NAD+ on muutunud pikaealisuse uurimise oluliseks valdkonnaks, kuna see on seotud rakkude vananemise ja ainevahetusega ning loomamudelites täheldatud eluea tulemustega. Osal neist uuringutest on oluline teaduslik tähtsus, eriti mehhanistlikul ja prekliinilisel tasandil. Tõendid, mis viitavad sellele, et NAD+ mõjutab loomadel vananemisega seotud signaalradasid, ei ole siiski sama mis tõendid selle kohta, et NAD+ manustamine pöörab inimeste vananemise tagasi. Kogu artiklis hoiame seda eristust silmas ning arutame ka seda, kuidas paastumine sobib kokku NAD+ bioloogiaga, kuna paastumine ja kalorite piiramine kuuluvad kõige paremini iseloomustatud ainevahetuslikesse seisunditesse, mis on seotud muutustega NAD+-sõltuvates signaalradades.
Miks NAD+ tase vanusega langeb?
Vanusega seotud NAD+ taseme langus on üks järjekindlamalt kirjeldatud tulemusi selles uurimisvaldkonnas. Loomamudelites on vanuse edenedes täheldatud NAD+ taseme langust veres ja paljudes kudedes, ning üha sagedamini ka inimestel läbiviidud uuringutes [1]. Selle languse taga võib olla mitu omavahel seotud mehhanismi.
Üks pakutud mehhanismidest hõlmab NAD+ suurenenud tarbimist CD38 poolt. CD38 on NAD+ lagundav ensüüm, mille aktiivsus näib vanusega suurenevat. See võib osaliselt tuleneda senesentsete rakkude kogunemisest, mis on lõpetanud jagunemise, kuid jäävad ainevahetuslikult aktiivseks ja võivad kaasa aidata põletikulise signaalimise tekkele, samuti CD38-d ekspresseerivate immuunrakkude arvu suurenemisest.
Uuringud CD38-geeni puuduvatel hiirtel on näidanud, et CD38 aktiivsus aitab oluliselt kaasa vanusega seotud NAD+ kadule ja sellega kaasnevatele mitokondrite funktsioonihäiretele. Need mõjud näivad hõlmavat vähemalt osaliselt NAD+-sõltuva mitokondriaalse ensüümi SIRT3ga seotud signaalradasid [2].
Teine mehhanism on seotud DNA kahjustuste kuhjumisega ning PARP-ensüümide poolt NAD+ suurema tarbimisega. DNA kahjustused suurenevad aja jooksul ning PARP-valgud osalevad DNA parandamises, kasutades NAD+ substraadina. Seega võib suurem ja pikaajalisem parandustegevus suurendada NAD+ tarbimist [1].
Sellele protsessile võivad kaasa aidata ka vanusega seotud muutused NAD+ sünteesis. Mõned uuringud viitavad sellele, et NAD+ taastumise rada, sealhulgas NAMPT ensüümi poolt reguleeritavad rajad, võib vanusega teatud kudedes väheneda. Kui see nii on, võib NAD+ kättesaadavust piirata kahest suunast: suurema tarbimise ja nõrgema taastumise tõttu [1].
Kokkuvõttes kirjeldavad need mehhanismid bioloogilist olukorda, kus vananevad rakud võivad toota või taastada NAD+ vähem tõhusalt, kulutades samal ajal seda rohkem. Selline kombinatsioon võib osaliselt selgitada NAD+ taseme järkjärgulist langust, mida täheldatakse vananemise käigus.
Kas NAD+ toidulisand võib tõepoolest „pöörata tagasi” mõningaid vananemise näitajaid?
Mõistet „vananemise pöördumine” tuleks eristada konkreetsematest ja mõõdetavatest uurimistulemustest.
Laialt mõistetud vananemise pöördumine, st inimese bioloogiline noorendamine paljudes elundisüsteemides ja vananemisega seotud protsessides, ei ole inimestel läbi viidud kontrollitud kliinilistes uuringutes tõestatud. Ükski avaldatud inimestel läbi viidud uuring ei ole näidanud, et NAD+ manustamine pööraks vananemise tagasi kui kogu organismi hõlmavat nähtust.
Uuringud, mis käsitlevad vananemisega seotud üksikuid biomarkereid ja bioloogilisi protsesse, on keerulisemad.
