjärnan. Metallomics. 2010;2(9):596–608. doi: 10.1039/c0mt00006j.
36. Hawk SN, Lanoue L, Keen CL, Kwik-Uribe CL, Rucker RB, Uriu-Adams JY. Moskattjägarens embryon med svag järninlagsförmåga kännetecknas av låg superoxiddimetylaseaktivitet och förhöjda superoxidanioner. Biology of Reproduction. 2003;68(3):896–903. doi: 10.1095/biolreprod.102.009167.
37. Bayer TA, Schäfer S, Simons A, et al. Kosttillskott med Cu stabiliserar aktiviteten hos hjärnans superoxiddimeras 1 och minskar produktionen av amyloid Aβ hos transgena möss med APP23. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2003;100(24):14187–14192. doi: 10.1073/pnas.2332818100.
38. Arul V, Gopinath D, Gomathi K, Jayakumar R. GHK-peptid inkorporerat i kollagenmatris: ett nytt biomaterial för hudskador i råttor. Journal of Biomedical Materials Research. 2005;73(2):383–391. doi: 10.1002/jbm.b.30246.
39. Miller DM, DeSilva D, Pickart L, Aust SD. Effekter av glycylhistidyl-lysyl-chelatat av Cu(II) på ferritinsberoende lipidperoxidation. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1990;264:79–84. doi: 10.1007/978-1-4684-5730-8_11.
40. Alberghina M, Lupo G, La Spina G, et al. Cytoprotective effect of copper(II) complexes against ethanol-induced damage to rat gastric mucosa. Journal of Inorganic Biochemistry. 1992;45(4):245–259. doi: 10.1016/0162-0134(92)84013-d.
41. Beretta G, Artali R, Regazzoni L, Panigati M, Facino RM. Glycyl-histidyl-lysine (GHK) är en hämmare av α,β-4-hydroxy-trans-2-nonenal: en jämförelse med karnosin. Insights into the mechanism of reaction by electrospray ionization mass spectrometry, 1H NMR, and computational techniques. Chemical Research in Toxicology. 2007;20(9):1309–1314. doi: 10.1021/tx700185s.
42. Beretta G, Arlandini E, Artali R, Anton JM, Maffei Facino R. Acrolein-sekvestrerande förmåga hos det endogena tripeptidet glycyl-histidyl-lysine (GHK): karakterisering av konjugeringsprodukter genom ESI-MSn och teoretiska beräkningar. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;47(3):596–602. doi: 10.1016/j.jpba.2008.02.012.
43. Park JR, Lee H, Kim SI, et al. Tripeptid GHK-Cu-komplexet lindrar akuta lungskador orsakade av lipopolysackarider hos möss. Oncotarget, 2016, 7(36): 58405.
44. Gao M, Chen L, Yu H, et al. Diosgenin minskar aktiviteten hos NF-κB p65/p50 och p38MAPK-signaler och minskar den akuta lungskadan som induceras av lipopolysackarid hos möss. International immunopharmacology, 2013, 15(2): 240–245.
45. Liu T, Zhang L, Joo D, et al. NF-κB-signaler i inflammation. Signaltransduktion och riktad terapi, 2017, 2(1): 1–9.
46. Kaminska B: MAPK-signaleringsvägar som molekylära mål för antiinflammatorisk terapi – från molekylära mekanismer till terapeutiska fördelar. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Proteins and Proteomics, 2005, 1754(1–2): 253–262.
47. Yong HY, Koh MS, Moon A. P38 MAPK-hämmare för behandling av inflammatoriska sjukdomar och cancer. Expertutlåtande om prövningsläkemedel, 2009, 18(12): 1893–1905.
48. Zhou XM, Wang GL, Wang XB, et al. GHK-peptidet hämmar bleomycin-inducerad lungfibros hos möss genom att undertrycka TGFβ1/Smad-medierad epithelial-till-mesenchymal-övergång. Frontiers in Pharmacology, 2017, 8: 904.
49. Mukherjee K, Lee A, Zhu L, et al. Sömnbristrelaterad kognitiv försämring hos åldrande möss lindras av rapamycin. Aging Pathobiology and Therapeutics, 2019, 1(1): 05–09.
50. Kalaria RN. Vasculär grund för hjärndegeneration: Försvagade kontrollmekanismer och riskfaktorer för demens. Nutrition Reviews. 2010;68(supplement 2):S74–S87. doi: 10.1111/j.1753-4887.2010.00352.x.