Loomkatsed on andnud olulisi tulemusi. Ühes mõjukas hiirtega läbi viidud uuringus tõstis nikotinaamid-ribosiid NAD+ taset ja aktiveeris mitokondriaalse reaktsiooni ebaõigesti kokkupakitud valkudele, st rakulise stressireaktsiooni raja. Ravi oli seotud ka mitokondrite ja lihaste tüvirakkude funktsiooni paranemisega ning ravitud loomade eluea pikenemisega [3].
Need tulemused on märkimisväärselt suurendanud huvi NAD+ eelainete vastu vananemise bioloogias. Need pärinevad siiski loomamudelist. Sellist eluea pikenemist ei ole inimeste puhul tõestatud ning uuringud, milles kasutatakse inimese eluiga lõpptulemusena, nõuaksid väga pikki jälgimisperioode.
Varased inimkatsed keskendusid konkreetsematele bioloogilistele ja kliinilistele näitajatele. I faasi uuringus, milles osalesid Parkinsoni tõvega inimesed, suurendas suukaudne nikotinaamid-ribosiid NAD+ taset ajus ning oli seotud väikeste kliiniliste muutustega ning põletiku ja haigusprotsessidega seotud biomarkerite muutustega [4].
See on varajane märk uuringutest, mis viidi läbi konkreetse haigust põdeva populatsiooni hulgas. Seda ei tohiks siiski tõlgendada kui tõendit üldise vananemisvastase toime kohta tervetel inimestel. Tegemist oli varajase faasi uuringuga, mis keskendus eelkõige ohutusele, teostatavusele, bioloogilisele aktiivsusele ja esialgsetele kliinilistele tulemustele, mitte aga tõendamisele, et NR mõjutab vananemisprotsessi või pöörab haiguse tagasi.
Kõige täpsem kokkuvõte on seega see, et NAD+ täiendamine mõjutas loomamudelites mitmeid vananemisega seotud molekulaarseid ja rakulisi protsesse, samas kui varased uuringud inimestel näitasid bioloogilisi mõjusid valitud olukordades. Inimeste puhul ei ole laiemas mõttes vananemise pöördumist kinnitatud.
Paast ja NAD+: milles seisneb tegelikult see seos?
Paastumise ja NAD+ vahelisel seosel on bioloogiliselt usaldusväärsed ja suhteliselt hästi iseloomustatud mehhanistlikud alused.
Üks olulisemaid signaalradasid on AMPK ehk AMP-i poolt aktiveeritav proteiinkinaas. AMPK toimib rakus energiaandurina ja muutub aktiivsemaks, kui energia kättesaadavus rakus väheneb, muu hulgas paastu ja kalorite piiramise ajal.
AMPK aktiveerimine võib mõjutada NAMPT-d, mis on NAD+ taastumise raja oluline ensüüm. NAMPT aktiivsuse suurenemine võib kaasa aidata muutustele NAD+ kättesaadavuses ja NAD+/NADH suhtes, mis omakorda võib mõjutada NAD+-sõltuvaid ensüüme, nagu SIRT1 [1].
See moodustab seotud ainevahetusraja, mis hõlmab raku energiataset, AMPK signaalimist, NAD+ taastumist ja sirtuinide aktiivsust. Kalorite piiramisega seotud loomkatsed on näidanud, et need ainevahetuslikud kohanemised võivad aidata säilitada või muuta NAD+ga seotud ainevahetusradusid, mis muidu vananemisega muutuvad [1].
Seega on sellel seosel tugevamad mehhanistlikud alused kui paljudel üldistavatel väidetel, et teatud elustiili element „suurendab NAD+ taset”.
Nende tulemuste ülekandmisel inimestele jäävad siiski olulised ebakindlused. Suur osa üksikasjalikest mehhanistilistest uuringutest on läbi viidud loomadel või rakumudelitel. Inimestel läbi viidud uuringud, milles mõõdetakse otseselt NAD+ muutusi veres või kudedes enne ja pärast täpselt kontrollitud paastuprotokolle, on endiselt piiratud.
Selle tulemusena ei võimalda praegused andmed kindlaks määrata paastu täpset kestust, sagedust ega kalorite piiramise ulatust, mis põhjustaksid inimestel korduvalt kindlat NAD+ taseme tõusu. Bioloogilise seose suund on küllaltki hästi tõestatud, kuid selle mõju suurus, kestus ja kliiniline tähtsus inimestel on vähem selgelt määratletud.
Sirtuinid, kalorite piiramine ja NAD+ – kuidas need omavahel seonduvad?
Sirtuinid moodustavad olulise mehhanistliku seose kalorite piiramise, paastu ja NAD+ ainevahetuse vahel.
Sirtuinid vajavad substraadina NAD+. Kuna paast ja kalorite piiramine võivad muuta rakkude energia tuvastamise mehhanisme ning NAD+/NADH suhet AMPK-d ja NAMPT-d hõlmavate signaaliteede kaudu, võivad need ainevahetuslikud seisundid mõjutada ka sirtuinide aktiivsust [1].
See seos on üks põhjustest, miks sirtuine on kaloripiirangu bioloogias põhjalikult uuritud. Mitmetes loomamudelites oli kaloripiirang seotud pikema elueaga või teatavate vanusega seotud muutuste tekke hilinemisega. Sirtuine on uuritud kui üht võimalikku vahendajate rühma, mis seob toitainete kättesaadavuse muutusi hilisema mõjuga mitokondrite funktsioonidele, stressitaluvusele, ainevahetusele ja geenide regulatsioonile.
Kontseptuaalselt võib seda seost kokku võtta järgmiselt: kalorite piiramine mõjutab NAD+-ga seotud ainevahetust, mis omakorda võib mõjutada NAD+-st sõltuvat sirtuinide aktiivsust. Seda rada ei tohiks siiski tõlgendada lihtsa lineaarsena ahelana, kus üks sekkumine toob automaatselt kaasa kõik teise sekkumise edasised mõjud.
NAD+ eelainete manustamine võib teatud tingimustes suurendada NAD+ga seotud substraatide kättesaadavust, kuid see ei tähenda, et see taastaks täielikult paastumise või kalorite piiramisega seotud füsioloogilise seisundi.
Paast põhjustab ulatuslikke ainevahetuslikke ja hormonaalseid muutusi, mis hõlmavad insuliini, glükagooni, rasvhapete ainevahetust, ketoonkehade tootmist, AMPK-d, mTOR-i signaalimist, toitainete tuvastamist ja muid signaalradasid. NAD+ taseme tõstmine toidulisandite abil mõjutab vaid osa sellest laiemast bioloogilisest võrgustikust.
Seetõttu ei tohiks NAD+ eelainete manustamist ja paastumist käsitleda üksteist asendavate strateegiatena. Nende toimemehhanismid kattuvad osaliselt, kuid need ei ole bioloogiliselt samaväärsed.
Kuidas NAD+ paistab silma võrreldes teiste pikaealisuse kontekstis propageeritavate ühenditega?
NAD+ eelained kuuluvad mitmesse ühendite rühma, mida vananemise ja pikaealisuse uuringutes sageli käsitletakse. Teised neist on resveratrool, pterostilbeen, metformiin ja rapamütsiin, kuigi need ained toimivad erinevate bioloogiliste radade kaudu ning nende tõendusbaas ja regulatiivne kontekst on väga erinevad.
Resveratrooli ja pterostilbeeni käsitletakse sageli koos NAD+ eelainetega, kuna kõiki neid ühendeid on uuritud sirtuinide bioloogia kontekstis. NAD+ on sirtuinide jaoks vajalik substraat, samas kui resveratrooli ja sellega seotud ühendeid on uuritud seoses nende võimaliku mõjuga sirtuinidega seotud signaalimisele.
See mehhanistlik signaaliteede kattumine on äratanud huvi NAD+ eelainete ja nendega seotud polüfenoolide kombinatsioonide vastu. Üks näide on nikotinamiid-ribosiidi ja pterostilbeeni kombinatsioon, mida on uuritud inimkatsetes [5]. Kuid mehhanistliku põhjenduse olemasolu või kombinatsioonide uurimine ei tõesta veel, et sellised kombinatsioonid pikendavad inimeste eluiga või tagavad laiemat vananemisvastast toimet.
Muud ühendid, mida tavaliselt seostatakse pikaealisuse uuringutega, mõjutavad osaliselt teisi signaalradasid. Metformiini käsitletakse sageli AMPK ja ainevahetuse signaalimise kontekstis, samas kui rapamütsiin toimib peamiselt mTOR-i pärssimise kaudu. Need signaaliteed võivad kattuda NAD+ ja sirtuiinide bioloogiaga, kuid neid ei tohiks käsitleda üksteisega asendatavate mehhanismidena.
Võrreldes paljude ühenditega, mida arutatakse pikaealisuse ärilises kontekstis, on suukaudsed NAD+ eelained, nagu NR ja NMN, on kogunud üha kasvava hulga randomiseeritud, platseeboga kontrollitud uuringuid inimestel, mis näitavad, et need võivad suurendada NAD+ või NAD+ga seotud metaboliitide taset veres ning on üldiselt hästi talutavad uuritud lühi- ja keskpikaajalistes perioodides [6].