51. Pollard JD, Quan S, Kang T, Koch RJ. Effekter av koppertripeptid på tillväxt och uttryck av tillväxtfaktorer hos normala och bestrålade fibroblaster. Archives of Facial Plastic Surgery. 2005;7(1):27–31. doi: 10.1001/archfaci.7.1.27.
52. Sensenbrenner M, Jaros GG, Moonen G, Meyer BJ. Effekten av konditionerat medium på nervcellers differentiering. Experientia. 1980;36(6):660–662. doi: 10.1007/BF01970123.
53. Lindner G, Grosse G, Halle W, Henklein P. Effekten av ett syntetiskt tripeptid i nervvävnad som odlas in vitro. Zeitschrift für Mikroskopisch-Anatomische Forschung. 1979;93(5):820–828. (Ger).
54. Ahmed MR, Basha SH, Gopinath D, Muthusamy R, Jayakumar R. Initial uppregulering av tillväxtfaktorer och inflammatoriska mediatorer under nervregenerering i närvaro av cellbindande peptider-inlagda kollagenrör. Journal of the Peripheral Nervous System. 2005;10(1):17–30. doi: 10.1111/j.1085-9489.2005.10105.x.
55. Pickart L. Användning av GHL-Cu som läkemedel för sårheling och antiinflammatoriskt medel. United States Patent 4,760,051, juli 1988.
56. Downey D, Larrabee WF, Voci V, Pickart L. Acceleration av sårheling genom användning av glycylhistidyllysyl-Cu(II) Surgical Forum. 1985;36:573–575.
57. Maquart FX, Pickart L, Laurent M, Gillery P, Monboisse JC, Borel JP. Stimulering av kollagensyntes i fibroblastkulturer genom tripeptid-kopparkomplexet glycl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+. FEBS Letters. 1988;238(2):343–346. doi: 10.1016/0014-5793(88)80509-x.
58. Wegrowski Y, Maquart FX, Borel JP. Stimulering av sulfaterad glykosaminoglykan syntes genom tripeptid-kopplingen av koppar och glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+. Life Sciences. 1992;51(13):1049–1056. doi: 10.1016/0024-3205(92)90504-i.
59. Siméon A, Emonard H, Hornebeck W, Maquart FX. Tripeptid-kopparkomplexet glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+ stimulerar expresion av matrixmetallo-proteas-2 hos fibroblastkulturer. Life Sciences. 2000;67(18):2257–2265. doi: 10.1016/s0024-3205(00)00803-1.
60. Siméon A, Wegrowski Y, Bontemps Y, Maquart FX. Expression av glykosaminoglykanser och små proteoglykanser i sår: Modulation genom tripeptid-kopparkomplexet glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+. Journal of Investigative Dermatology. 2000;115(6):962–968. doi: 10.1046/j.1523-1747.2000.00166.x.
61. Kang YA, Choi HR, Na JI, et al. Koppar-GHK ökar integrinuttryck och p63-positivitet hos keratinocyter. Archives of Dermatological Research. 2009;301(4):301–306. doi: 10.1007/s00403-009-0942-x.
62. Lamb J. The Connectivity Map: ett nytt verktyg för biomedicinsk forskning. Nature Reviews Cancer. 2007;7(1):54–60. doi: 10.1038/nrc2044.
63. Iorio F, Bosotti R, Scacheri E, et al. Upptäckt av läkemedlets verkningsmekanism och läkemedelsomplacering baserat på transkriptionsrespons. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2010;107(33):14621–14626. doi: 10.1073/pnas.1000138107.
64. Hong Y, Downey T, Eu KW, Koh PK, Cheah PY. En ‘metastasspreventionsbenägen’ signatur för sporadisk kolorektal cancerpatienter med god förmåga att reparera misstag i tidigt stadium och dess implikationer för möjliga terapier. Clinical and Experimental Metastasis. 2010;27(2):83–90. doi: 10.1007/s10585-010-9305-4.
65. Huang P, Kishida S, Cao D, et al. Neuronal differentiation factor neuroD1 minskar uttrycket för det neuron-avvisande faktorn Slit2 och främjar cellmotilitet och tumörbildning hos neuroblastom. Cancer Research. 2011;71(8):2938–2948. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-10-3524.
66. Fischer A, Sananbenesi F, Mungenast A, Tsai LH. Inriktning på rätt HDAC-typ(er) för behandling av kognitiva störningar. Trends in Pharmacological Sciences. 2010;31(12):605–617. doi: 10.1016/j.tips.2010.09.003.
67. Koch CM, Wagner W. Epigenetisk åldrandesignatur för att bestämma ålder i olika vävnader. Aging. 2011;3(10):1018–1027. doi: 10.18632/aging.100395.