Tõendid selle kohta, et need ühendid suurendavad NAD+ biomarkereid, ei ole siiski võrdväärsed tõenditega, et need pikendavad eluiga, ennetavad vananemist või avaldavad inimestel laiaulatuslikku vananemisvastast mõju.
Sama eristus kehtib ka teiste pikaealisusega seotud ühendite puhul. Ühtegi siin käsitletud ainet ei tohiks kirjeldada kui sellist, mis oleks praegu kättesaadavate kliiniliste uuringute põhjal kindlalt tõestanud inimese eluea pikenemist.
Eraldi uurimisvaldkonnaks on lemmikloomad. Ühes randomiseeritud kontrollitud uuringus hinnati uue NAD+ eelkäija ja senolüütilise ühendi kombinatsiooni mõju eakatel koertel, kellel esines kergeid kuni mõõdukaid kognitiivseid häireid. Uuringus näidati statistiliselt olulist seost omanike poolt hinnatud kognitiivsete funktsioonide paranemisega peamise tulemusnäitaja puhul, samuti laiemad muutused sellistes näitajates nagu haavatavus, aktiivsus ja teatatud rahulolu tase, mis olid statistiliselt vähem üheselt mõistetavad [7].
Sellel tulemusel on kliiniline tähtsus, kuna suhteliselt vähe kontrollitud uuringuid on hinnanud NAD+-ga seotud sekkumisi just vananevate lemmikloomade puhul. Tegemist oli siiski üheainsa uuringuga, milles kasutati kombineeritud sekkumist, mitte ainult NAD+'d, ning paranemist täheldati kõigis ravirühmades. Seega viitasid teadlased võimalusele, et osa täheldatud muutustest võisid mõjutada platseeboga sarnased efektid, omanike ootused, suurenenud tähelepanu või lihtsalt uuringus osalemine.
Mida võib realistlikult oodata ja mida mitte?
Praeguste tõendite põhjal võib mitmeid järeldusi pidada suhteliselt hästi põhjendatuks.
NAD+ tase näib vanusega langevat paljudes kudedes ja bioloogilistes tingimustes, ning selle languse selgitamiseks on välja pakutud mitmeid mehhanisme, sealhulgas CD38 aktiivsuse suurenemine, suuremat NAD+ tarbimist DNA parandamisel ning võimalikke muutusi NAD+ sünteesis ja taaskasutusradades [1,2].
Paast ja kalorite piiramine on samuti bioloogiliselt usutav ja suhteliselt hästi tõendatud seos NAD+ ainevahetusega, mis toimub AMPK, NAMPT, NAD+/NADH tasakaalu ja sirtuinide kaudu [1].
Inimestel läbi viidud uuringud on korduvalt näidanud, et suukaudsed NAD+ eelained, nagu NR ja NMN, võivad teatud uurimistingimustes suurendada vereringes ringleva NAD+ või sellega seotud metaboliitide taset [6].
Loomkatsed on samuti näidanud muutusi mitokondrite funktsioonis, tüvirakkude aktiivsuses, rakkude stressireaktsioonis ja elueas pärast NAD+ eelravimite manustamist valitud mudelites [3]. Varased uuringud inimestega on tuvastanud muutusi NAD+ biomarkerites ja uuritavates kliinilistes näitajates teatud haigustega patsientide rühmades [4].
Need tulemused ei tõesta, et NAD+ lisamine pööraks inimeste vananemise tagasi.
Praegused andmed ei näita ka seda, et NAD+ eelainete manustamine pikendaks inimese eluiga ega taastaks kõiki paastu või kalorite piiramise füsioloogilisi mõjusid.
Samamoodi ei tõenda vananemise bioloogiaga seotud biomarkeri taseme tõus iseenesest tervena elatud aja pikenemist, bioloogilise vanuse vähenemist, vananemise aeglustumist ega eluea pikenemist.
See valdkond on endiselt aktiivne ja oluline teadusuuringute suund, kuid praegu puudutavad kõige veenvamad tõendid pigem mehhanisme, biomarkerite muutusi ja valitud eksperimentaalseid tulemusi, mitte aga laiaulatuslikku vananemisvastast toimet inimestel.
Praeguste tõendite piirangud
- Kõige veenvamad tulemused, mis seovad NAD+ täiendamist eluea pikendamise, mitokondrite funktsiooni paranemise ja vananemise bioloogiliste muutustega, pärinevad peamiselt loomkatsetest, eriti hiiremudelitest. Inimestel läbi viidud uuringud on näidanud biomarkerite muutusi ja andmeid ohutuse kohta lühi- ja keskpikas perspektiivis, kuid ei ole kinnitanud eluea pikendamist ega terviklikku vananemisvastast toimet [3].
- Loomade eluea tulemusi ei saa automaatselt üle kanda inimestele, kuna liikidel on erinev ainevahetus, eluiga, haiguste areng, NAD+ bioloogia, annustamine ja katsetingimused.
- Seos paastu, kalorite piiramise ja NAD+ ainevahetuse vahel on mehhanistiliselt põhjendatud, kuid täpne annus-vastuse suhe inimestel on endiselt ebaselge. Hetkel ei ole veel teada, kui pikk ja kui sagedane paast või milline kalorite piiramise tase oleks vajalik, et põhjustada inimestel kindlat muutust NAD+ tasemes [1].
- Inimestel läbi viidud uuringud, milles mõõdetakse otseselt NAD+ taset konkreetsetes kudedes enne ja pärast standardiseeritud paastuprotseduure, on endiselt piiratud, mistõttu ei tohiks mehhanismilisi järeldusi tõlgendada täpseteks paastumise soovitusteks.
- Inimestel läbi viidud uuringute tulemused, mis käsitlevad NAD+ eelainete mõju teatud haigustele, sealhulgas Parkinsoni tõvele, on veel varases staadiumis ning neid ei tohiks tõlgendada kui tõendit laiaulatusliku vananemisvastase toime või haiguse kulgu mõjutava toime kohta [4].
- NAD+ taseme või sellega seotud biomarkerite suurenemine ei tähenda automaatselt bioloogilise vanuse, tervena elatud aja, eluea, füüsilise vormi, kognitiivsete funktsioonide ega haiguste riski paranemist.
- NAD+ eelainete manustamist ei tohiks käsitada bioloogiliselt võrdväärseks paastumisega või kalorite piiramisega, kuna paastumine põhjustab mitmeid ainevahetuslikke, hormonaalseid ja signaalimisega seotud muutusi, mis ulatuvad kaugemale NAD+ ainevahetusest.
- Tõendid selliste kombinatsioonide kohta nagu NR ja pterostilbeen ei kinnita, et NAD+ eelained koos resveratrooli või muude pikaealisusega seotud ühenditega tagaksid additiivse või tugevama vananemisvastase toime [5].
- Võrdlused metformiini, rapamütsiini, resveratrooli või muude pikaealisusega seostatavate ühenditega on mehhanistilist laadi ega tõenda, et need sekkumised tagaksid võrdväärseid või omavahel asendatavaid tulemusi.
- Kõnealune koerte kognitiivsete funktsioonide uuring on üksik kontrollitud uuring, milles kasutati kombineeritud sekkumist, mitte ainult NAD+. Paranemist täheldati ka erinevates ravirühmades, mis raskendab sekkumisele omase mõju tõlgendamist [7].
- Pikaajalised andmed ohutuse ja kliiniliste tulemuste kohta inimestel on endiselt märkimisväärselt piiratumad kui lühiajalised biomarkerite uuringud, eriti kui NAD+ eelühendeid kasutatakse aastaid, mitte nädalaid või kuud.
Vastutusest loobumine
Käesolev artikkel on mõeldud üksnes hariduslikuks otstarbeks ja teadusuuringute kokkuvõtmiseks. See ei kujuta endast meditsiinilist nõu inimestele ega veterinaarnõu loomadele.
NAD+, NAD+ eelained, paast, kalorite piiramine, resveratrool, pterostilbeen, metformiin, rapamütsiin ega muud pikaealisuse kontekstis käsitletud ühendid ei tohiks tõlgendada kui tõestatud meetodeid vananemise pöördumiseks, inimese eluea pikendamiseks, haiguste ennetamiseks või haiguste ravimiseks, välja arvatud juhul, kui on olemas konkreetne heakskiidetud näidustus ja asjakohased kliinilised tõendid.
NAD+ ja selle eelained ei tohiks esitada kui FDA või EMA poolt heaks kiidetud vananemisvastaseid ravimeetodeid ega kui ravimeetodeid, mille puhul on tõestatud inimese eluea pikendamine.
Paastumine ja kalorite piiramine ei sobi kõigile ning võib mõnedel inimestel kaasa tuua täiendavaid riske. Rasedad või imetavad naised, diabeetikud, glükoositaset alandavaid ravimeid võtvad inimesed, isikud, kellel on anamneesis söömishäired, alakaalulisus, teatud krooniliste haigustega või ravimeid võtvatel inimestel, kelle ravimite toime sõltub toidu tarbimisest, tuleks paastumist või märkimisväärset kalorite piiramist arutada kvalifitseeritud tervishoiutöötajaga.
Enne uue toidulisandi, paasturežiimi, ravimi või muu vananemisega seotud protsesse mõjutava meetme kasutamise alustamist tuleks konsulteerida kvalifitseeritud tervishoiutöötajaga. Lemmikloomadega seotud küsimuste puhul tuleks konsulteerida kvalifitseeritud veterinaararstiga.
Viited
[1] Covarrubias, A. J., Perrone, R., Grozio, A. ja Verdin, E. (2021). NAD+ ainevahetus ja selle roll vananemise käigus toimuvates rakulistes protsessides. *Nature Reviews Molecular Cell Biology*, 22(2), 119–141. https://doi.org/10.1038/s41580-020-00313-x
[2] Camacho-Pereira, J., Tarragó, M. G., Chini, C. C. S., Nin, V., Escande, C., Warner, G. M., Puranik, A. S., Schoon, R. A., Reid, J. M., Galina, A., & Chini, E. N. (2016). CD38 määrab vanusega seotud NAD-i languse ja mitokondriaalse düsfunktsiooni SIRT3-st sõltuva mehhanismi kaudu. *Cell Metabolism*, 23(6), 1127–1139. https://doi.org/10.1016/j.cmet.2016.05.006
[3] Zhang, H., Ryu, D., Wu, Y., Gariani, K., Wang, X., Luan, P., D’Amico, D., Ropelle, E. R., Lutolf, M. P., Aebersold, R., Schoonjans, K., Menzies, K. J. ja Auwerx, J. (2016). NAD+ taseme taastamine parandab hiirte mitokondrite ja tüvirakkude funktsiooni ning pikendab nende eluiga. *Science*, 352(6292), 1436–1443. https://doi.org/10.1126/science.aaf2693
[4] Brakedal, B., Dölle, C., Riemer, F., Ma, Y., Nido, G. S., Skeie, G. O., Craven, A. R., Schwarzlmüller, T., Brekke, N., Diab, J., Sverkeli, L., Skjeie, V., Varhaug, K., Tysnes, O.-B., Peng, S., Haugarvoll, K., Ziegler, M., Grüner, R., Eidelberg, D., & Tzoulis, C. (2022). NADPARK-uuring: nikotinamiidribosiidi lisandamise randomiseeritud I faasi uuring Parkinsoni tõve puhul. *Cell Metabolism*, 34(3), 396–407.e6. https://doi.org/10.1016/j.cmet.2022.02.001
[5] Dellinger, R. W., Santos, S. R., Morris, M., Evans, M., Alminana, D., Guarente, L. ja Marcotulli, E. (2017). NRPT (nikotinamiid-ribosiid ja pterostilbeen) korduv manustamine suurendab inimestel NAD+ taset ohutult ja püsivalt: randomiseeritud, topeltpime, platseebokontrollitud uuring. *npj Aging and Mechanisms of Disease*, 3, 17. https://doi.org/10.1038/s41514-017-0016-9
[6] Yi, L., Maier, A. B., Tao, R., Lin, Z., Vaidya, A., Pendse, S., Thasma, S., Andhalkar, N., Avhad, G., & Kumbhar, V. (2022). β-nikotinamiidmononukleotiidi (NMN) toidulisandi tõhusus ja ohutus tervetel keskealistel täiskasvanutel: randomiseeritud, mitmekeskuseline, topeltpime, platseebokontrollitud, paralleelsete rühmade ja annusest sõltuv kliiniline uuring. *GeroScience*, 45, 29–43. https://doi.org/10.1007/s11357-022-00705-1
[7] Simon, K. E., Russell, K., Mondino, A., Yang, C.-C., Case, B. C., Anderson, Z., Whitley, C., Griffith, E., Gruen, M. E., & Olby, N. J. (2024). Juhuslikult valitud, kontrollitud kliiniline uuring näitab, et senolüütikumit ja NAD+ eelainet koos saavate vanemate koerte omanike hinnangul on kognitiivne funktsioon paranenud. *Scientific Reports*, 14, 12399. https://doi.org/10.1038/s41598-024-63031-w